ТОП 10:

СХЕМА МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ХОЛЕРЫ



МАТЕРИАЛЫ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: рвотные массы, испражнения, желчь, трупный материал (проба из стенки тонкого кишечника, содержимое желчного пузыря), вода, пищевые продукты, гидробионты, мухи, сточные воды

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ: ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ, БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ (ОСНОВНОЙ), СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ

Экспресс-методы Бактериологический метод
1. РИФ с использованием флюоресцирующих холерных сывороток (О1 и О139). 2. РИВ (иммобилизация вибрионов холерными сыворотками О1, О139 и типовыми холерными фагами). 3. РНГА и РТНГА. 4. ИФА. 5. ПЦР. I ЭТАП:Посев в щелочную 1% пептонную воду (среда обогащения). Инкубация при 370С в течение 5-6 часов. II ЭТАП (через 6-8 часов от начала исследования): 1. Изучение характера роста (наличие нежной пленки). 2. Мазок, окраска по Граму, микроскопия. 3. Приготовление препарата «висячая» или «раздавленная» капля. 4. РА на стекле с холерными сыворотками О1 и О139. 5. При отрицательных результатах исследования нативного материала осуществляется постановка реакций: РИФ, РИВ, РНГА, ПЦР с использованием пептонной воды. 6. Постановка нитрозоиндоловой пробы (предварительный положительный ответ). 7. Посев на 2-ю пептонную воду. Инкубация при 370С 6-7 часов. 8. Посев на щелочной питательный агар. Инкубация при 370С 12 часов. III ЭТАП(через 12-14 часов от начала исследования): 1. Изучение характера роста на 2-й пептонной воде. 2. Посев из 2-й пептонной воды на щелочной агар. Инкубация при 370С 12 часов. 3. Изучение характера роста на щелочном питательном агаре. 4. Отбор подозрительных колоний. 5. Мазок из подозрительных колоний, окраска по Граму, микроскопия. 6. Приготовление препарата «висячая» капля. 7. Развернутая РА с сыворотками типа Огава и Инаба. 8. Посев на среды Олькеницкого и Ресселя. Инкубация при 370С 12 часов. Посев на щелочной питательный агар. Инкубация при 370С 10-12 часов.   1. Изучение характера роста. 2. Отбор подозрительных колоний. 3. Мазок из подозрительных колоний, окраска по Граму, микроскопия. 4. РА на стекле с холерными сыворотками О1, Огава, Инаба, О139. 5. Пересев на среды Олькеницкого и Ресселя. Инкубация при 370С 12 часов (через 12-14 часов от начала исследования): 1. Изучение характера роста. 2. Контроль частоты культуры (визуально и микроскопически) 3. Идентификация выделенной культуры: - РА на стекле с холерными сыворотками О1, Огава, Инаба, О139 (при отрицательных результатах проводят слайд – агглютинацию с холерной сывороткой РО (RO); - посев в «пестрый» ряд для определения группы Хейберга; - постановка оксидазного теста; - проведение гексаминовой пробы; - проведение реакции Фогеса-Проскауэра; - посев на кровяной агар; - РА куриных эритроцитов; - развернутая РА с О-сывороткой и с типовыми агглютинирующими сыворотками. - фаготипирование. - посев на среду с полимиксином. - ПЦР с целью выявления гена, кодирующего выработку холерного энтеротоксина. - определение типа расщепления глюкозы на среде Хью-Лейфсона (OF – тест; О – окисление, F - ферментация в аэробных и анаэробных условиях); - определение отношения к аминокислотам (лизин, орнитин, аргинин).   4. Определение чувствительности к антибиотикам.
IV ЭТАП(через 18-24 часов):См. III этап посевов на щелочной питательный агар.    
V ЭТАП:через 36-48 часов от начала исследования Учет полученных результатов. Предварительный положительный ответ может быть выдан через 5-6 часов. Окончательный ответ через 18-48 часов.  
Серодиагностика
1. РА с парными сыворотками. 2. РВА (реакция определения вибриоцидных антител) 3. РНГА с эритроцитарным холерным диагностикумом. 4. РНГА с эритроцитарным холерным энтеротоксическим диагностикумом (ЭХЭД). 5. Определение токсин-нейтрализующих антител при помощи липосомального эритроцитарного диагностикума (ЛХЭД). 6. Для ретроспективной диагностики: РНГА, РТНГА, реакция лизиса, ИФА  

 


 

 







Последнее изменение этой страницы: 2016-12-16; Нарушение авторского права страницы

infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 100.26.182.28 (0.003 с.)