Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Прямое определение наличия возбудителей
Многие традиционные методы диагностики, например иммуноферментный анализ, выявляют белки-маркеры, являющиеся продуктами жизнедеятельности инфекционных агентов, что дает лишь опосредованное свидетельство наличия инфекции. Выявление специфического участка ДНК возбудителя методом ПЦР дает прямое указание на присутствие возбудителя инфекции. Высокая специфичность. Высокая специфичность метода ПЦР обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляют уникальный, характерный только для данного возбудителя фрагмент ДНК. Специфичность задается нуклеотидной последовательностью праймеров, что исключает возможность получения ложных результатов, в отличие от метода иммуноферментного анализа, где нередки ошибки в связи с перекрестно-реагирующими антигенами. Высокая чувствительность. Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов. ПЦР-диагностика обнаруживает наличие возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) это сделать невозможно. В течение нескольких часов с помощью ПЦР из одного фрагмента молекулы ДНК можно получить более 50 млрд. идентичных молекул. Таким образом, можно изучить генетический материал, присутствующий в крошечных количествах. Чувствительность ПЦР-анализа составляет 10-100 клеток в пробе (чувствительность иммунологических и микроскопических тестов -1000-100000 клеток). Универсальность процедуры выявления различных возбудителей. Материалом для исследования методом ПЦР служит ДНК возбудителя. Метод основан на выявлении фрагмента ДНК или РНК, являющегося специфичным для конкретного организма. Сходство химического состава всех нуклеиновых кислот позволяет применять унифицированные методы проведения лабораторных исследований. Это дает возможность диагностировать несколько возбудителей из одной биопробы. В качестве исследуемого материала могут использоваться различные биологические выделения (слизь, моча, мокрота), соскобы эпителиальных клеток, кровь, сыворотка. Высокая скорость получения результата анализа. Для проведения ПЦР-анализа не требуется выделение и выращивание культуры возбудителя (как культуральные методы), что занимает большое количество времени. Унифицированный метод обработки биоматериала и детекции продуктов реакции, и автоматизация процесса амплификации дают возможность провести полный анализ за 4-4.5 часа.
6.Возможность диагностики не только острых, но и латентных инфекций. Ограничения метода ПЦР: - перекрестная контаминация от пробы к пробе (в процессе обработки клинических образцов или при раскапывании реакционной смеси), приводящая к появлению спорадических ложноположительных результатов; - контаминация продуктами амплификации (ампликонами), имеющая наибольшее значение, т.к. в процессе ПЦР ампликоны накапливаются в огромных количествах и являются идеальными продуктами для реамплификации; - контаминация следовыми количествами ампликонов посуды, автоматических пипеток и лабораторного оборудования, поверхности лабораторных столов или даже поверхности кожи сотрудников лаборатории приводит к появлению систематических ложноположительных результатов. Как правило, определить источник контаминации бывает очень трудно и требует значительных затрат времени и средств. Накопленный к настоящему времени опыт работы лабораторий, использующих метод ПЦР для диагностики позволяет сформулировать основные требования к организации таких лабораторий и проведению самих анализов. Соблюдение данных требований позволяет исключить возможность контаминации и получения ложноположительных результатов.
