Мы поможем в написании ваших работ!



ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?

Метод бумажных дисков (диско-диффузионный)

Поиск

а) Замерить на чашке со средой АГВ (агар Гурьева-Васильева) в миллиметрах диаметр задержки роста культуры. По справочному материалу оценить результат, данные внести в таблицу

 

 


 

Название антибиотика Диаметр задержки роста (мм) Устойчив R Умеренно устойчив I Чувствителен S
           
           
           
           
           
           

 

Вывод:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Теоретическая справка

Антибиотики – химические соединения биологического происхождения, оказывающие избирательно повреждающее или губительное действие на микроорганизмы. Антибиотики, применяемые в медицинской практике, продуцируются актиномицетами (лучистыми грибами), плесневыми грибами, а также некоторыми бактериями. К этой группе относят также и синтетические аналоги и производные природных антибиотиков.

По спектру микробного действия антибиотики отличаются: одни влияют преимущественно на Гр+ бактерии (биосинтетические пенициллины, макролиды), другие – в основном на Гр- бактерии (полимиксины). Ряд антибиотиков обладает широким спектром действия (полусинтетические пенициллины, цефалоспорины, аминогликозиды, тетрациклины, левомицетин, рифампицин и т.д.).

Антибиотики воздействуют на микроорганизмы, оказывая бактериостатический эффект, подавляя их размножение, или бактерицидный эффект, вызывая гибель микробов.

Известны следующие основные механизмы антимикробного действия антибиотиков:

1. нарушение синтеза клеточной стенки бактерий (пенициллины, цефалоспорины);

2. нарушение проницаемости цитоплазматической мембраны (полимиксины);

3. нарушение биосинтеза белка (тетрациклины, аминргликозиды. левомицетин и др);

4. нарушение синтеза ДНК (рифампицин).

 

Схема описания антибиотиков

Название препарата ………………….

Классификационное положение: антибиотик

Действующее начало: антибиотик (механизм действия на микробную

клетку)

Получение: путем биосинтеза

полусинтетические

путем химического синтеза

Применение: лечение инфекций

Способ применения: перорально; парентерально; местное применение

Методы изучения антибиотикочувствительности

Метод бумажных дисков (диско-дуффузионный)

Методика. Бактериальную культуру засевают газоном на питательный агар в чашку Петри.

На засеянную поверхность пинцетом помещают на одинаковом расстоянии друг от друга бумажные диски, содержащие определенные дозы разных антибиотиков. Посев инкубируют при 37°С до следующего дня. По диаметру зон задержки роста бактерий определяют ее чувствительность к антибиотикам.

Для получения достоверных результатов необходимо применять стандартные диски и питательные среды, для контроля которых используются эталонные штаммы соответствующих микроорганизмов.

Метод дисков не дает надежных данных при определении чувствительности микроорганизмов к плохо диффундирующим в агар полипептидным антибиотикам (например, полимиксин, ристомицин). Если эти антибиотики предполагается использовать для лечения, рекомендуется определять чувствительность методом серийных разведений.

 

Оценка результатов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методами дисков и серийных разведений

Антибиотик Метод дисков: диаметры зон задержки роста на среде АГВ (агар Гурьева-Васильева) Метод серийных разведений: минимальная ингибирующая концентрация мкг/мл
Устойчивые Умеренно устойчивые Чувстви- тельные Устойчивые Чувстви- тельные
Бензилпенициллин ≤ 20 21-28 ≥ 29 - ≤ 0.1
Ампициллин ≤ 20 21-28 ≥ 29 - ≤ 0.2
Карбенициллин ≤ 14 15-18 ≥ 19 ≥ 32 ≤ 16
Метициллин ≤ 13 14-18 ≥ 19 - ≤ 3
Оксациллин ≤ 15 16-19 ≥ 20 - ≤ 3
Цефалексин - - - ≥ 32 ≤ 10
Цефалотин ≤ 14 15-18 ≥ 19 ≥ 32 ≤ 10
Стрептомицин ≤ 16 17-19 ≥ 20 ≥ 15 ≤ 6
Неомицин ≤ 12 13-16 ≥ 17 - ≤ 10
Канамицин ≤ 14 15-18 ≥ 19 ≥ 25 ≤ 6
Мономицин ≤ 13 14-17 ≥ 18 - ≤ 10
Гентамицин ≤15   ≥ 16 ≥ 6 ≤ 4
Тетрациклин ≤ 16 17-20 ≥ 22 ≥ 12 ≤ 2
Эритромицин ≤ 17 18-21 ≥ 22 ≥ 8 ≤ 2
Линкомицин ≤ 19 20-23 ≥ 24 ≥ 8 ≤ 2
Левомицетин ≤ 15 16-18 ≥ 19 ≥ 16 ≤ 8
Рифампицин ≤ 12 13-15 ≥ 16 ≥ 8 ≤ 2
Полимиксин ≤ 11 12-14 ≥ 15 ≥ 50 Ед/мл -
Ристомицин ≤ 9 10-11 ≥ 12 - ≤ 5

