Тема. Анализ микрофлоры воздуха в помещении.

Цель работы:

- приобретение навыков и умений в количественном определении микроорганизмов чашечным методом.

Задачи:

-изучить количественный метод определения микроорганизмов воздуха чашечным методом;

- произвести микробиологический посев из воздуха различных помещений седиментационным методом;

- произвести подсчет колоний по правилу Омелянского.

Сущность метода:

- вначале делают посев исследуемого субстрата в чашке Петри с плотной питательной средой. Посевы термостатируют, и выросшие колонии подсчитывают. Метод широко используется для определения микроорганизмов в пищевых продуктах, воде, воздухе.

Микрофлора воздуха

Микробная загрязнённость воздуха подчиняется законам аэробиологии имеет непостоянный и локальный характер. Летом обсеменённость воздуха в несколько раз выше, чем зимой. Особенно сильно микроорганизмами насыщен атмосферный воздух над крупными городами. Микрофлора атмосферного воздуха и микрофлора воздуха жилых помещений различается.

Микрофлора атмосферного воздуха. В атмосферном воздухе стафилококки и стрептококки обнаруживают лишь в 3,7% проб, взятых в местах большого скопления людей. Среди микроорганизмов доминируют виды, обитающие в почве. В атмосферном воздухе в основном встречают три группы микроорганизмов.

· Пигментообразующие кокки в солнечные дни составляют до 70-80% всей флоры (пигмент защищает бактерии от инсоляции).

· Почвенные споровые и гнилостные микроорганизмы. Их содержание резко увеличивается в сухую и ветреную погоду.

· Плесневые грибы и дрожжи. Их содержание увеличивается при повышении влажности воздуха.

В отличие от воздуха закрытых помещений, в атмосферном воздухе постоянно происходят процессы самоочищения. Этот процесс происходит благодаря осадкам, инсоляции, температурным воздействиям и другим факторам. В свою очередь атмосферный воздух сам по себе — фактор очищения воздуха жилых помещений.

Микрофлора воздуха закрытых помещений более однообразна и относительно стабильна. Среди микроорганизмов доминируют обитатели носоглотки человека, в том числе патогенные виды, попадающие в воздух при кашле, чихании или разговоре. Основной источник загрязнения воздуха патогенными видами — бактерионосители. Уровень микробного загрязнения зависит главным образом от плотности заселения, активности движения людей, санитарного состояния помещения, в том числе пылевой загрязнённости, вентиляции, частоты проветривания, способа уборки, степени освещённости и других условий. Так, регулярные проветривания и влажная уборка помещений снижает обсеменённость воздуха в 30 раз (по сравнению с контрольными помещениями). Самоочищения воздуха закрытых помещений не происходит.

Признаки колоний микроорганизмов.

Важные признаки колоний — их размеры и форма. Колонии могут быть большими или мелкими.

Величина колоний, размеры колоний — признак, позволяющий различать различные виды, роды и даже типы бактерий. В большинстве случаев колонии грамположительных бактерий мельче колоний грамотрицателъных бактерий.

Колонии бактерий могут быть плоскими, приподнятыми, выпуклыми, иметь вдавленный или приподнятый центр.

 

Другой важный признак — форма краёв колоний. При изучении формы колоний учитывают характер её поверхности: матовый, блестящий, гладкий или шероховатый. Края колоний могут быть ровными, волнистыми, дольчатыми (глубоко изрезанными), зубчатыми, эрозированными, бахромчатыми и т.д.

 

Определение количества микроорганизмов

В воздухе помещения.

Воздух неблагоприятная среда для микроорганизмов, так как в нем нет питательных веществ и постоянной оптимальной температуры.

Санитарную оценку воздуха жилых и производственных помещений осуществляют по общему микробному числу (ОМЧ). В воздухе производственных помещений определяют ОМЧ в единице объема воздуха по методу Омелянского – седиментационный метод. Метод основан на способности микроорганизмов под влиянием силы тяжести оседать, падать вниз.

Правило Омелянского:

На площадь чашки Петри 100 см^2 в течение 5 минут оседает столько микроорганизмов, сколько их содержится в 10 литрах воздуха.

 

На основании этого правила им выведена формула для расчета количества микроорганизмов в 1 м³ воздуха:

X – количество микроорганизмов в 1 м² воздуха

А – число колоний, выросших на чашке Петри при анализе

100 – число для пересчета на 1 м³ с 10 дм³

5 – коэффициент времени Омелянского

100 – площадь чашки Петри Омелянского (см²)

В – площадь чашки Петри, взятой для анализа (см²)

t –продолжительность времени (мин), в течение которого была открыта чашка (5 мин).

Ход работы

1. Приготовить плотную питательную среду для выращивания микроорганизмов – МПА (мясо-пептонный агар): по схеме растворить МПА в дистиллированной воде (3,8 г сухого МПА + 100 мл дистиллированной воды), прокипятить 30 мин, слегка остудить и разлить в стерильные чашки Петри. После застывания МПА на дне чашек, плотную среду следует подсушить в сушильном шкафу при температуре 45⁰С в течение 10 мин (агаровая пластинка должна быть обращена вниз).

2. Произвести посев микроорганизмов из воздуха различных помещений учебного заведения: открыть чашки Петри со средой в исследуемом помещении на 5 мин, закрыть и поместить в термостат (при 30⁰С) на 72 часа для определения ОМЧ, для определения дрожжей и плесневых грибов – (при 25⁰С) на 5-7 суток. Термостатирование проводят переворачивая чашки Петри крышками вниз.

3. После термостатирования производят подсчет колоний, выросших на чашках Петри, и делают пересчет на 1 м² воздуха согласно правилу Омелянского. Подсчет колоний проводят с помощью счетчика колоний. Чашки при подсчете размещают дном кверху на темном фоне.

При подсчете колоний придерживаются следующих правил:

- если на чашке выросло небольшое количество колоний (до 100), подсчитывают все колонии;

- если колонии распределены равномерно и их количество около 200-300, чашки делят маркером на 6 секторов и считают колонии в двух противоположных секторах, вычисляют среднее и умножают на 6.

 

Выводы

Согласно нормативным документам, воздух закрытых помещений считают чистым при содержании в 1 м³ до 2000 бактерий.

В воздухе пищевых производственных цехов должно содержаться не более 100-500 бактерий в 1 м³ в зависимости от характера производства. В воздухе пищевых предприятий нормируется содержание возбудителей порчи продуктов – плесневых грибов и дрожжей.

Объект анализа	Оценка
	Хорошо	Удовлетворительно
	Количество	Количество
	плесеней	дрожжей	плесеней	дрожжей
	количество колоний, выросших на чашке Петри
Воздух цеховых помещений предприятий	до 5	до 5	до 5	до 5
Воздух остальных помещений предприятия	5-10	до 5	10-15	5-10

 

Контрольные вопросы

1. От каких факторов зависит микрофлора воздуха?

2. Как определить степень загрязненности воздуха микроорганизмами?

3. Какие формы микроорганизмов чаще всего бывают патогенными?

 

 

Лабораторная работа №12