Опыт по определению колициногенности.

Пояснение: колицины – вещества, продуцируемые бак­териями, губительно действующие на близкородственные бактерии (штаммы того же вида). Образование колицинов (колициногенность) детерминировано генами Со1-плазмид. По способности продуци­ровать колицины бактерии внутри вида делятся на колициногеновары, а по чувствительности к действию стандартных колици­нов — на колициновары.

Опыт ставят с целью определения наличия Со1-плазмиды в изучаемой культуре кишечной палочки. В качестве индикаторно­го штамма используют штамм Е. сoli φ, чувствительный к колицинам Е. Для этого берут пробирки со скошенным агаром, у ко­торого отрезана верхняя часть. Исследуемую культуру засевают уколом внутрь среза агара и помещают в термостат на 24 часа. Через сутки на поверхность скошенного агара методом штриха засевают индикаторную культуру. Посевы вновь помещают в термостат. Через 24 часа учитывают результаты. Этот метод вы­явления бактериоцинов (колицинов) получил название метода отсроченного антагонизма. Если изучаемая культура имеет Со1-плазмиду, то продуцируемые клетками колицины диффундируют в среду и тормозят рост индикаторной культуры; если образова­ние колицинов не происходит (нет Со1-плазмид), то индикатор­ная культура хорошо растет на поверхности скошенного агара.

Учтите результаты опыта, зарисуйте. Сделайте заключение о наличии или отсутствии Со1-плазмид, если: а) отсутствует рост индикаторной культуры; б) индикаторная культура растет в экс­перименте.

 

Диагностика фенилкетонурии.

Пояснение: достижения генетики бактерий широко ис­пользуют в биологии, биотехнологии и медицине. Одним из примеров этого может служить диагностика фенилкетонурии с использованием штаммов кишечной палочки, ауксотрофных по фенилпировиноградной кислоте (не растут в ее отсутствие). Фенилкетонурия — наследственное заболевание, связанное с гене­тически обусловленным нарушением обмена ароматических аминокислот (превращения фенилаланина в тирозин). У таких больных в моче появляется фенилпировиноградная кислота, чего не бывает у здоровых лиц. Для ее обнаружения можно использо­вать ауксотрофный штамм Е. соli по фенилпировиноградной кислоте. Этот штамм засевают на чашку с минимальной средой в виде газона. В среде прорезают лунки, в которые вносят образцы исследуемой мочи. Контролями служат лунки с раствором фенилпировиноградной кислоты и образцом мочи здорового чело­века. Посев помещают в термостат и через сутки учитывают ре­зультаты. Если в исследуемом образце мочи содержалась фенил­пировиноградная кислота, то вокруг этой лунки наблюдается зона роста кишечной палочки, сравнимая с ростом вокруг кон­трольной лунки с раствором фенилпировиноградной кислоты. Вокруг лунки с образцом мочи здорового человека рост всегда отсутствует.

Учтите и зарисуйте результаты. Укажите, в каких образцах найдена фенилпировиноградная кислота. О чем это свидетель­ствует? Сравните результаты, сделайте вывод.

ИНФЕКЦИЯ

Тема:«Учение об инфекции. Патогенетические факторы бактерии. Биологический метод исследования»

Цель:

– научиться методам определения некоторых токсинов и ферментов

патогенности бактерий;

– усвоить этапы биологического метода исследования.

Задачи:

– уметь оценить результаты изучения патогенетиче­ских факторов

микроорганизмов;

– овладеть методикой заражения, вскрытия и бакте­риологического

исследования лабораторных животных.

 

Инфекционный процесс – это совокупность физиологических и патологических процессов, возникающих в организме при внедрении в него патогенных микробов. Крайней степенью этого взаимодействия является инфекционная болезнь.

Патогенность – это генетически обусловленная способ­ность микроорганизма вызывать инфекционный процесс.

Вирулентность – это степень патогенности, фенотипическое выражение патогенного генотипа. Вирулентность является количественной характеристикой патогенности и измеряется условно принятыми единицами: минимальная летальная доза – количество микробов, ко­торое вызывает гибель 95% животных, взятых в опыт (DLM).

DL₅₀ – летальная доза, вызывающая гибель 50% подопыт­ных животных.

