Кровяно-капельная реакция Минкевича (РА)

Приложение 6

КРОВЯНО-КАПЕЛЬНАЯ РЕАКЦИЯ МИНКЕВИЧА (РА)

Принцип метода: основан на использовании для РА цельной крови без отделения кровяных клеток, но с их предварительным лизисом под влиянием дистиллированной воды.

На обезжиренное предметное стекло нанести каплю крови и каплю дистиллированной воды. В капле образовавшегося гемолизата эмульгировать каплю диагностикума. Покачивая стекло, учесть наступившую реакцию. Контролем служит физ. раствор с диагнустикумом.

При этом в опытной капле — на фоне красного гемолизата видны белые хлопья агглютината (сначала по периферии, затем — по всей капле). В контроле наблюдается общее помутнение.

Приложение 7

ПОСТАНОВКА РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ (ПАССИВНОЙ) РЕАКЦИИ ГЕМАГЛЮТИНАЦИИ (РНГА ИЛИ РПГА)

Принцип РНГА основан на способности эритроцитов адсорбировать на своей поверхности микробные антигены. Сенсибилизированные таким образом эритроциты агглютинируются в присутствие гомологичной для антигена сыворотки с антителами. При этом реакция идёт между микробным антигеном и антителами, а эритроциты пассивно через них вовлекаются в этот процесс. Для постановки РНГА необходимы эритроциты, обработанные танином, на которых адсорбированы специфические антигены возбудителя. Антигенами в РНГА могут служить очищенные антигены соответствующих микробов, экстракты бактериальных взвесей, надосадочные жидкости формалиновых, спиртовых, гретых бактериальных вакцин, вирусов. Реакцию ставят в агглютинационных пробирках или в лунках иммунологического планшета.

 

 

СХЕМА ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ

Ингредиенты

 

Разведение сыворотки

 

Контроли антигена

 

1:10

1: 20

1: 40

1: 80

1: 160

1:320

1:640

1:2800

На спон-танную агглюти-нацию

На специфич- нось реакции

Физ. раствор, в мл

 

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

-

-

Испытуемая сыворотка в разведении 1:5 в мл, инактивированная 30мин при +56 C°

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

вылить

 

-

-

Эритроцитарный диагностикум, в мл

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

Контрольная положительная сыворотка

-

-

-

-

-

-

-

-

-

0.5

Контрольная отрицательн-ая сыворотка

-

-

-

-

-

-

-

-

0.5

-

Результат (пример)

++++

++++

++++

+++

++

+

-

-

++++

-

 

Результаты реакции учитывают через 2 часа инкубации при + 37Сº и вторично — через 24 часа стояния при комнатной температуре. Их оценка зависит от характера осадка эритроцитов.

+ + + +

Резко положительная реакция: эритроциты равномерно покрывают всю лунку планшета в виде разрыхлённого зонтика с неровными краями

+ + +

Положительная реакция: почти все эритроциты агглютинированы и покрывают дно, края неровные

+ +

Большинство эритроцитов не агглютинированы, осели на дно, изредка встречаются мелкие хлопья склеенных эритроцитов. Слабая РПГА

-

Скопление эритроцитов имеет вид маленького, довольно плотного диска (пуговка).

 

Титром сыворотки считают последнее её разведение, которое вызывает склеивание эритроцитов при полном или почти полном просветлении надосадочной жидкости (2 плюса).