Микроскопический метод исследования патматериала при вирусных болезнях.

При некоторых вирусных болезнях в пораженных клетках обнаруживают сравнительно крупные образования, специфические для каждой инфекции, получившие название телец-включений. В одной клетке их количество может быть от 1 до 6. Они имеют разную форму (круглые, овальные, квадратные, треугольные и т.д.); отличаются размерами (колеблются от 1 до 20 мкм). Их можно увидеть в световом микроскопе в препаратах окрашенных специальными методами. По локализации в клетке они могут быть внутриядерные или цитоплазматические; по составу нуклеиновой кислоты - ДНК, или РНК-содержащие; по тинкториальным свойствам – базофильные или оксифильные; по гомогенности - аморфные, зернистые и т.д.

В настоящее время хорошо изучены тельца Бабеша-Негри - при бешенстве, тельца Боллингера при оспе птиц, тельца Пашена при оспе овец, тельца Лентца - при чуме плотоядных, тельца Руборта - при инфекционном гепатите плотоядных, тельца Зейфрида - при инфекционном ларинготрахеите птиц и др. Поскольку их количество, расположение и форма строго спецефичны для каждого возбудителя, то их обнаружение имеет большое диагностическое значение.

Природа включений разнообразна. Включения представляют собой «вирусные фабрики», т. е. очаги, в которых идет транкрипция и репликация вирус­ных геномов и сборка вирусных частиц (скопление вирусных частиц, либо скопление молекул вирусных белков, либо продукты дегенерации клетки).

Существуют разные способы окраски для выявления телец-включений - по методу Романовского, по Муромцеву, по Михину, по Селлерсу, по Борману, по Манну, метод серебрения по Морозову и др.

Для микроскопии из патологического ма­териала готовят мазки, мазки-отпечатки, гистосрезы. Мазки и мазки-отпечатки фиксируют на пламени или химическим методом (в метиловом спирте, смеси этилового спирта с эфиром поровну, химически чистым ацетоном). При бешенстве мазки-отпечатки и гистологические срезы делают из головного мозга (аммоновы рога, мозжечок, продолговатый мозг) и из слюнных желез.

Окраскапо Муромцеву. (чаще применяют для обнаружения телец-включений Бабеша-Негри при бешенстве).

Влажные мазки или мазки-отпечатки фиксируют в этиловом или метиловом спирте, или в смеси спирта пополам с эфиром, или ацетоном (химически чистым) (сосуд с фиксатором должен быть хорошо закрыт, чтобы фиксирующая жидкость не испарялась). После фиксации мазок промывают дистиллированной водой и погружают на 5-10 минут в раствор краски Мансона разбавленной дистиллированной водой 1:40 (краска Мансона: 5 г буры и 2 г кристаллической метиленовой сини растворяют в 100 мл дистиллированной воды). Затем краску сливают, а мазки погружают в 10 % водный раствор танина на 8—10 минут до появления голубоватой окраски. После этого мазки промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой, проводят через смесь из равных частей спирта с ацетоном (химически чистым) или спирта с ксилолом и высушивают фильтровальной бумагой. Заливают в канадский бальзам. Окрашенный мазок должен иметь светло-голубой фон, ядра нервных клеток синего цвета, а тельца Бабеша—Негри — бледно-фиолетовые с темными включениями.

Окраска по Михину. Мазки или мазки-отпечатки фиксируют в смеси спирта и эфира (поровну) в течение 5—10 минут, высушивают фильтровальной бумагой и окрашивают в течение 30-40 минут краской Гимза, разведенной 1:10 (1-2 капли на 1 мл дистиллированной воды), быстро промывают подкисленным спиртом (1 капля ледяной уксусной кислоты на 30 мл 96° спирта), а затем водой, просушивают фильтровальной бумагой и смотрят под микроскопом.

В окрашенном препарате основной фон должен быть красным с фиолетовым оттенком. Пирамидальные нервные клетки синеватые, ядро клеток интенсивно черное, а тельца Бабеша—Негри — розово-красные с точечными включениями темно-синего цвета.