Самостоятельная работа студентов

На практическом занятии

 

Последовательность действий (этапы)	Способы действия (ориентиры)
I. Изучение факторов вирулентности	1. Изучить посевы стафилокок­ков на кровяном агаре, объяснить при­чину образования зон гемолиза вокруг колоний. 2. Ознакомиться с определением «минимальная смертельная доза» экзо­токсина по готовым результатам; про­токол записать в тетрадь.   3. Определение плазмокоагулазы: культу­ру стафилококка засеять в пробирку с цитратной плазмой кролика, в контроль вместо плазмы внести физраствор. Поставить в термо­стат на 2 часа. В тетради описать ход опы­та, учесть результаты и сделать вывод.
II. Заражение экспе­риментальных жи­вотных	Ввести физиологический раствор внутри­мышечно и внутрибрюшинно белой мыши.
III. Вскрытие трупа зараженного жи­вотного	Произвести вскрытие трупа белой мы­ши, накануне зараженной культурой бактерий. Сделать посев органов и крови на чаш­ку с МПА, поставить в термостат, при­готовить мазки. Мазки из органов и крови окрасить по Граму, микроскопировать, зарисовать; определить, к какому семейству отно­сятся микроорганизмы; сделать предва­рительный вывод о причине гибели мыши. Протокол вскрытия трупа жи­вотного и бактериологическое исследо­вание записать в тетрадь.
IV. Сдать работу преподавателю

 

Контрольные вопросы

 

Определение понятий «инфекция» и «инфекционный про­цесс». Формы симбиоза микроба и макроорганизма. Условия, от которых зависит возникновение, течение и исход инфекционного процесса. Что такое патогенность микроба? Вирулентность мик­робов, единицы ее измерения. Какая разница между понятиями патогенность и вирулентность микробов? Какой микроб более вирулентен: с DLM 1 млрд. микробных тел или с DLM 250 млн. микробных тел? Каким образом можно понизить вирулентность микробов? Повысить вирулентность микробов? Начертите и за­полните схему «Основные факторы вирулентности микробов». Почему капсула микробов является фактором вирулентности? Как можно обнаружить у микробов наличие факторов вирулентности: капсулы, гемолизинов, ДНК-азы, плазмокоагулазы? Экзотоксины и эндотоксины: образование, получение, химическая природа, сила действия, избирательность действия, антигенность. Анатоксин, его получение и основные свойства. Перечис­лить токсигенные бактерии. Пирогены бактериального проис­хождения, их характеристика, применение в медицине. В каких препаратах присутствие пирогенов является нежелательным? Как определяется пирогенность воды и растворов? Влияние состоя­ния макроорганизма и условий внешней среды на течение инфек­ционного процесса. Возможные исходы заражения. Формы ин­фекционного процесса в зависимости от наличия клинических проявлений. Что такое рецидив, реинфекция, суперинфекция, вторичная инфекция? Понятие о бактериемии, септицемии, септикопиемии, токсинемии. Если ввести кровь больного ботулиз­мом в организм мыши, то она заболевает и погибает. Чем вызы­вается гибель мыши? Как называется состояние организма, кото­рое возникает у мыши? В каких целях используется эксперимен­тальный метод исследования? Какие животные чаше всего ис­пользуются для экспериментов в микробиологических лаборато­риях? Правила отбора и подготовки животных для эксперимен­тального заражения. Какие меры предосторожности следует со­блюдать при заражении животных? Методы заражения живот­ных. В каких случаях предпочитается накожное или внутрикожное введение биологического препарата человеку и в каких – подкожное введение? Какова цель бактериологического исследо­вания трупа экспериментального животного? Какие условия со­блюдаются при бактериологическом исследовании трупа? Поче­му исследуемый материал не должен соприкасаться с дезинфици­рующими веществами?

 

Тема:«Антимикробная терапия»

Цель:

– изучить роль антибиотиков в этиотропной терапии инфекционных

заболеваний.

Знать:

– принципы рациональной антибиотикотерапии, ее осложнения и

методы преодоления лекарственной устойчивости бактерий,

механизмы лекарственной устойчивости.

Уметь:

– учесть результаты определения чувствительности бак­терий к антибиотикам методом стандартных индика­торных дисков.

Химиотерапия – это лечение инфекционных и опухолевых заболеваний химическими препаратами, не являющимися продуктами реакции организма на возбудителя.

Препараты, используемые для химиотерапии, называются химиотерапевтическими. Нередко в клинической практике понятия «химиотерапия» и «антибиотикотерапия» используются как синонимы. Однако это неверно, т. к. антибиотики – только один из классов химиотерапевтических препаратов, и, следовательно, антибиотикотерапия – только один из видов химиотерапии.

В настоящее время известно несколько сотен химиотерапевтических препаратов, и постоянно ведется поиск все новых и новых веществ.