Схема титрования антигена на антикомплементарное

Приложение 14

СХЕМА ТИТРОВАНИЯ АНТИГЕНА НА АНТИКОМПЛЕМЕНТАРНОЕ

 ДЕЙСТВИЕ

Ингредиенты

                               Пробирки

Контроль антигена на гемотоксичность

Антиген, мл

0,05

0,1

0,15

0,18

0,20

0,23

0,25

0,25

Физ.раствор 0,85 %, мл

0,45

0,4

0,35

0,32

0,30

0,27

0,25

0,5

Комплемент 1: 10, мл

0,25

0,25

0,25

0,25

0,25

0,25

0,25

-

Инкубировать в термостате при 37С°  40 мин.

Гемолитическая система, мл

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

Инкубировать в термостате при 37С°  40 мин.

Учёт результатов

Гемолиз

Задержка гемолиза

Задержка гемолиза

 

Титр антигена — то минимальное количество АГ, которое не мешает гемолизу. Это 0,18 мл. Рабочая доза должна быть в 2 раза меньше, это – 0,09 мл.

 

 

Приложение 15

СХЕМА ТЕТРИРОВАНИЯ ГЕМОЛИТИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ

Ингредиенты

                                               Пробирки

Физ. раствор 0,85 %, мл

0,25

0,25

0,25

0,25

0,25

0,25

0,25

Гемолитическая сыворотка 1:50, мл

0,25

0,25

0,25

0,25

0,25

0,25

 

В дез.р.

Разведение сыворотки

 

1:100

1:200

1:400

1:800

1:1600

1:3200

1:6400

Эритроциты барана 3 % взвесь, мл

0,25

0,25

0,25

0,25

0,25

0,25

0,25

Инкубировать в термостате при 37С°  40 мин.

С^׀ 1:10 в раб. титре

0,25

0,25

0,25

0,25

0,25

0,25

0,25

Инкубировать в термостате при 37С°  40 мин.

Учёт результатов

Гемолиз

Задержка гемолиза

 

Титр гемолитической сыворотки — то максимальное разведение, которое даёт гемолиз. Это 1: 1600. Рабочий титр должен быть концентрированнее титра в 3-4 раза, т.е. рабочий титр - 1: 400.

Приложение  16

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ГЕМОЛИТИЧЕСКОЙ СИСТЕМЫ

1. Отдельно готовят 3% взвесь эритроцитов барана: З мл, отмытых в 0,85 % физиологическом растворе эритроцитов помещённых в 97 мл. физ. раствора.

2. В отдельной колбе готовят гемолитическую сыворотку с учетом рабочего титра.

3. К 3% взвеси эритроцитов барана добавляют равный объем гемолитической сыворотки в рабочем титре. Гемолитическая система готовится за 15-20 мин. до постановки реакции. Для, сенсибилизации подготовленную систему устанавливают в термостат при +37С° на 15-20 мин.

 

 

Приложение 17

РЕАКЦИЯ ТОРМОЖЕНИЯ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА - РТСК

Принцип метода. При наличии неполных антител в сыворотке крови больного возможна блокада ими антигена (диагностикума) и получение ложных отрицательных результатов. Для контроля в этом случае ставят РТСК с применением в качестве дополнения заведомо положительной иммунной сыворотки с полными антителами.