Окраска по Романовскому. Мазки-отпечатки высушивают на воздухе, фиксируют 3-5 мин. метиловым спиртом или 10-15 мин. в смеси эфира со спиртом (1:1). Затем погружают в раствор краски Романовского (1 каплю основного раствора краски смешивают с 1 мл дистиллированной воды). Окрашивание проводят в специальных ванночках или чашках Петри методом подливания краски под препарат, красят 30-40 минут, затем мазок промывают, высушивают фильтровальной бумагой, ополаскивают спиртом, снова промывают и высушивают. При микроскопии на голубом фоне препарата элементарные тельца Пашена будут красные, а тельца-включения - темно-фиолетовые.

Сущность, постановка и учет иммуноферментного анализа (ИФА).

Метод иммуноферментного анализа (ИФА). Метод ИФА ос­нован на использовании для диагностики антител меченых ферментами. Для метки применяют такие ферменты как пероксидазу хрена (Пероксидаза хрена (англ. Horseradish peroxidase, HRP) — фермент, выделенный из хрена, широко применяющийся в молекулярно-биологических методиках для усиления слабого сигнала до уровня, необходимого для детекции), щелоч­ную фосфатазу и др. Используют ИФА для выявления и идентификации как вируса, так и антител к нему.

Для идентификации вируса иммуноферментный тест применяют в двух вариантах: гистохимический и твердофазный. *.

Гистохимический вариант ИФА, или иммунопероксидазная реакция, аналогична методу иммунофлуоресцен^ии (МФА), но от­личается тем, что для постановки реакции используются антитела мече­ные не флуорохромом, а ферментом и учет реакции проводят просмот­ром под обычным световым микроскопом. В этом варианте ИФА используются антитела, меченые нероксидазой хрена. Выявляют вирусный антиген (вирусы) в мазках-отнечатках из органов, мазках крови, гистосрезах, культурах клеток зараженных вирусом. Ставят им- мунопероксидазную реакцию по прямому и непрямому варианту.

а) Для ^выявления вируса по прямому варианту используют мече­ные пероксидазой специфические вирусу антитела. Такие меченые антитела (конъюгаты) готовят в учреждениях биологической промыш­ленности.

Мазки-отпечатки из патматериала, культуры клеток, выращенные на покровных стеклах и зараженные вирусом, фиксируют при -10°, -20°С ацетоном, высушивают на воздухе и затем на мазок наносят иммуно- пероксидазный конъюгат в рабочем титре, инкубируют при 37°С во влажной камере 1-2 часа, 15 минут промывают физраствором, затем споласкивают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. Затем наносят несколько капель субстрата- это вещества, которые под действием ферментов разлагаются, образуя цветной про­дукт ферментативной реакции. Для пероксидазы хрена в качестве суб­страта применяют диаминобензидинтетрахлорид, 5-аминосалициловую кислоту, ортотолуидин, ортодимилендиамин. Чаще используют диаминобензидинтетрахлорид. Мазок с нанесенным субстратом инку­бируют 5-10 минут, промывают 10-15 минут физ раствором, споласки­вают дистиллированной водой. Учет результатов проводят под обычным световым микроскопом. В положительных случаях, т. е. при наличии антигена в мазках, после нанесения иммунопероксидазного конъюганта образуется комплекс «Аг + Ат», меченый ферментом. После нанесения на препарат субстрата последний под действием фермента разлагается, образуя цветной продукт ферментации, хорошо видимый в световом микроскопе. Образуется при разложении продукт реакции голубого цвета, который быстро переходит в коричневый и будут видны или равномерное диффузное желто-коричневое окрашивание или гранулы коричнево-черного цвета. В контроле окрашивания не будет. Также об­рабатывают и гистосрезы, но контакт конъюганта удлиняют до 6 часов.

б) При непрямом методе ИФА используют антивидовые иммунопероксидазные конъюгаты (антивидовые антитела меченые пероксидазой). На фиксированный охлажденным ацетоном препарат (мазок- отпечаток, мазок, гистосрез) наносят первоначально специфическую искомому антигену сыворотку, контактируют 1-2 часа во влажной ка­мере, промывают физраствором 5 минут, высушивают на воздухе, за­тем наносят антивидовой иммунопероксидазный конъюгат и инкуби­руют при 37°С 1-6 часов во алажной камере и далее как и при прямом методе. Учет проводят также под световым микроскопом.

Методы твердофазного иммуноферментного анализа (ТФИФА) основаны на применении антител (или антигена) фикси­рованных на нерастворимых носителях. В качестве носителей исполь­зуют стеклянные или нейлоновые шарики, полистироловые или кера­мические пробирки и микропанели с плоским дном, латекс.

