Осаждение белков органическими кислотами

Принцип метода. Ряд органических кислот вызывает денатурацию белков. Наиболее широко в различных биохимических исследованиях для осаждение белков применяются трихлоруксусная (ТХУ) и сульфосалициловая кислоты (ССК). В медицине применяют для обнаружения белка в моче.

Ход работы. Налить в пробирку 1-2 мл раствора белка и добавить равный объем 5% ТХУ.

Результат:

Вывод:

Ход работы. К 0,5 -1 мл раствора белка добавить 5-6 капель 20 % ССК

Результат:

Вывод:

 

Осаждение белков концентрированными минеральными кислотами

Многие концентрированные минеральные кислоты вызывают денатурацию белка. Осаждение белков азотной кислотой лежит в основе пробы Геллера, широко используемой в практике обнаружения белка в моче.

Ход работы. К 0,5 -1 мл концентрированной азотной кислоты осторожно по стенке наслоить равный объем раствора белка. На границе наслаивания отметить образование белого кольца.

Результат:

Вывод:

Домашнее задание

Решить ситуационные задачи и ответить на вопросы

1. С целью стерилизации различных объектов их обрабатывают формальдегидом. Что происходит при этом с белками?

 

1. Препараты, содержащие березовый деготь, обладают выраженным антимикробным действием. Предположите возможный механизм действия, исходя из того, что березовый деготь содержит в своем составе фенол.

 

1. Для профилактики инфекционных заболеваний контактным лицам вводят препарат из крови рековалесцентов, содержащих антитела к данному заболеванию. Этот препарат называется гамма-глобулин. Как его получить из сыворотки крови? Как очистить от примесей?

 

 

1. Вам дали две пробирки с осажденным белком. Известно, что один осадок получен при действии сернокислого аммония, а второй – после добавления ТХУ. Как отличить их? В чем сходство и в чем отличие при действии этих агентов на белок?

 

 

5. Имеются пробирки с растворами: I концентрированной азотной кислоты

II10% трихлоруксусной кислоты

III СuSO4 в10% NaOH

Опишите, какие процессы произойдут в каждой пробирке при добавлении в них раствора белка. Какие из этих реакций находят практическое применение?

 

Решить тестовые задания

Выберите правильный ответ.

Полярной незаряженной аминокислотой является:

1- изолейцин

2 - аспартат

3- глутамат

4- метионин

5- серин

2. Выберите правильные ответы.

Неполярные аминокислоты

1- изолейцин

2 - аспартат

3 - глутамат

4 - метионин

5- серин

6- триптофан

3. Выберите правильные ответы.

Аминокислота, располагающаяся преимущественно внутри белковой глобулы:

1- глицин

2 – аспарагиновая кислота

3 – лейцин

4 – аргинин

5 – серин

Выберите правильный ответ.

Аминокислота, способная образовывать ионую связь с лизином

1 - глицин

2 – аспарагиновая кислота

3 – лейцин

4 – аргинин

5 – серин

Выберите правильный ответ.

Первичная структура белка – это

1 - аминокислотный состав полипептидной цепи

2 - линейная структура полипептидной цепи, образованная ковалентными связями между аминокислотными остатками

3 - порядок чередования аминокислот в полипептидной цепи, соединенных пептидными связями, образованными a- карбоксильной группой одной амнокислоты и a-аминогруппой другой аминокислоты.

4 - структура полипептидной цепи, стабилизированная водородными связя

6. Выберите правильный ответ.

Вторичная структура белка:

а) пространственное, трехмерное расположение полипептидной цепи, фиксированной межрадикальными связями, гидрофобными взаимодействиями;

б) порядок чередования a-аминокислот в полипептидной цепи, соединенных пептидными связями

в) объединение в определенном порядке двух или большего числа протомеров в молекуле олигомерного белка посредством нековалентных связей

д) способ укладки полипептидной цепи в виде a-спирали

Выберите правильный ответ.

Третичная структура белка:

а) пространственное, трехмерное расположение полипептидной цепи, фиксированной межрадикальными связями;

б) порядок чередования a-аминокислот в полипептидной цепи, соединенных пептидными связями;

в) объединение в определенном порядке двух или большего числа протомеров в молекуле олигомерного белка посредством нековалентных связей и взаимного узнавания комплементарных контактных поверхностей;

д) способ укладки полипептидной цепи в виде a-спирали

Выберите правильный ответ.

