Работа № 3. Характер роста микроорганизмов на жидких питательных средах

ЗАНЯТИЕ 1.1.4

Физиология микроорганизмов. Бактериологический метод диагностики

 

Цель занятий:

изучить условия и методы культивирования микроорганизмов, освоить бактериологический метод диагностики.

 

Студент должен знать:

1. Особенности метаболизма бактерий.

2. Рост и размножение бактерий. Фазы размножения.

3. Питание бактерий.

4. Основные принципы культивирования.

5. Ферменты бактерий. Идентификация бактерий по ферментативной активности.

Студент должен уметь:

· Применять бактериологический метод диагностики для идентификации бактерий.

 

Студент должен владеть:

· алгоритмом лабораторной диагностики инфекционных болезней;

· методами анализа и оценки результатов лабораторной диагностики по выявлению возбудителей

 

 

Работа № 1. Питательные среды

 

Цель: изучить питательные среды, применяемые в бактериологии и вирусологии.

 

Самостоятельная работа: классифицировать предложенные питательные среды, результаты оформить в виде таблицы (см. теоретическую справку).

 

 

среда	происхождение	консистенция	назначение
	естест-венное	искусст-венное	жидкая	полужидкая	плотная	общего	ДДС	элективные
Мясопептон- ный агар (МПА)
Мясопептон ный бульон (МПБ)
1 % пептонная вода
Среда Эндо
Среды Гисса
Кровяной агар
Молоко
Желточно- солевой агар (ЖСА)
Среда 199

Вывод:

 

 

______________________________________________________________________________________

 

Работа № 2. Характер роста бактерий на питательных средах

(культуральные свойства)

 

Цель: изучить характер роста бактерий на плотной питательной среде (МПА).

Самостоятельная работа: описать культуральные свойства колоний,выросших на МПА, результаты внести в таблицу.

Критерии	Варианты описания	Описание колонии
1) форма	Круглая, розеткообразная, в форме листа и др..
2) размер	Крупные – d > 4-5 мм; Средние - d = 2-4 мм; Мелкие - d до 2 мм.
3) характер края	Гладкий (S-тип) Шероховатый (R-тип)
4) пигмент (цвет)	Белый, желтый, красный и др.
5) поверхность	Плоская, выпуклая, куполообразная, с выпуклым центром, с вогнутым центром и др.
6) прозрачность	Прозрачная, непрозрачная, полупрозрачная
7) структура	Гомогенная, негомогенная
8) консистенция (вязкость)	Сухие, вязкие, слизистые, маслообразные и др.

Вывод:

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

 

Работа № 3. Характер роста микроорганизмов на жидких питательных средах

Цель: изучить особенности роста микроорганизмов на жидких питательных средах

Самостоятельная работа: описать характер роста на жидкой питательной среде

 

 

Опыт № 1 Опыт № 2 Опыт № 3

МПБ МПБ 1% пептонная вода

(кишечная палочка) (возбудитель сибирской язвы) (возбудитель холеры)

Результат (х арактер роста):

_________________ __________________ ___________________

Вывод:

_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Работа № 4. Техника посева на питательные среды

Цель: ознакомиться с техникой посева на жидкие и плотные питательные среды и указать значение метода (см. теоретическую справку).

Самостоятельная работа: рассмотреть готовые демонстрационные посевы, зарисовать и указать назначение каждой техники посева.

 

Название	Рисунок	Значение
1) седиментация по Коху
2) посев по Дригальскому
3) посев по Шукевичу
4) посев методом укола
5) посев на скошенный агар

 

Вывод:

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

 

Работа № 5. Биохимическая активность аэробов (дифференциально-диагностические признаки)

Цель: изучить ферментативную активность микроорганизмов с позиции их дифференциации (см. теоретическую справку)

Самостоятельная работа: определить сахаролитическую и протеолитическую активность предложенной культуры и идентифицировать микроорганизм.

 

А) сахаролитическая и протеолитическая активность

 

вид м/о	Сахаролитическая активность	Протеолитическая активность
лактоза	глюкоза	мальтоза	маннит	сахароза	индол	Н2S

Вывод: _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

 

Б) каталазная активность аэробов

Цель: изучить каталазную активность микроорганизмов; определить тип дыхания исследуемой культуры (см. теоретическую справку).

Самостоятельная работа: определить каталазную активность исследуемой культуры.

 

Результат: _______________________________

_________________________________________

_________________________________________

 

Вывод: __________________________________________________________________

___________________________________________________________________________

___________________________________________________________________________

__________________________________________________________________________

Работа № 6. Алгоритм выделения чистых культур аэробных микроорганизмов

Цель: освоить алгоритм выделения и идентификации чистых культур аэробных микроорганизмов.