Необходимо территориально разделить различные стадии проведения анализа, размещая их в отдельных помещениях: - пре-ПЦР-помещение, где производится обработка клинических образцов, выделение ДНК, приготовление реакционной смеси для ПЦР и постановка ПЦР (при наличии условий два последних этапа рекомендуется также проводить в дополнительном отдельном помещении). В этих помещениях запрещается проводить все другие виды работ с инфекционными агентами, ПЦР-диагностика которых проводится в данной лаборатории; 44. Парвовирусы животных. Характеристика вируса Алеутской болезни норок (плазмоцитоза). Методы лабораторной диагностики. Семейство парвовирусов Parvoviridae («parvus»-маленький) включает два подсемейства, впервые описано в 1928г. Это самые маленькие ДНК содержащие Vir, поражающие позвоночных и насекомых. Парвовирусы патогенны для млекопитающих, птиц, в т. ч. для человека, широко распространены в природе и у с-х животных и птиц, для них характерно латентное носительство у взрослых особей. Общие свойства семейства: Структура вирусов семейства Parvoviridae СР - капсидный протеин ssDNA - однонитчатая ДНК 3) высокая устойчивость во внешней среде. Термостабильны при t 56°С - 1 час; устойчивы к действию липидорастворителей и кислой среды рН 3-9; 5)Для репродукции парвовирусы нуждаются в быстро растущих клетках, так как только на протяжении S-фазы клеточного цикла происходит синтез клеточных ДНК-полимераз, которые используются вирусом для репликации дочерних ДНК. 6) Парвовирусы пантропные проникают во все клетки, а репродуцируются в наиболее митотически активных (быстро делящихся клетках) находящихся в S-фазе клет. цикла, чем и обусловлены изменения в этих тканях (костный мозг, селезёнка, кишечник, миокард, ростки иммунокомпетен тных клеток, ткани плодов). Подсемейство Parvovirinae: - вирус энтерита кошек или панлейкопении (ПЛК); - вирус энтерита собак («олимпийка») СПВ-2, СПВ -1; - вирус энтерита норок; - Парвовирусы - человека (В19), -свиней, -КРС, - кроликов, -енотов, -гусей, -крыс, -мелкий вирус мышей. Род Amdoparvovirus - вирус Алеутской болезни норок (вирусный плазмоцитоз); АБН контагиозная медленно развивающаяся инфекционная болезнь, характеризующаяся системной (распространённой) пролиферацией лимфоидных клет (генерализованным плазмоцитозом), гипергаммаглобулинемией, явлениями геморрагического диатеза, артериитом, гепатитом, прогрессирующим истощением зверей, рассасыванием плодов у самок; это иммунологическое заболевание.
АБН - свойственно медленное неизбежное прогрессирующее В естественных усл. к вирусу АБН восприимчивы норки всех окрасов, норки с гомозиготным рецессивным геном "аа" (алеутские, сапфировые, голубые) заболевают чаще, тяжелее переносят болезнь, чем стандартные. Вирус бессимптомно персистирует в организме лисиц, песцов, соболей, кроликов, диких зверей, собак, кошек, не теряя патоген. для норок. Инкуб. период от 30 дн. 2 до лет. Поражаются все кроветв-е органы. Вирус стимулирует пролиферацию плазматических клеток, которые вырабатывают АТ, вступающие с ним в реакцию. Повышается уровень гаммаглобулинов в крови за счет IgG. В результате отложения иммунных комплексов в стенках артерий, капилляров, в клетках почек, на поверхности Эr, в печени и других органов могут развиться: гломерулонефриты, периартриты, гепатиты, лизис эритроцитов. Вирусоносительство и вирусовыделение. Источником инфекции являются больные норки, которые выделяют вирус во внешнюю среду с фекалиями, мочой и слюной вплоть до смерти. Заражение горизонтально и вертикально. Патологоанатомические изменения зависят от формы и течения болезни. Трупы зверей истощены. На деснах, твердом и мягком небе у некоторых норок видны множественные мелкие кровоизлияния и язвы. Развиваются характерные изменения, в первую очередь в органах богатых ретикулоэндотелиальной тканью: костном мозге, селезенке, лимфатических узлах, почках, печени. Наиболее характерны патолого-анатомические изменения в почках. На поверхности коркового слоя хорошо выделяются точечные крово излияния и мелкие серо-белого цвета очажки. Создается впечатление, что почки обсыпаны песком. Граница между слоями - сглажена. Селезен резко увеличена в 2-5 раз, пятнистая. Лимф. узлы набухшие, сочные. Плазмоклеточная пролиферация происходит в лимфоузлах, костном мозге, печени, почках. Диагностика комплексная. Подготовка лунок в агаровом слое на стекле с помощью вакуум насоса. В лунки вносят компоненты реакции.
|
|||||||
Последнее изменение этой страницы: 2022-09-03; просмотров: 47; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 3.15.147.53 (0.017 с.) |