Метод серийных разведений

б) определить минимально-подавляющую концентрацию антибиотиков по отношению к культуре золотистого стафилококка (St. aureus). Выбрать антибиотик для лечения.

Гентамицин к.к. к. а/б к.б.

 


Разведения антибиотика

25 12,5 6,25 3,125 1,56 0,78 0,39

 

Результат:_________________________________________________________________

 

Ампициллин к.к. к. а/б к.б.

 

 


Разведения антибиотика

25 12,5 6,25 3,125 1,56 0,78 0,39

 

Результат:_________________________________________________________________

 

Вывод: ___________________________________________________________________

__________________________________________________________________________

__________________________________________________________________________

Теоретическая справка

Метод серийных разведений

Данным методом определяют минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) антибиотика рост исследуемой культуры бактерий.

Методика. Готовят основной раствор, содержащий определенную концентрацию антибиотика (мкг/мл или ЕД/мл) в специальном растворителе или буферном растворе. Из него готовят последующие разведения в бульоне (в объеме 1 мл), после чего к каждому разведению добавляют 0,1 мл исследуемой бактериальной суспензии, содержащей 106-107 бактериальных клеток в 1 мл. В последнюю пробирку вносят 1 мл бульона и 0,1 мл суспензии бактерий (контроль культуры). Посевы инкубируют при 37°С до следующего дня, после чего отмечают результаты опыта по помутнению питательной среды, сравнивая с контролем культуры. Последняя пробирка с прозрачной питательной средой указывает на задержку роста исследуемой культуры бактерий, под влиянием содержащейся в ней минимальной ингибирующей концентрации антибиотика.

Номер пробирки Разведение антибиотика концентрация антибиотика, мкг/мл Исследуемая культура, мл рост бактерий (помутнение среды)
  1:100   0,1 -
  1:200   0,1 -
  1:400   0,1 -
  1:800 12,5 0,1 -
  1:1600 6,25 0,1 +
  1:3200 3,12 0,1 +
  1 мл бульона без антибиотика 0,1 + (контроль)

Оценку результатов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам проводят по таблице, которая содержит значения МИК антибиотиков для устойчивых и чувствительных штаммов.

К чувствительным относятся штаммы микроорганизмов, рост которых подавляется при концентрациях препарата, обнаруживаемых в сыворотке крови больного при использовании обычных доз антибиотиков. К умеренно устойчивым относятся штаммы, для подавления роста которых требуются концентрации, создающиеся в сыворотке крови при введении максимальных доз препарата Устойчивыми являются микроорганизмы, рост которых не подавляется препаратом в концентрациях, создаваемых в организме при использовании максимально допустимых доз.

в) классифицировать антибиотики.

Название антибиотика Классифика-ционное положение Действующее начало Получение   Применение   Способ применения
           
           
           
           

Работа № 4. Методы изучения бактериальных вирусов (фагов)

Цель работы: изучить методы применения в практической медицине диагностических и лечебно-профилактических бактериофагов.

Самостоятельная работа:

а) учесть результат опыта по определению родовой принадлежности исследуемой культуры, выделенной от больного с кишечной инфекцией с помощью диагностических бактериофагов.



Поделиться:


Последнее изменение этой страницы: 2016-08-16; просмотров: 937; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы!

infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 3.12.34.253 (0.011 с.)