Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Классификация культур тканей. Получение субкультур.
Классификация: 1. переживающие 2. растущие · Плазменные · Монослойные - первичные - субкультуры -диплоидные -перевиваемые Субкультура (вторичная культура клеток). Получают практически из всех первичных культур клеток, снятых со стекла раствором версена или трипсина, с последующим ресуспендированием в новой питательной среде и пересевом в новые матрасы или пробирки. Монослой формируется через 2–3 сут (хуже субкультивируются куриные фибробласты). Субкультуры по чувствительности к вирусам не уступают первичным культурам клеток, кроме того, они более экономичны. После 10 пассажа, клетки находятся на стадии перехода к перевиваемым культурам клеток. 30. Заражение культур тканей вирусами. Методы определения результативности заражения культур тканей. Перед заражением сформировавшихся клеточных культур, ростовую питательную среду меняют на поддерживающую и заражают вирусом из расчета 0,1 мл вируссодержащей жидкости и 0,9 мл поддерживающей среды. Учитывая, что не все культуры клеток являются чувствительными ко всем вирусам, для каждого возбудителя необходимо подбирать определенный вид культуры ткани. За зараженными культурами ежедневно наблюдают просмотром под микроскопом и отмечают характер дегенеративных изменений в клетках. Под действием вируса пораженные клетки уже через 24 часа или позже начинают деформироваться, подвергаются деструкции, может появиться зернистость, округление клеток, вакуоли, в некоторых случаях происходит слияние клеток с образованием большой многоядерной клетки или образуются симпласты и синцитии. Пораженные клетки могут группироваться в гроздья и затем разрушаются, отпадают от стенки и появляются пустоты в монослое клеток. Все эти изменения хорошо видны под микроскопом. Некоторые вирусы (чума свиней и др.) могут размножаться в клетках, не вызывая дегенерации и деформации их. Деформация и дегенерация клеток культуры ткани под воздействием различных вирусов может быть различной, но, как правило, всегда носят специфический характер. Способность вируса вызывать определенные морфологические и дегенеративные изменения клеток в зараженных культурах тканей принято называть цитопатогенным действием вируса (ППД). Когда в зараженных культурах тканей ЦПД вируса будет хорошо и четко выражено и более половины пласта клеток (50%) будет дегенерировано, такие культуры удаляют из термостата и хранят до дальнейшего их использования в замороженном состоянии в холодильнике при -20°С (в морозилке бытового или в специальном низкотемпературном холодильнике). Пробирки с четко выраженным ЦПД для дальнейшей работы, если нужно снять клетки со стенки пробирки и для освобождения вируса из зараженных клеток в жидкость, подвергают двух-трех - кратному замораживанию и оттаиванию.
РГАд ставится на культурах ткани при некоторых вирусных болезнях с целью обнаружения вируса в клетках зараженных культур ткани на ранних стадиях размножения вируса, т. е. до появления цитопа- тогенного действия (ЦДД). По своей сущности эта реакция не является серологической и основана на способности зараженных вирусом клеток культуры ткани адсорбировать на себе эритроциты. Для постановки РГАд используют зараженные вирусом культурны ткани в пробирках. В пробирки с культурой ткани, зараженной вирусом, не удаляя поддерживающей среды, вносят 0,2 мл 0,5%-ной взвеси эритроцитов. После этого пробирки оставляют в наклонном положении под углом в 7-10° на 10-15 минут и по истечении этого времени просматривают под микроскопом. При постановке реакции во втором варианте из пробирок с зараженной культурой ткани предварительно сливают культу- ральную жидкость и затем вносят 0,2 мл 0,5%-ной взвеси эритроцитов, пробирки оставляют в наклонном положении на 10-15 минут, затем культуру ткани промывают физиологическим раствором (осторожно споласкивают и сливают) и смотрят под микроскопом. При положительной реакции эритроциты адсорбируются на зараженных клетках и хорошо видны в виде гроздьев, розеток или беспорядочных скоплений. Если клетки не инфицированы вирусом, то на них эритроциты не адсорбируются и свободно плавают в культуральной жидкости^ первом варианте) или смываются при промывании физраствором и не видны (во втором варианте). РЗГАд. В основе этой серологической реакции лежит способность специфической иммунной сыворотки нейтрализовать гемадсорбиру- ющие свойства клеток культуры ткани, зараженных вирусом. С помощью РЗГАд можно идентифицировать вирус по известной иммунной сыворотке или выявлять антитела в исследуемых сыворотках крови по известному антигену (вирусу). Вирус африканской чумы свиней по РЗГАд имеет 7 серотипов. Для постановки реакции из зараженных пробирок с культурой ткани сливают поддерживающую среду и культуру ткани промывают споласкиванием раствором Хенкса, затем в пробирки вносят но 0,2 мл специфической иммунной сыворотки и 0,8 мл раствора Хенкса (в контрольные пробирки вносят только раствор Хенкса без добавления сыворотки). Сыворотку с зараженной культурой ткани контактируют в термостате или при комнатной температуре 40-60 минут и затем в пробирки вносят по 0,2 мл 0,5%-ной взвеси эритроцитов, оставляют на 10-15 минут и просматривают под микроскопом. Контролем является реакция с нормальной сывороткой. Если сыворотка была идентична вирусу, то специфические антитела предотвращают адсорбцию эритроцитов на клетках и реакция считается положительной. В контрольных пробирках с нормальной сывороткой и в пробирках, не содержащих сыворотки, должна быть гемадсорбция.
|
||||||
Последнее изменение этой страницы: 2022-09-03; просмотров: 84; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 18.221.206.73 (0.006 с.) |