Применение ТФР1ФА используется как для обнаружения ви­русного антигена, так и для специфических антител. В этом мето­де используют меченые как пероксидазой хрена, так и щелочно-фосфатазные.

Для выявления вируса с помощью данного метода в вируссодержащем материале наиболее часто используют метод двойных антител или 4сэндвич». Для этого лунки полистироловых микропанелей сенсиби­лизируют гамма-глобулином, выделенным из специфической к иссле­дуемому антигену сыворотки. В лунки вносят по 0,2 мл гамма-глобу­лина в нужной концентрации в натрий-карбонатном буфере с рН-9.6,

инкубируют 1 час при 37°С и затем оставляют на ночь при 4°С. Наутро риз лунок сливают раствор гамма-глобулина, промывают лунки пане­ли 3 раза по 5 минут калий-фосфатным буфером с рН-7.4, затем в лун- ки вносят по 0,2 мл раствора, содержащий антиген, и инкубируют 2 часа при 37°С. В контрольные лунки вносят заведомо известный положительный и негативный антигены. Микропанели за­тем промывают 3 раза по 5 минут калий-фосфатным буфером. Затем в лунки вносят по 0.2 мл иммуноферментного конъюгата и инкубируют 1-2 часа при 37°С, промывают калий-фосфатным буфером 3 раза по 5 минут и вносят в лунки по 0.2 мл раствора субстрата (для иммуно- пероксидазного конъюгата применяют ортофенилендиамин или 5-ами- носалициловая кислота, а для щелочно-фосфатазного конъюгата р-нит- рофенилфосфат), инкубируют в темноте при комнатной температуре 5-30 минут. Реакцию останавливают добавлением 0,05 мл 2Н H2S04 (для пероксидазы) и ЗМ NaOH (для щелочной фосфатазы). Учиты­вают реакцию визуально по разности в окраске опытных и контрольных образцов. При использовании субстрата ортофенилендиамина поло­жительные образцы имеют оранжево-коричневую окраску, а при 5-ами- носалициловой кислоты опытные образцы окрашиваются в интенсив­но-коричневый цвет, контрольные образцы или неокрашенные, или слабо-желтые. При использовании щелочной фосфатазы опытные об­разцы окрашены в желтый цвет. Учет реакции ИФА можно проводить с помощью спектрофотометра.

Люминесцентная микроскопия в вирусологии. Метод флуорохромирования (МФ) и методы флуоресцирующих антител (МФА).

Среди новейших способов диагностики бактериальных и вирусных заболеваний особое место занимает люминесцентная (флуоресцент­ная) микроскопия. Повышенная чувствительность, цветное изображе­ние на темном нефлуоресцирующем фоне, возможность обнаружения телец-включений, некоторых крупных вирусов и риккетсий, простота и надежность - ценные качества этого вида микроскопии.

Особое значение люминесцентная микроскопия имеет при ускорен­ной диагностике инфекционных заболеваний, при ускоренной инди­кации возбудителя во внешней среде.

Результаты люминесцентной микроскопии являются довольно спе­цифичными и высокоточными. По данным ряда авторов этот метод не уступает по показаниям данным биопробы и другим методам, однако для люминесцентной микроскопии нужно иметь высококачественные специфические флуоресцирующие сыворотки или иммуноглобулины. Люминесцентная микроскопия в последние годы находит все большее применение и является одним из главных методов при диагностике многих вирусных болезней.

В люминесцентной микроскопии используется явление фотолюми­несценции, т. е. способность объекта светиться (издавать свечение) в момент облучения его ультрафиолетовыми лучами. Источниками та­ких лучей в люминесцентном микроскопе являются ргутно-кварцевые лампы. Для проведения микроскопии в настоящее время выпускаются люминесцентные микроскопы серии ЛЮМАМ, а также люминесцент­ные устройства, которые монтируются на обычный световой микроскоп, такие как ОИ-28 и другие. Результаты, получаемые при работе с лю­минесцентными устройствами, лишь незначительно уступают резуль­татам, получаемым при работе со специальными люминесцентными микроскопами. Как микроскопы люминесцентные, так и устройства должны быть хорошо настроены, комнату для работы затемняют. Для иммерсионной микроскопии при люминесцентном исследовании ис­пользуют специальное нефлуоресцирующее масло, заменители его (ди- метилфтолат ДЭТА) или просто дистиллированную воду при водной иммерсии. Настройку микроскопа или устройства проводят согласно прилагаемой к ним инструкции.

