Оценка гемолиза по цветному стандарту

Показатели	Пробирки
Количество гемо лизированной жидкости, мл	0,1	0,2	0,3	0,4	0,5	0,6	0,7	0,8	0,9
Количество воды, мл	0,9	0,8	0,7	0,6	0,5	0,4	0,3	0,2	0,1
Содержание Нв в цветном стандарте, г%	0,18	0,36	0,54	0,72	0,90	1,08	1,26	1,44	1,62
Цвет	светло-розовый	розовый	Розово-красный	красный
Степень гемолиза	Слабый	явственный	Сильный	Очень сильный

 

Содержание общего белка в крови рыб (рефрактометрический метод). Содержание белка в сыворотке крови менее 2% - показатель неудовлетворительного состояния организма. Уменьшение его отмечается в ответ на воздействие низких температур и некоторых токсинов. Однако низкие значения содержания белка в крови могут быть и при нормальном ходе физиологических процессов, например, у особей в посленерестовый период (табл.53).

Оборудование и реактивы: рефрактометр, бумага фильтровальная, вата, палочка стеклянная, смесь спирта и эфира для обезжиривания (1:1).

Ход определения. Раскрывают камеру с призмами, ополаскивают их водой, промокают фильтровальной бумагой, ватой и протирают спиртоэфирной смесью. Показатель преломления дистиллированной воды на рефрактометре при 20^о равен 1,333. Это значит, что прибор установлен и работает правильно. Сыворотку крови получают, такописано выше.

Наносят на призму каплю исследуемой сыворотки, закрывают камеру и делают отсчет. Настройку прибора сбивают и определение повторяют дважды. Используют среднюю величину отсчета, до которой определяют содержание белка, пользуясь табл.12. Если температура от­личается от 20⁰С, то вводят поправку – 0,0001 на каждый градус (поправку вычитают при более низкой температуре и прибавляют при более высокой). Результаты могут быть искажены за счет веществ сыворотки с высоким показателем преломления. Например, липидов или за счет гемолиза.

При наличии гемолиза необходимо из результата определенияобщего содержания белка вычесть экспериментально установленную поправку на степень гемолиза: при «+» - 0,6-0,7; при «++» - 1,2-1,4; сильно гемолизированная сыворотка для определения общего содержания белка использована быть не может.

Таблица 53

Содержание общего белка в сыворотке крови прудовых рыб, % *

Возраст, Масса, г	Условия, особенности	Белок, %
Карп
0+	Нормальное состояние, лето	³3,0
Плохие условия, лето	£2,5
Нормальное состояние, осень	3,0-4,5
В конце зимовки	1,5-1,7
1+	Плохие условия, весна	£2,5
Хорошие условия, весна	³2,8
Хорошие условия, лето	³3,5
Плохие условия, бетонные садки, лето	£2,8
	Голод (бетонные садки): октябрь-май	3,1
Октябрь-июнь	2,1
Октябрь-август	1,4
Больной краснухой, июль	0,6
	До нереста	5,7
После нереста	4,1
Пестрый толстолобик
1+	Нормальное состояние, лето	3,6±0,1
4+	После введения гормона	1,7-3,0
Производитель с плохой икрой	0,7-1,0
Белый толстолобик
1+	Нормальное состояние, лето	4,6±0,2
45 дней корм сине-зеленые водоросли	1,9±0,2
Форель радужная
10-15	Нормальное состояние, зима	2,6
80-150	Нормальное состояние, зима	3,8
25-30	Нормальное состояние, июль	5,4
60-80	Нормальное состояние, осень	6,2
	Нормальное состояние, осень	7,8
	60 дней голодания	1,7
	60 дней голодания	2,1
Производитель	Перед созреванием	10,0

*по системе единиц (СИ) выражается в г/л. Например, 3,0 г% по старой системе соответствует 30 г/л по новой.

Определение белковых фракций (альбуминов и глобулинов) рефрактометрическим методом. Уменьшение альбуминов в сыворотке кровинаблюдается при дистрофии. Повышение глобулина - при инфекционных заболеваниях. У сеголетков и двухлетков карпов с хорошей кондицией альбуминов не менее 22%.

Оборудование и реактивы: рефрактометр, центрифуга, водяная баня, аммоний сернокислый - (NН₄)₂SO₄, центрифужные пробирки.

Ход определения: готовят насыщенный раствор сернокислого аммония путем растворения 80 г его кристаллов в 100 мл горячей дистиллированной воды, фильтруют и для перенасыщения колбу ставят на 15-20 мин в воду с температурой 18-20^оС. Чтобы убедиться в том, что насыщенный раствор приготовлен правильно, из него готовят полунасыщенный раствор путем смешивания с дистиллированной водой в равных соотношениях (1:1). Показатель преломления правильно приготовленного раствора должен быть равен 1,370. Если такого значения не получается, то насыщенный раствор следует приготовить заново.

Смешивают полученную сыворотку крови с насыщенным раствором (NН₄)₂SO₄ 1:1 (точно), смесь центрифугируют 8-10 мин. Цетрифужные пробирки должны быть закрыты резиновыми пробками во избежание испарения золы, которое может привести к завышенным данным (удобно пользоваться предлагаемыми нами стандартными полихлорвиниловыми трубочками). После центрифугирования глобулины находятся в осадке, над ними в прозрачной жидкости - альбумины и (NH₄)₂SO₄. Помещают 1-2 капли центрифугата в камеру прибора и учитывают показатель преломлений - n.. Затем измеряют показатель преломления цельной сыворотки крови – n₂ (табл.54).

Расчет содержания альбуминов и глобулинов. Содержание альбуминов (%) в исследуемой пробе находят по табл. 55, в которой представ­лен также показатель преломления дистиллированной воды, альбуминов и небелковых веществ – n_3. Содержание глобулинов устанавливают расчетом. Для этого из показателя преломления цельной сыворотки крови – n₂ вычитают показатель n₃, а полученную разность делят на 0,00229 (показатель 1%-аого раствора глобулинов) и получают про­центное содержание глобулинов.

Отношение содержания альбуминов к содержанию глобулинов показывает белковый коэффициент: К= А/Г

Отмечается, что увеличение количества глобулинов и уменьшение количества альбуминов в сыворотке крови сопутствует ускорению СОЭ.

 

Таблица 54