Ориентировочная РА на стекле (серотипирование бактерий)

Приложение 2а

ОРИЕНТИРОВОЧНАЯ РА НА СТЕКЛЕ (СЕРОТИПИРОВАНИЕ БАКТЕРИЙ)

Последовательность постановки:

- На предметное стекло нанести по 1 капле (0,05 мл) известных иммунных диагностических сывороток, разведённых физиологическим раствором 1:5 — 1:10, рядом отступив 1,5 см — каплю физ. раствора (контроль).

- Добавить к каждой капле пипеткой равный объём взвеси 24 часовой бульонной испытуемой культуры или петлю агаровой культуры.

- Слегка покачивая стекло, наблюдать за течением реакции.

- Феномен агглютинации проявляется через 5-10 минут появлением взвешенных хлопьев вначале по краям, затем — по всей капле опыта и просветлением и жидкой части. В контроле (контроль спонтанной агглютинации) антигена — жидкость мутная, гомогенная, хлопьев нет.

Приложение 3

СХЕМА ПОСТРОЕНИЯ РЕАКЦИИ НОБЛЯ

Метод Нобля основан на использовании концентрированных ингредиентов (микробной взвеси, сыворотки больного) и применении механического фактора, ускоряющего агглютинацию (энергичное встряхивание пробирок), что позволяют получить результаты через 2-5 минут.

Ингредиенты

Номер опыта

Контроль

Сыворотки

Антигена

Физ. раствор, мл

0,8

0,8

0,8

0,8

0,8

0,9

0,9

Сыворотка больного в разведении 1:5, мл

0,1

0,1

0,1

0,1

0,1

 

дез. р-р

0,1

-

Разведение сыворотки

1: 10

1: 20

1: 40

1: 80

1: 160

 

 

Диагностикум (взвесь известных микробов 3-6 млрд.мт/мл)

0,1

0,1

0,1

0,1

0,1

-

0,1

Встряхивать 3-5 минут, дать постоять

При оценке результатов реакции используют поправочный коэффициент 10, который отражает разницу между адсорбционными процессами в концентрированных растворах антител и в растворах обычной концентрации. Таким образом, разведение 1:20 по Ноблю соответствует 1:200 при обычной постановке развёрнутой РА.