Объекты, рассматриваемые при люминесцентной микроскопии, мо­гут давать собственную люминесценцию (аутолюминесценция), как, например, грибки микроспории, и такие объекты смотрят без всякой дополнительной окраски. Однако большинство патогенных микроор­ганизмов и вирусы аутолюминесценцией не обладают, а поэтому маз­ки надо обрабатывать либо специальными красками (флуорохромы), либо мечеными (флуоресцирующими) антителами. В связи с этим все методы обработки мазков для люминесцентной микроскопии можно разделить на две группы:

1. Метод флуорохромирования (МФ).

2. Методы флуоресцирующих антител (МФА) или иммунофлуо- ресценция (ИФ).

а) Метод флуорохромирования. По своей технике этот метод принципиально почти ничем не отличается от методов обычной ок­раски мазков, применяемых при световой обычной микроскопии. Для этих целей используют также анилиновые красители, но краски берут такие, которые обладают явлением фотолюминесценции, т.е. светятся в момент облучения их ультрафиолетовыми лучами. Такие краски на­зываются флуорохромами, а окраска ими - метод флуорохромирования. К флуорохромам относят такие красители как акридин оранжевый и желтый, аурамин, корифосфин, родамин, трипафлавин, риванол, флуо- ресцеина изотиоцианат (ФИТЦ) и другие. Продается специальный набор - «Набор красителей для флуоресцентной микроскопии», со­держащий 20 красителей. Растворяют флуорохромы в дистиллирован­ной воде (или буфере), к некоторым из них добавляют фенол до 5%. Разведения для большинства красителей обычно готовят 1:1000 (ак­ридин желтый 1:500, акридин оранжевый, родамин и корифосфин 1:10.000). Наибольший интерес здесь представляет акридин оранже­вый, который окрашивает ДНК в ярко светящийся желто-зеленый цвет, а РНК в оранжево-красный. Для исследований можно готовить мазки из патматериала, мазки-отпечатки, гистосрезы, зараженные культуры ткани, выращенные на покровных стеклах. Чтобы различить проис­хождение ДНК или РНК (клеточное или вирусное) препараты (маз­ки, мазки-отпечатки) обрабатывают 0,5%-ным раствором ДНК-азы или PIIK-азы в течение 5-10 минут. При этом свечение клеточных ДНК или РНК сразу же исчезает, а вирусные ДНК или РНК продолжают светиться еще 20-30 минут. Это служит доказательством специфично­сти вирусных нуклеиновых кислот.

Метод флуорохромирования широко применяется при диагности­ки бактериальных болезней и для этого имеются разработанные ВИЭВ рекомендации для окрашивания различных микробов и спор.

б) Методы флуоресцирующих антител (МФА), иммунофлуо- ресценция (ИФ). МФА (ИФ) основаны на принципе специфическо­го взаимодействия антигена со специфическими антителами, но ис­пользуют здесь антитела меченые, т.е. предварительно окрашенные флуорохромом, и поэтому такие антитела под ультрафиолетовыми лучами светятся (флуоресцирующие антитела). Наиболее часто для окрашивания антител применяют ФИТЦ, эта краска дает антителам салатно-зеленое свечение. Поэтому, если в мазке есть антиген специ­фический данным антителам, то антитела, оседая и связываясь с дан­ным антигеном, будут обеспечивать образовавшемуся комплексу свечение салатно-зеленым цветом. Следовательно, здесь свечение ан­тигена происходит не за счет окрашивания его, а за счет связавшихся с антигеном специфических окрашенных антител. Таким образом, все МФА являются по своей сущности разновидностью серологических реакций, но ставятся они не в пробирках, а на предметном стекле (в мазках) и используются флуоресцирующие антитела. В настоящее вре­мя налажено производство флуоресцирующих иммунных сывороток и гамма-глобулинов централизованным путем. Выпускаются они в сухом виде в ампулах с приложением на каждую упаковку инструк­ции по применению с указанием титра антител. Растворяют их для использования по мере надобности согласно инструкции, хранят в хо­лодильниках при +4° С. Некоторые флуоресцирующие сыворотки вы­пускают в жидком виде.

