Кафедра клинической лабораторной диагностики

Кафедра клинической лабораторной диагностики

Утверждено на заседании кафедры

Протокол №…. от…. 2005 года

Заведующий кафедрой, д.м.н.

--------------------Новикова И.А.

 

Микробиологические исследования при инфекционных поражениях ЦНС

Учебно-методическое пособие для студентов

Автор: доцент кафедры, Ильинская Т.Н.

Гомель, 2005 год

Введение.

Гнойный менингит - гнойное воспаление мозговых оболочек. Встречаются первичный менингит, вызываемый менингококками, и вторичный, возбудителями которого являются золотистый и эпидермальный стафилококки, пиогенный и пневмонийный стрептококк, кишечная палочка, инфлюэнца-бактерия. Возбудители заносятся в субарахноидальное пространство из инфекционных процессов в других органах гематогенным, лимфогенным, контактным путями, а также при травмах.

К поражениям ЦНС также относятся энцефалиты и такие редко встречающиеся болезни ЦНС, как хронические гранулематозные процессы и процессы, вызванные специфическими микроорганизмами (Neisseria meningitidis, Mycobacterium tuberculosis, Treponema pallidum).

Цель: Получение знаний и практических навыков по вопросам диагностики инфекционных поражений органов центральной нервной системы.

Задачи:

· Знать возбудителей инфекционных поражений органов центральной нервной системы.

· Знать этапы диагностики инфекционных поражений органов центральной нервной системы.

· Уметь собирать и доставлять патологический материал

· Иметь навыки в постановке диагностических реакций.

· Уметь оценить полученные результаты и выдать заключение по проведенному исследованию.

Практические навыки:

· Сбор и доставка патологического материала.

· Посев материала на селективные и неселективные среды.

· Отбор подозрительных колоний и выделение чистых культур.

· Идентификация по биохимическим свойствам

· Постановка реакции антибиотикочувсвительности.

· Оценка полученных результатов.

· Выдача заключения по проведенному исследованию.

Основные учебные вопросы:

1. Основные возбудители гнойных инфекций ЦНС.

2. Возбудители гнойных инфекций ЦНС в разных возрастных группах.

3. Малоизвестные бактерии - возбудители менингитов.

4. Клинические формы менингококковой инфекции.

5. Эпидемический цереброспинальный менингит.

6. Лабораторная диагностика менингококковой инфекции. Исследование СМЖ. Исследование крови. Исследование носоглоточной слизи для выявления бактерионосительства. Питательные среды.

7. Бактериальные менингиты другой этиологии. Лабораторная диагностика менингитов, вызванных Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae.

8. Этиология абсцессов головного мозга. Микробиологическое исследование патологического материала при абсцессах головного мозга.

Задания для самоподготовки и УИРС:

1. Основные возбудители гнойных инфекций ЦНС.

2. Возбудители гнойных инфекций ЦНС в разных возрастных группах.

3. Малоизвестные бактерии - возбудители менингитов.

4. Клинические формы менингококковой инфекции.

5. Эпидемический цереброспинальный менингит.

6. Лабораторная диагностика менингококковой инфекции. Исследование спинномозговой жидкости.

7. Исследование крови. Исследование носоглоточной слизи для выявления бактерионосительства. Питательные среды.

8. Бактериальные менингиты другой этиологии. Лабораторная диагностика менингитов, вызванных Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae.

9. Этиология абсцессов головного мозга. Микробиологическое исследование патологического материала при абсцессах головного мозга.

10. УИРС: Микробиологическая диагностика эцефалитов бактериальной этиологии (M. tuberculosis, T. pallidum, N. meningitidis).

 

Основная литература:

1. Клиническая лабораторная аналитика. Том IV./ Под ред. В.В. Меньшикова. –М.:Агат-Мед, 2003.-816 с.

2. А.Н. Маянский Микробиология для врачей (очерки патогенетической микробиологии). Нижний Новгород: Изд-во НГМА, 1999.

3. Медицинская микробиология. Часть первая./ Под. ред. А.М. Королюка и В.Б. Сбойчакова. –СПб., 1999. – 272с.

4. Медицинская микробиология./ Под. ред. В.И. Покровского. – М.:ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1999.

