Количественное определение белка в сыворотке крови биуретовым методом

Принцип метода. Реакция основана на том, что в щелочной среде в присутствиеи солей меди белки дают фиолетовое окрашивание, обусловленное образованием комплекса ионов меди с пептидной группировкой. Интенсивность окраски комплекса, которая зависит от количества белка в исследуемой пробе, измеряется на фотоэлетроколориметре (ФЭКе).

Ход работы. К 5 мл биуретового реактива, представляющегособойсмесь сульфата меди, сегнетовой соли, йодистого калия и щелочи, добавить 0,1 мл исследуемого белка. Через 30 минут пробу колориметрировать на ФЭКе в кювете шириной 10 мм при зеленом светофильтре против контроля, который готовят путем добавления к 5мл биуретового реактива 0,1 мл 0,9% NaCI. Количество белка в растворе определить по калибровочному графику.

Результат.

Вывод.

 

Причины развития гипопротеинемий:

- Недостаточное поступление белка с пищей (недоедание, голодание, опухоли, сужение пищевода, нарушение пищеварения и всасывания белка в ЖКТ. Это алиментарная гипопротеинемия.

- Понижение процессов биосинтеза белка (различные заболевания, лечение, приводящее к нарушению белоксинтезирующей функции).

- Потеря белков при острых и хронических кровопотерях, при увеличении проницаемости, при кровоизлияниях, отеках.

- Дефектопротеинемия, т.е. иногда встречающееся у больных, как правило, наследственные, нарушения синтеза отдельных белков. Например, врожденное отсутствие или недостаточное образование церулоплазмина в крови при болезни Вильсона.

- Потеря белка с мочой при патологии почек.

 

Причины развития гиперпротеинемий:

Следует заметить, что гиперпротеинемия – явление сравнительно редкое. Кратковременная относительная гиперпротеинемия наблюдается при сгущении крови из-за значительных потерь жидкости (профузные поносы, неукротимая рвота, усиленное потоотделение).

Незначительная абсолютная гиперпротеинемия наблюдается при токсических отравлениях РЭС, в клетках которой синтезируются глобулины. Стойкая гиперпротеинемия до 120 г/л и выше встречается при миеломной болезни, когда в плоских костях черепа появляются дополнительные очаги образования «ненормальных», патологических белков-парапротеинов.

 

Домашнее задание

Решить ситуационные задачи

 

1. Какой ионообменник вы будете использовать для выделения из тканевых белков гистонов и каким элюирующим буфером можно снять такой белок? Объясните почему?

 

2. У больного в послеоперационном периоде содержание общего белка – 52 г/л, на долю альбуминов приходится 33%. К каким осложнениям это может привести? Какие лечебные мероприятия целесообразно провести?

3. Ребенок перенес инфекционное заболевание. Какие изменения в составе белковых фракций крови можно ожидать?

4. У больного обнаружены в плазме крови “патологические белки”, не существующие в нормальных условиях. Как называются эти состояния? О каком заболевании говорит появление миеломных белков?

5. У больного с хроническим заболеванием почек количество белка в сыворотке крови составило 55 г/л, а альбуминов – 28 г/л. Как называется подобное состояние? Каковы его причины?

 

ПРИЛОЖЕНИЕ ДЛЯ ПЕДИАТРИЧЕСКОГО ФАКУЛЬТЕТА

Содержание белка в сыворотке в норме у новорожденных (52 – 72 г/л) и грудных детей (36 – 65 г/л).

1. Острые инфекционые заболевания сопровождаются увеличением α₁- и α₂-глобулинов при нормальном или слегка увеличенном количестве γ- глобулинов. Альбумины обычно немного уменьшены, а общий белок нормален.

2. Хронические воспалительные процессы, в отличие от острых, характеризуются увеличением γ- глобулинов и нормальным или слегка увеличенным количеством α₁- и α₂-глобулинов. Количество альбуминов немного уменьшено, общий белок – в пределах нормы. Таким образом, для острого воспалительного процесса характерна гиперальфаглобулинемия, а для хронического – гипергаммаглобулинемия.

3. Среди относительных гиперпротеинемий главное место занимает гиперпротеинемия при обезвоживании в раннем детском возрасте (недостаточный прием жидкости, токсикозы, понос, рвота).

4. При токсикозах изменения общего количества белка в сыворотке похожи на изменения при обыкновенном обезвоживании.

