Схема микробиологической диагностики стафилококковой инфекции

 

МАТЕРИАЛЫ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, гной из абсцессов, гнойное и серозное отделяемое воспалительных очагов, ран, жидкость из серозных полостей, СМЖ, мокрота, слизь из слизистых оболочек зева и носа, моча; при подозрении на пищевое отравление — пищевые продукты, рвотные массы, промывные воды желудка, смывы с рук персонала и предметов окружающей среды.

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ: бактериологический (основной), биологический, серологический, аллергологический, молекулярно-генетический, экспресс - диагностика

 

Бактериоскопический метод	Бактериологический метод	Серодиагностика
Мазок из исследуемого материала, окраска по Граму, микроскопия	I ЭТАП:Посев на питательные среды: а) солевой бульон; б) ЖСА, МЖСА (инкубация при 37^○С, 24 – 48 ч) II ЭТАП: 1. Описание характера роста, учет лецитиназной активности, наличие пигмента. 2. Отбор подозрительных колоний. 3. Мазок из подозрительных колоний, окраска по Граму, микроскопия. 4. Посев на скошенный агар (МПА, ЖСА) (инкубация при37^○С, 24 ч) III ЭТАП: 1. Контроль чистоты культуры: а) визуально; б) микроскопически. 2. Идентификация выделенной культуры: а) тест на каталазу, ацетилметилкарбинол; б) плазмокоагулазная активность; в) посев на чашку с кровяным агаром для выявления гемолитических свойств; г) ферментация глюкозы и маннита в анаэробных условиях; д) определение ДНК-азной активности; е) для идентификации St. epidermidis и St. saprophyticus проводятся дополнительные тесты на щелочную фосфатазу и устойчивость к новобиоцину. 3. Фаготипирование (22 фаготипа S. aureus: 1 группа – 29, 52, 52А, 79, 80, 52/52А, 52/52А/80/81; 2 – 3А, 3В, 3С, 55, 71, 3А/3В/3С, 3С/55; 3 – 6,7, 42Е, 47, 53, 54, 75, 6/7/47/53/54/75/77; 4 – 42D). 4. Определение чувствительности к антибактериальным препаратам: а) нерезистентные к метициллину штаммы: к пенициллину, амоксициллину, оксациллину, цефуроксиму, аксетилу, цефазолину, гентамицину, эритромицину, азитромицину, рокситромицину, ванкомицину, левофлоксацину, клиндамицину, джозамицину, спирамицину, мидекамицину, ципрофлоксацину, офлоксацину б) метициллин-резистентные (MRSA, MRSE) штаммы: к оксациллину (ORSA, ORSE), ванкомицину (VRSA, VRSE), цефалоспоринам III поколения, ингибиторзащищенным бета-лактамам, фузидину, тетрациклину, ципрофлоксацину, триметоприму 5. лизоцимная активность 6. Энтеротоксинотипирование (21 тип: SEA, SEB, SEC, SED, SEE, SHE, SEG, SEI, SEJ, SEK, SEL, SEM, SEN, SEO, SEP, SEQ, SER, SES, SET, SEU, SEV) 7. Выявление ТСТШ (токсин синдрома токсического шока) IV ЭТАП:Учет полученных результатов. Окончательный ответ.	Кровь Посев во флакон с сахарным МПБ в соотношении 1:10. Высев на ЖСА. Далее – продолжение исследования по схеме бактериологического метода, начиная со 2-го этапа.   Смывы с рук и предметов внешней среды Посев во флакон с тиогликолевым бульоном или мясопептонным бульоном с 7,5% хлоридом натрия. Высев на ЖСА. Далее – продолжение исследования по схеме бактериологического метода, начиная со 2-го этапа.   Биологический Подкожная, внутрибрюшинная, интраорбитальная, внутривенная, интраназальная модели     Молекулярно-генетический ПЦР, рестрикционный анализ, риботипирование, ДНК-ДНК гибридизация, РНК-ДНК гибридизация Экспресс-диагностика ПЦР, ко-агглютинация, латексная агглютинация, РИФ	Серологическая диагностика направлена на выявление титра антител к стафилококкам в сыворотке крови больного. Диагностическим считается нарастание титра антител через 7-10 суток при иследовании парных сывороток. Применяется для диагностики гнойно-септических процессов: - воспалительные заболеваниях легких; - флегмоны, абсцессы, фурункулы, ангина; - перитонит, сепсис, пиелонефрит; - остеомиелит; - пищевые отравления   РНГА, ИФА, латекс-агглютинация, ко-агглютинация, РИФ, РИА Аллергологический Кожно-аллергическая проба с стафилококковыми аллергенами (тейхоевая кислота – ГНТ-1тип реакции при экземе и бронхиальной астме; ГЗТ), ГЗТ in vitro, Ig E, реакция лейкоцитолиза.

 

 

ТАБЛИЦА: Межвидовая дифференциация возбудителей стафилококковых инфекций

Виды стафилококков	Свойства
Коагуляция плазмы	Гемолиз	Продукция	Анаэробная ферментация
ДНК-азы	фосфатазы	лецитиназы	глюкоза	маннит
St. aureus	+	+	+	+	+	+	+
St. epidermidis	-	-	-	+	-	+	-
St. saprophyticus	-	-	-	-	-	-	-