5. Конспект лекций.

Дополнительная литература:

1.: Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: Учебник для мед. вузов./ Под. ред. А.И. Коротяева, С.А. Бабичева –СПб.: СпецЛит, 2000.

2. Справочник по клинической микробиологии./ Под. ред. В.В. Тец -СПб.: Стройлеспечать, 1994. – 224с.

3. Приказ №535 то 22апреля 1985 года.

 

Проведение исследования.

Исследование ликвора предусматривает следующие этапы:

• Центрифугируют образец при 2500-3000 об/мин (1500 х g) 15-20 мин., если позволяет объем материала (>1мл).

• Стерильной пастеровской пипеткой собирают надосадочную жидкость, оставляя в пробирке 0,5-1 мл осадочного материала.

• Надосадочную жидкость используют для обнаружения антигена серологическими методами (в реакции встречного иммуноэлектрофореза, в латекс-агглютинации) и сохраняют ее в холодильнике до 1 недели на случай необходимости проведения дополнительных исследований.

• Осадок тщательно перемешивают вращением пробирки не менее 30 сек; не следует для этих целей использовать пипетку, так как бактерии и клетки могут осесть на стенках пробирки, что может привести к получению ложно отрицательного результата.

• Стерильной пипеткой засевают по 1 -2 капли ликвора на предварительно прогретые в термостате плотные питательные среды, а оставшийся в пробирке материал - в 0,1% питательный полужидкий агар (среда обогащения). Если ликвора мало, то его засевают только на среду обогащения.

• Из оставшегося после посевов материала готовят мазок на обезжиренном в спирте стекле, позволяя капле свободно растечься до большого размера; высушивают на воздухе в биологически защищенном боксе. При исследовании ликвора с неопределённым возбудителем или на менингококк мазки после высушивания фиксируют спиртом или на пламени и окрашивают метиленовым синим или по Граму в модификации Калины. Результаты микроскопии оценивают сразу же и сообщают клиницисту.

Если пробирка с ликвором выглядит пустой или содержит всего 1-5 капель жидкости, а дополнительно получить образец не удается, предпринимают следующее:

• При наличии всего 1 капли ликвора стерильной пастеровской пипеткой берут частичку материала для приготовления мазков в окраске по Граму.
• Стерильной пастеровской пипеткой вносят около 1 мл бульона в пробирку, закупоривают ее и переворачивают несколько раз для перемешивания содержимого, а затем уже производят посевы как указано выше.

Если ликвор прозрачный, то центрифугирование не производится, мазок не делается, и вся его часть, оставшаяся после посева в чашки и серологических проб, засевается в среду обогащения. При необходимости проводят специальные исследования на грибы, микобактерии, паразиты и вирусы.

Культивирование

Проводят посев гнойного ликвора или ресуспензированного осадка на чашку со свежеприготовленными средами. Капли материала слегка растирают подогретым шпателем на поверхности агара. После этого одну чашку с простым агаром помещают в термостат в обычной атмосфере при 37°С, а две другие инкубируют при повышенной концентрации СО₂. Инкубация при повышенных концентрациях СО₂ способствует выявлению патогенных нейсерий, пневмококков, листерий и др. При подозрении на H. influenzae производят посев на чашку с шоколадным агаром. Пробирки с полужидким агаром инкубируют при 37ºС в аэробных условиях.

На второй день просматривают сделанные накануне посевы СМЖ. При появлении роста на плотных питательных средах изучают характер роста, морфологию выросших бактерий при окраске по Граму.

У бактерий, выросших на плотных питательных средах, определяют чувствительность к антибиотикам, а также проводят отсевы на элективные среды для получения чистой культуры с последующей их идентификацией.

При отсутствии роста колоний на твёрдых питательных средах делают высев из среды накопления на чашку с сывороточным агаром и КА.

Твёрдые среды с посевами ликвора при отсутствии роста на протяжении 24 часов надо инкубировать в течение 3-6 дней. При отрицательных результатах высевы повторяют через 8-10 дней.

При необходимости проводят специальные исследования на грибы, микобактерии, паразиты и вирусы.

Кафедра клинической лабораторной диагностики