Определение активности анатоксина по известной антитоксической сыворотке (титр 200 АЕ в 1 мл) в реакции флоккуляции

1. Определение активности анатоксина по известной антитоксической сыворотке (титр 200 АЕ в 1 мл) в реакции флоккуляции

Ингредиенты

Номера пробирок и их содержимое

Анатоксин, мл

0,1

0,15

0,2

0,25

0,3

0,35

0,4

0,45

0,5

Физ. раствор, мл

0,9

0,85

0,8

0,75

0,7

0,65

0,6

0,55

0,5

Антитоксин 200 АЕ в 1 мл

(1:200)

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

5´

10´ инициальная флоккуляция  

15´

 

 

 

+

 

+

+

 

 

+

 

 

 

 

 

Инициальная флоккуляция наступила в пробирке № 3

В 1 мл антитоксина содержится 1 АЕ.

В 0,2 мл анатоксина      содержится, следовательно, 1 IЕ, титр анатоксина: 1 х 5 = 5 IЕ/мл.

 

2. Определение титра антитоксической сыворотки по известному анатоксину

(титр 5000 IE в мл) в р. флоккуляции

Ингредиенты

Номера пробирок и их содержимое

Антитоксическая сыворотка, мл

0,1

0,15

0,2

0,25

0,3

0,35

0,4

0,45

0,5

Физиол. раствор 0,85 %, мл

0,9

0,85

0,8

0,75

0,7

0,65

0,6

0,55

0,5

Анатоксин 500 IE в 1мл

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

Инкубация при +45С°

5' Инициальная флоккуляция

10'

15'

 

 

 

+

 

+

+

+

+

+

 

+

+

 

 

+

 

 

 

Инициальная флоккуляция наступила в пробирке № 4

В 1 мл анатоксина 500 IE. В 0,25 мл анатоксина – 500 АЕ, а в 1 мл будет в 4 раза больше, т.е. титр анатоксина 2000 АЕ/мл.

Приложение 20

Постановка реакции нейтрализации токсина антитоксином ин виво

Постановка реакции на морских свинках осуществляется по тому же принципу, что и реакция флокуляции с использованием тех же ингредиентов и схемы, но разные разведения или количество содержимого пробирок вводятся морским свинкам весом 250 г. подкожно или внутрибрюшинно. Учет производят через 4 суток по гибели животного, получившего токсин в смеси с 1 АЕ антитоксической сыворотки. Это Limes tod (Lt).

Постановка реакций на человеке

— Реакция Дика. С целью определения уровня антитоксического иммунитета к скарлатине у здорового человека, выполняют кожную пробу с очищенным токсином — эритрогенином. В ладонную поверхность предплечья строго внутрикожно вводят 0.1 мл (1 кожную дозу) эритрогенина. Реакцию учитывают через 24 часа после введения. Ее считают положительной при отсутствии покраснения и отрицательной при наличии его диаметром более 1 см. Положительный результат говорит об антитоксическом иммунитете, отрицательный – об его отсутствии.      

— Реакция Шика – это реакция нейтрализации дифтерийного токсина анатоксинами организма. Она ставится для оценки напряжённости иммунитета к дифтерии. Пробу выполняют со стабилизированным, очищенным дифтерийным токсином. Последний разводят так, что бы в 0,2 мл содержалась 1/40 ДЛМ для морской свинки. Эту одну дозу вводят внутрикожно в ладонную поверхность предплечья. Учет результатов ведут через 24 часа. При наличии в сыворотке крови обследуемого 1/30 AE/мл происходит нейтрализация токсина и на месте введения не будет покраснения. Это говорит о хорошем иммунитете.

— Феномен гашения сыпи ставится на больных с диагностической и лечебной целью. Сыпь, например, при скарлатине — результат действия токсина возбудителя на мелкие капилляры. При подкожном или внутрикожном введении специфической антитоксической сыворотки наступает нейтрализация токсина и сыпь на этом участке исчезает, «гасится». Это дает возможность и диагностировать заболевание, и частично его лечить.

      Приложение 21