МФА находят широкое применение при диагностике многих ви­русных болезней - бешенство, грипп, болезнь Аусеки, вирусный гепа­тит плотоядных и чума, оспа, ИРТ, ИЛТ и многие др.

Все методы флуоресцирующих антител можно разделить на 2 раз­новидности:

1. Прямой МФА (предложен Кунсом и Капланом, 1942, 1950 гг.).

2. Непрямые МФА:

а) с использованием антивидовой флуоресцирующей сыворотки или иммуноглобулина (метод Уэллера и Кунса, 1954 г.);

б) с использованием антикомплементарной флуоресцирующей сы­воротки или иммуноглобулина (метод Гольдвассера-Шепарда, 1858 г.).

Прямой МФА. Этот метод технически наиболее прост и более специфичен по результативности и поэтому более широко применя­ется в практической работе.

Сущность и техника прямого МФА заключатся в том, что на пред­метное стекло с фиксированным на нем м^шГ(или мазком-отпечат­ком) из вируссодержащего материала наносят небольшое количество (2-3 капли) специфической подозреваемому антигену (вирусу) флуо­ресцирующей иммунной сыворотки, или иммуноглобулина, в рабочем титре и выдерживают во влажной камере (в чашке Петри с кусочком ваты, смоченной водой) в термостате в течение 30-40 минут при 36-37° С, а затем промывают буферным солевым раствором и дистил­лированной водой, высушивают на воздухе и просматривают под им­мерсионной системой в люминесцентном микроскопе. Если антиген и антитела специфичны, образуется комплекс «антиген + антитело», ко­торый не смывается при промывании мазка и при микроскопии пре­парата будет отчетливо видно яркое салатно-зеленое свечение антиге­на за счет адсорбированных на нем флуоресцирующих антител. Если же антитела были неспецифичны антигену, находящемуся в мазке, или антигена в мазке вообще не оыло (от здоровых животных), то свече­ния антигена не будет и поле зрения будет темным потому, что анти­тела не связались с фиксированным мазком и смылись при промыва­нии мазка. Предметные стекла для МФА должны быть тонкие, чистые и хорошо обезжиренные. Мазки и мазки-отпечатки нужно готовить тонкие, высушивают мазки на воздухе и фиксируют химическим спо­собом (ацетон, метиловый спирт, спирт + эфир), можно фиксировать пламенем. В мазках-отпечатках при вирусных инфекциях наблюдают свечение при просмотре в ядрах или цитоплазме пораженных виру­сом клетках в виде различных гранул и телец-включений, а если клет­ка поражена вся и антиген содержится как в ядре, так и в цитоплазме, может светиться вся клетка. Непораженные вирусом клетки обычно не светятся и создают темный фон.

К недостаткам прямого метода следует отнести то, что при этом ме­тоде в лаборатории на каждое вирусное заболевание нужно иметь спе­цифическую флуоресцирующую сыворотку или глобулины, а они пока еще сравнительно дорогие и имеют небольшой срок хранения.

Непрямые МФА называются так потому, что флуоресцирую­щие антитела адсорбируются не на сам вирусный антиген, а на посред­ника, в качестве которого может быть специфическое вирусному ан­тигену неокрашенное антитело (при антивидовом методе) или комп­лемент (при антикомплементарном методе). Непрямые МФА связа­ны с обработкой мазка в два этапа: вначале наносят специфическую вирусному антигену нефлуоресцирующую сыворотку (при антикомп­лементарном методе и комплементе одновременно) и контактируют 30-40 минут во влажной камере при 37° С, затем промывают буфером и водой (или просто водой) и наносят флуоресцирующую сыворотку специфичную противовирусным неокрашенным антителам (при ан­тивидовом методе) или комплементу (при антикомплементарном ме­тоде), опять контактируют 30-40 минут во влажной камере в условиях термостата, промывают, высушивают на воздухе и смотрят под люми­несцентным микроскопом.