Четвертичная структура белка:

а) пространственное, трехмерное расположение полипептидной цепи, фиксированной межрадикальными связями;

б) порядок чередования a-аминокислот в полипептидной цепи, соединенных пептидными связями;

в) объединение в определенном порядке двух или большего числа протомеров в молекуле олигомерного белка посредством нековалентных связей;

д) способ укладки полипептидной цепи в виде a-спирали

Выберите правильный ответ.

Под изменением конформации понимают:

1 – изменение аминокислотной последовательности полипептидной цепи

2 – изменение вторичной и третичной структуры полипептидной цепи

3 – замену одной простетической группы в сложном белке на другую

4– изменение взаиморасположения в пространстве субъединиц олигомерного белка

Выберите правильный ответ.

Функциональное многообразие природных белков обеспечивается различиями:

1 – аминокислотного состава

2 – длиной полипептидной цепи

3 – молекулярной массы

4 – чередованием аминокислот в полипептидной цепи

Выберите правильный ответ.

Денатурация белка – это

1- разрыв ковалентных связей в полипептидной цепи

2- нарушение вторичной структуры белка за счет разрыва водородных связей

3- нарушение нативной пространственной конформации белка за счет негидролитического разрыва нековалентных связей

12. Выберите правильные ответы.

Денатурация белка сопровождается:

1- разрушением большого числа межрадикальных связей

2- уменьшением растворимости белка

3- нарушением пространственной структуры (нативной конформации)

4- изменением первичной структуры

13. Оцените правильность утверждения:

При высаливании белок выпадает в осадок, потому что нарушается конформация белковой молекулы

1- да

2- нет

14. Выберите правильные ответы.

При высаливании белков из растворов происходит:

1 - уменьшение растворимости белка

2 – обратимое осаждение

3 – необратимое осаждение

4 – сохранение нативной конформации

5 – потеря биологических свойств

15. Выберите правильные ответы.

При денатурации белков происходит:

1 - уменьшение растворимости белка

2 – обратимое осаждение

3 – необратимое осаждение

4 – сохранение нативной конформации

5 – потеря биологических свойств

16. Выберите правильные ответы.

Факторы, вызывающие денатурацию:

1- Температура выше 60-70°С

2- Насыщенный раствор (NH₄ )₂SO₄

3- Ионизирующее излучение

4- Сдавление, вибрация

5- Токсины, яды

 

СПИСОК ОСНОВНОЙ ЛИТЕРАТУРЫ:

1. Лекции по биохимии

2. Северин Е.С. Биохимия. М. 2003

3. Северин Е. С. Биохимия. Краткий курс с упражнениями и задачами. М. 2001

4. Березов Т.Т., Коровкин В.Ф. Биологическая химия, 1982.

5. Строев В.А. Биологическая химия, 1986.

6. Николаев А.Я. Биологическая химия,1989.

7. Бышевский А.Ш., Терсенов О.А. Биохимия для врача.1984.

 

СПИСОК ДОПОЛНИТЕЛЬНОЙ ЛИТЕРАТУРЫ:

1. Страйер Л. Биохимия М. Мир. 1984

2. Уайт А., Хенглер Ф. Смит Э. и др. Основы биохимии, М. 1981

3. Марри Р. Греннер Д. Биохимия человека, 1993

 

 

Занятие 3

Белки крови. Методы разделения белков.

Цель занятия: познакомить студентов с унифицированными методами определения белка в плазме крови, с клиническим значением этих методов

Вопросы к занятию

1.Многообразие белков. Глобулярные и фибриллярные белки, простые и сложные.

2.Классификация белков по их биологическим функциям.

3.Классификация белков на семейства (сериновые протеазы, иммуноглобулины).

4.Методы количественного определения белков.

5.Электрофорез белков сыворотки крови на бумаге, в ПААГ и на других носителях.

7.Белковый спектр крови в норме и патологии.

8.Иммуноглобулины, особенности строения, избирательность, взаимодействие с антигеном. Классы иммуноглобулинов, особенности строения и функционирования.

9. Функции простых белков (альбуминов, гистонов, глобулинов).

 

Практическая работа