Самостоятельная работа: под руководством преподавателяразобрать схему бактериологического метода диагностики возбудителей инфекционных болезней

(см. теоретическую справку).

 

Алгоритм выделения чистых культур аэробных микроорганизмов

 

1 этап

 

2 этап

 

3 этап

а) д)

4 этап

 

III

 

е) ⃰

б)

 

 

е)

 

в) РА

 

ж)

 

 

г)

 

1 этап. Забор и доставка исследуемого материала

2 этап. Посев материала на питательные среды с целью получения изолированных колоний

3 этап Накопление чистой культуры на скошенной питательной среде

4 этап. Идентификация выделенной чистой культуры:

а) изучение морфологических и тинкториальных свойств;

б) изучение культуральных свойств:

в) изучение антигенной структуры возбудителя с помощью постановки реакции агглютинации на стекле с поливалентными, моновалентными и монорецепторными сыворотками;

г) изучение биохимических свойств возбудителя по результатам посева на дифференциально-диагностические среды (ДДС);

д) биопроба на лабораторных животных – изучают клинику и патогенез заболевания;

е) реакция фаголизабельности с диагностическими бактериофагами для выявления вида возбудителя;

е)* реакция фаготипирования - проведение внутривидовой идентификации для выявления источников инфекции;

ж) определение чувствительности микробов к антибиотикам диско-диффузионным методом (метод бумажных дисков).

 

Подпись преподавателя ______________________________________________________________

Самостоятельная работа во внеурочное время

Ответьте на следующие вопросы:

Что изображено на схеме?

1-

 

2-

 

3-

 

4-

1 2 3 4

Метод Дригальского

Стерильной пипеткой материал помещают на поверхность МПА в чашку Петри

 

посев шпателем (газоном) посев петлей (штрихом)

Стерильным шпателем материал Чашку Петри с МПА делят на

тщательно распределяют по 4 сектора. Исследуемый мате-

поверхности агара. Затем, не беря риал стерильной петлей вносят

нового материала и, не обжигая в 1 сектор и делают штрихи,

шпатель, делают посев на 2 и 3 затем такие же линии проводят

чашку МПА. и на других секторах.

На последних секторах вырастают

отдельные колонии.

1 2 3 1 2

 

изолированные колонии 4 3

4 сектор - изолированные колонии

Снижение концентрации микробов

Метод седиментации по Коху -основан на свободном оседании микроорганизмов на питательную среду в чашку Петри из воздуха. Применяется для определения загрязненности воздуха микроорганизмами.

Метод укола -применяется для выращивания анаэробов или выявления характерного признака микроба, т.к. рост по ходу укола типичен для рада бактерий. Также применяется для длительного хранения культур.

Посев на скошенный агар – применяется для накопления биомассы, получения чистой культуры и их хранения.

 

Методы, основанные на биологических свойствах микроорганизмов

■ Метод Шукевича. Исследуемый материал засевают в конденсационную воду скошенного агара. При размножении подвижные формы микробов из конденсационной воды дают «ползущий» рост по скошенному агару. Отсевая верхние края культуры в конденсационную воду свежескошенного агара и повторяя это несколько раз, можно получить чистую культуру.

■ Метод прогревания позволяет отделить спорообразующие бациллы от не споровых форм. Прогревают исследуемый материал на водяной бане при 80°С 10-15 мин. Вегетативные формы погибают, а споры сохраняются и при посеве на соответствующую питательную среду прорастают.

■ Метод фильтрации основан на пропускании исследуемого материала через специальные фильтры с определенным диаметром пор и разделение содержащихся микроорганизмов по величине. Этот метод применяется для очистки вирусов от бактерий, а также при получении фагов и токсинов (в фильтрате - чистый фаг, очищенный токсин).

 

к работе № 5

Б) Каталазная активность. Каталаза - это фермент, катализирующий реакцию разложения перекиси водорода с образованием воды и кислорода. Каталазу содержат аэробы и факультативные анаэробы, но она отсутствует у облигатных анаэробов. Обнаружить каталазу можно по пузырькам кислорода, которые начинают выделяться сразу же после смешивания микробных клеток с 1% раствором перекиси водорода. На предметное стекло помещают каплю перекиси водорода и суспендируют в ней небольшое количество культуры микроорганизмов, выращенной на плотной среде.

к работе № 6

Бактериологический метод является основным при диагностике инфекционных заболеваний. Его сущность заключается в определении вида возбудителя инфекции, следовательно, можно поставить этиологический (окончательный) диагноз. Основной недостаток метода – длительность исследования – от 3х до 5ти суток, а в отдельных случаях и более.