5. Среди заболеваний почек острые и хронические нефриты протекают по типу острых и хронических воспалительных процессов. Однако в этом случае степень увеличения α - глобулинов зависит не только от остроты процесса, но и от степени нефротического компонента.

Характерны изменения протеинограммы, наступающие при чистых нефрозах. Количество альбуминов резко уменьшено, в то время как α₂-глобулины сильно увеличены. Количество

α₁-глобулинов обычно уменьшено. Общий белок резко снижен.

6. При поражениях печеночных клеток они не могут участвовать в образовании достаточного количества альбумина и фибриногена, вследствие чего уровень последних в крови уменьшается. Поражение паренхимы печени сопровождается реактивным раздражением ретикуло-эндотелиальной системы, что приводит к увеличению β и γ- -глобулинов в плазме.

7. При острых заболеваниях печени (острых гепатитах, желтухах и др.) снижение альбуминов незначительно и компенсируется увеличением β- и γ- глобулинов, так что общее количество белков в плазме значительно не снижается.

8. При хроническом заболевании печеночной ткани (циррозах) гипоальбуминемия ярко выражена и не может быть компенсирована существующей в то же время гиперглобулинемией; таким образом, налицо значительное уменьшение общего количества белка в плазме (гипопротеинемия).

9. Ряд хронических заболеваний желудочно-кишечного тракта, которые протекают с продолжительными поносами (врожденный инфантилизм кишечника, хронические энтериты и др,) сопровождаются гипопротеинемией. Продолжительная потеря белков, попадающих из воспалительной слизистой оболочки в испражнения, приводит к уменьшению протеинов в крови, причем это происходит за счет альбуминов.

10. Из заболеваний крови следует отметить острые лейкозы. При этом заболевании картина не типична. Чаще встречается увеличение α2- и γ- глобулинов. Лимфогрануломатоз протекает по типу воспалительных процессов.

11. Анальбуминемия Бенгольда представляет собой врожденное наследственное заболевание, характеризующееся полным отсутствием альбуминов.

Подобным заболеванием является и так называемая конституциональная афибриногенемия – врожденное заболевание, напоминающее гемофилию, при котором в крови полностью отсутствует фибриноген. Кровь такого ребенка не свертывается. Среди этой группы наибольший интерес представляют агамма- и гипогаммаглобулинемия. Отсутствие γ-глобулинов связано с отсутствием иммунных тел, этим объясняется уменьшение сопротивляемости организма различным инфекциям и ряд других симптомов этого заболевания.

Описаны и другие формы агамма- или гипогаммаглобулинемии, как например, идиопатическая форма у подростков и взрослых, симптоматическая форма при различных заболеваниях (нефрозах, лейкозах, миеломе и др.), транзиторная форма у грудных детей и пр.

Следует отметить, что грудной ребенок более склонен к гипогаммаглобулинемии, чем взрослый. Гипоглобулинемия грудного возраста встречается у недоношенных детей, при водянке головного мозга, менингите, воспалении среднего уха и др.

12. В грудном возрасте на первом месте стоит гипопротеинемия недоношенного ребенка. Кривая протеинемии у него движется параллельно кривой его веса.

13. Гипопротеинемия наблюдается также при хронических гнойных процессах и дерматозах, при обширных ожогах, во время шока и коллапса, при недоедании в раннем детском возрасте, эскудативном дерматозе, атрофии, при некоторых формах спазмофилии, при фиброзном кистозном панкреатите.

 

СПИСОК ОСНОВНОЙ ЛИТЕРАТУРЫ:

1. Лекции по биохимии.

2. Северин Е.С. Биохимия. М. 2003

3. Березов Т.Т., Коровкин В.Ф. Биологическая химия 2000

4. Строев В.А. Биологическая химия. 1986.

5. Николаев А.Я. Биологическая химия.1989.

6. Северин Е. С. Биохимия. Краткий курс с упражнениями и задачами. М. 2001

СПИСОК ДОПОЛНИТЕЛЬНОЙ ЛИТЕРАТУРЫ:

1. Страйер Л. Биохимия М. Мир 1984

2. Уайт А., Хенглер Ф. Смит Э. и др. Основы биохимии. М. 1981

3. Марри Р. Греннер Д. Биохимия человека. 1993.

 

Занятие 4