Непрямой МФА с использованием антииилоной флуорес­цирующей сыворотки» На фиксированный мазок или отпечаток на­носят специфическую предполагаемому в мазке антигену (вирусу) им­мунную неокрашенную сыворотку или иммуноглобулин, и выдержи­вают во влажной камере или термостате при 37°С 30-40 минут, затем промывают буферным раствором и водой. Если в мазке имеется анти­ген специфичный антителам сыворотки, образуется комплекс «анти­ген + антитело» (Аг + Ат), который не смывается при промывании мазка, но и не светится в люминесцентном микроскопе. Поэтому ма­зок дополнительно обрабатывают флуоресцирующей антивидовой сы­вороткой или глобулином (антивидовую сыворотку или глобулин получают путем гипериммунизации кроликов или другие виды животных сывороткой или глобулинами того вида животных, на кото­рых получают специфическую для вируса гипериммунную нефлуо­ресцирующую сыворотку и такую антивидовую сыворотку обрабатывают флуорохромом, обычно ФИТЦ). Антивидовую флуоресцирующую сыворотку наносят на мазок и выдерживают во влажной камере при 37° С 30-40 минут, затем промывают водой или буфером и водой, высу­шивают на воздухе и смотрят. Антитела из флуоресцирующей анти­видовой сыворотки, если они специфичны глобулинам неокрашенной иммунной противовирусной сыворотки, адсорбируются на комплек­се Аг + Ат и образуется новый комплекс «Аг (вируса) + Ат противо­вирусной неокрашенной сыворотки (они же являются Аг для антиви­довой сыворотки) + Ат (флуоресцирующие) антивидовой сыворотки».

При просмотре под люминесцентным микроскопом образовавшийся комплекс будет светиться ярко салатно-зеленым цветом за счет флуо­ресцирующих антител антивидовой сыворотки.

Если же в первом этапе обработки компоненты были неспецифич­ны или не было в мазке антигена, комплекс «Аг + Ат» не образуется и антивидовые флуоресцирующие антитела не свяжутся, при промыва­нии мазка смоются с него и поэтому свечения не будет.

Непрямой МФА с использованием антикомплементарной флуоресцирующей сыворотки. Этот метод по своей сущности и технике является разновидностью РСК, но ставится реакция на пред­метном стекле и вместо гемолитической системы используют флуо­ресцирующую антикомплементарную сыворотку. Получают антиком­плементарную сыворотку путем гипериммунизации кроликов натив- ной свежей сывороткой морской свинки (комплемент) и у кролика образуются антикомплементарные антитела, которые будут специ­фичны белкам сыворотки крови морской свинки (комплементу) и в реакцию будут вступать только с сывороткой крови морской свинки, которая является комплементом в РСК. Такую антикомплементар­ную сыворотку обрабатывают флуорохромом ФИТЦ-ем и получает­ся флуоресцирующая сыворотка.

На приготовленный и фиксированный мазок вначале наносят спе­цифическую предполагаемому в мазке антигену (вирусу) нефлуорес- цирующую иммунную сыворотку и комплемент в рабочих титрах, кон­тактируют в термостате при 37° С во влажной камере 30-40 минут (про­ходит реакция в баксистеме), а затем промывают водой. В случае, если, как и в пробирочной РСК, антиген в мазке будет специфичен нанесен­ным антителам, образуется комплекс «Аг вируса + Ат», на который адсорбируется комплемент и весь этот комплекс «Аг вируса + Ат им­мунной неокрашенной сыворотки + комплемент» не смоется, но све­чения под люминесцентным микроскопом не будет. Чтобы обнаружить этот комплекс, на мазок дополнительно затем наносят антикомпле­ментарную флуоресцирующую сыворотку и вновь контактируют во влажной камере термостата 30-40 минут, после чего промывают, высушивают на воздухе и смотрят под люминесцентным микро­скопом. Флуоресцирующие антитела из антикомплементарной сы­воротки адсорбируются на комплексе и весь вновь образовавшийся комплекс «Аг вируса + Ат специфической неокрашенной противови­русной сыворотки + комплемент + антикомплементарное Ат» в резуль­тате будет ярко светиться салатно-зеленым цветом. Преимуществом данного метода является то, что при этом методе для диагностики на любое бактериальное или вирусное заболевание достаточно иметь в лаборатории лишь одну антикомплементарную флуоресцирующую сыворотку и наборы специфических гипериммунных неокрашенных сывороток.Начало формыНачало формы

Прямой метод флуоресцирующих антител (МФА), его сущность и техника постановки.

Вопрос 40.

Непрямые методы флуоресцирующих антител (МФА). Их сущность и техника постановки.

Вопрос 40.