Успех проведения бактериологического метода во многом зависит от предварительного этапа, включающего забор исследуемого материала и его транспортировку, оформление направления в бактериологическую лабораторию. При этом необходимо соблюдать ряд правил:

1. Забор исследуемого материала следует провести до начала антибактериальной терапии или через 8-10 часов после введения последней дозы антибиотика. Чтобы избежать загрязнения пробы микрофлорой окружающей среды, необходимо соблюдать строжайшую антисептику. Для этого используют стерильный материал: а) ватные тампоны для взятия материала из раны, со слизистых оболочек (глаз, зева, носа); б) проволочную петлю для взятия материала из влагалища, анального отверстия; в) шприц для взятия крови, гноя; г) стерильную посуду для непосредственного сбора в нее мочи, мокроты, испражнений.

2. Транспортировку полученного материала следует проводить в максимально короткие сроки (2-3 часа) в специальных биксах или пеналах.

3. Направление прилагают к клиническому образцу в качестве сопроводительного документа. Оно содержит основные сведения, необходимые для проведения микробиологического исследования:

- фамилия, имя, отчество, возраст пациента;

- предполагаемый диагноз заболевания;

- предшествующая антимикробная терапия;

- характер материала;

- дата и время взятия материала;

- цель исследования;

- название лечебного учреждения, номер отделения, палаты;

- подпись лечащего врача.

Бактериологический метод осуществляется в два этапа.

1. Выделение чистой культуры возбудителя (1-2 суток).

2. Идентификация чистой культуры (1-3 суток).

На первом этапе проводится посев исследуемого материала на плотную или жидкую питательную среду, оценка культуральных свойств, отбор подозрительных колоний и их отсев на скошенный агар. Этап идентификации включает обязательное изучение морфологии, биохимических свойств и антигенной структуры выделенной чистой культуры, а также проведение дополнительных исследований по определению антибиотикочувствительности, фагочувствительности, фаготипирования, изучение патогенных и персистентных свойств.

ЗАНЯТИЕ 1.1.4

Физиология микроорганизмов. Бактериологический метод диагностики

 

Цель занятий:

изучить условия и методы культивирования микроорганизмов, освоить бактериологический метод диагностики.

 

Студент должен знать:

1. Особенности метаболизма бактерий.

2. Рост и размножение бактерий. Фазы размножения.

3. Питание бактерий.

4. Основные принципы культивирования.

5. Ферменты бактерий. Идентификация бактерий по ферментативной активности.

Студент должен уметь:

· Применять бактериологический метод диагностики для идентификации бактерий.

 

Студент должен владеть:

· алгоритмом лабораторной диагностики инфекционных болезней;

· методами анализа и оценки результатов лабораторной диагностики по выявлению возбудителей

 

 

Работа № 1. Питательные среды

 

Цель: изучить питательные среды, применяемые в бактериологии и вирусологии.

 

Самостоятельная работа: классифицировать предложенные питательные среды, результаты оформить в виде таблицы (см. теоретическую справку).

 

 

среда	происхождение	консистенция	назначение
	естест-венное	искусст-венное	жидкая	полужидкая	плотная	общего	ДДС	элективные
Мясопептон- ный агар (МПА)
Мясопептон ный бульон (МПБ)
1 % пептонная вода
Среда Эндо
Среды Гисса
Кровяной агар
Молоко
Желточно- солевой агар (ЖСА)
Среда 199

Вывод:

 

 

______________________________________________________________________________________

 

Работа № 2. Характер роста бактерий на питательных средах

(культуральные свойства)

 

Цель: изучить характер роста бактерий на плотной питательной среде (МПА).

Самостоятельная работа: описать культуральные свойства колоний,выросших на МПА, результаты внести в таблицу.

Критерии	Варианты описания	Описание колонии
1) форма	Круглая, розеткообразная, в форме листа и др..
2) размер	Крупные – d > 4-5 мм; Средние - d = 2-4 мм; Мелкие - d до 2 мм.
3) характер края	Гладкий (S-тип) Шероховатый (R-тип)
4) пигмент (цвет)	Белый, желтый, красный и др.
5) поверхность	Плоская, выпуклая, куполообразная, с выпуклым центром, с вогнутым центром и др.
6) прозрачность	Прозрачная, непрозрачная, полупрозрачная
7) структура	Гомогенная, негомогенная
8) консистенция (вязкость)	Сухие, вязкие, слизистые, маслообразные и др.

Вывод:

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

 

Работа № 3. Характер роста микроорганизмов на жидких питательных средах

Цель: изучить особенности роста микроорганизмов на жидких питательных средах

Самостоятельная работа: описать характер роста на жидкой питательной среде

 

 

Опыт № 1 Опыт № 2 Опыт № 3

МПБ МПБ 1% пептонная вода

(кишечная палочка) (возбудитель сибирской язвы) (возбудитель холеры)

Результат (х арактер роста):

_________________ __________________ ___________________

Вывод:

_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________