Возбудитель пастереллёза (биологические свойства возбудителя, бактериологическая диагностика, иммунитет и биопрепараты).

Пастереллез (геморрагическая септицемия) – инфекционная болезнь многих видов сельскохозяйственных и диких животных, в том числе птиц, характеризующаяся явлениями септицемии и воспалительно-геморрагическими процессами во внутренних органах, на серозных и слизистых оболочках.

Впервые возбудителя холеры кур в чистой культуре выделил Л. Пастер в 1880 г. Название Pasteurella возбудителю присвоено в честь ученого в 1910 г.

Морфология. P. multocida в мазках-отпечатках из крови и органов представляют собой грамотрицательные короткие овоидные палочки (длиной 0,4-1,2мкм и шириной 0,3-0,4мкм). При окраске по Романовскому-Гимзе имеют вид биполяров (интенсивно окрашиваются по полюсам). В мазках из культур пастереллы имеют вид коккоовоидных палочек, располагающихся одиночно, попарно, реже в виде коротких цепочек Неподвижные, образуют слизистые капсулы, спор не образуют.

Культуральные свойства. P. multocida – факультативный анаэроб. Оптимум температуры 37-38 0С, рН среды 7,2-7,4. Растут в МПБ и на МПА, но лучше, при внесении к ним сыворотки крови, на средах Хоттингера или Мартена. На МПА (S-формы) образуют мелкие, выпуклые, прозрачные, круглой формы колонии серого цвета, М-формы – более крупные слизистые колонии с непрозрачным центром; R-формы – шероховатые непрозрачные колонии. В косопроходящем свете колонии S-формы флюоресцируют, что связано с капсулообразованием; в МПБ – слабое равномерное помутнение среды и образование на дне пробирки слизистого осадка, поднимающегося при встряхивании в виде характерной косички. М-формы растут более интенсивно и дают более выраженный слизистый осадок. R-формы образуют хлопьевидный или зернистый осадок.

Биохимические свойства. Пастереллы ферментируют с образованием кислоты глюкозу, сахарозу, маннит, сорбит, не ферментируют лактозу, дульцит, аденит. Образуют индол, не разжижают желатин, на кровяном агаре не вызывают гемолиза, проба на каталазу положительная.

Антигенная структура. P. multocida имеет К-(капсульный) и О-(соматический) антигены. К-антигены разделены на четыре серологических типа: А, В, D и Е.

P. multocida серовара А (по Картеру) преимущественно поражает птиц, реже крупный рогатый скот и свиней, серовара В и Е вызывают острое заболевание домашних и диких животных, протекающее в виде геморрагической септицемии, серовар D встречается у всех видов животных.

Устойчивость. В окружающей среде невысокая. При 58 0С погибают за 20 минут, при 90 0С – за 10 минут, при кипячении – моментально. Выдерживают замораживание до – 70 0С. При высушивании на открытом воздухе гибнут за 2-3 суток. В почве выживают до 12 суток, в навозе – 14 суток, птичьем помете – до 72 суток, в гниющих трупах — до 3 месяцев, в зерне – до 44 суток. Дезинфицирующие растворы в принятых концентрациях (раствор, содержащий 5 % активного хлора, 3 % растворы формальдегида и гидроксида натрия) убивают пастерелл в течение 10 минут.

Патогенность. Патогенные и вирулентные свойства пастерелл варьируют и наиболее сильно выражены у животных того вида, от которого они выделены. Эпизоотические штаммы высоковирулентны для белых мышей и кроликов. Установлена корреляция между вирулентностью, капсуло- и токсинообразованием. Наибольшей вирулентностью обладают свежевыделенные культуры. В лабораторных условиях при хранении культур вирулентность пастерелл резко снижается.

Патогенез. При остром течении болезни пастереллы быстро размножаются, проникают в кровеносную и лимфатическую системы, вызывая септицемию. За счет образования эндотоксинов и других агрессивных субстанций повреждаются стенки сосудов, они

становятся проницаемы для плазмы, клеточных элементов, развивается геморрагический диатез, появляются отеки подкожной и межмышечной клетчатки. В результате нарушения кровообращения наступает некроз тканей.

Эпизоотологические данные. К пастереллезу наиболее восприимчив крупный рогатый скот (молодняк), куры, гуси, утки. Определенную устойчивость к пастереллезу имеют лошади и плотоядные. Пастереллы имеют широкую экологическую амплитуду, способны нормально развиваться в разнообразных условиях окружающей среды. В природе среди животных и птиц установлено широкое и длительное пастереллоносительство.

Источник возбудителя – больные и переболевшие животные (птица), выделяющие возбудителя с истечениями из носа, испражнениями. К заболеванию пастереллезом приводит ослабление резистентности организма под влиянием неблагоприятных факторов (неудовлетворительные условия содержания и кормления, стрессы). Основные пути заражения – аэрогенный и алиментарный. Пастереллез относится к респираторной инфекции.

Эпизоотические вспышки пастереллеза с острым проявлением болезни по типу геморрагической септицемии у крупного рогатого скота и диких жвачных в условиях СНГ обычно вызывает P. multocida типа В, у кур и индеек – P. multocida типа А. Спорадическую заболеваемость пастереллезом (подострое и хроническое течение болезни по типу энзоотической пневмонии) чаще вызывают у телят P. multocida типа А и Р- haemolytica; у свиней – P. multocida типов А и D и P. haemolytica.

Предубойная диагностика. При остром течении пастереллеза отмечают резкое повышение температуры, угнетенное состояние, конъюнктивит, опухание языка, затрудненное дыхание, кашель, отеки. Если поражен кишечник, то наблюдается понос, жажда от потери воды, прогрессирующее исхудание, бледность слизистых оболочек, упадок сил, вялость.

Послеубойная диагностика. Сверхострое (молниеносное) течение пастереллеза изменений в органах, как правило, не вызывает; острое – дает многочисленные кровоизлияния на отечной, слизистой оболочке дыхательных путей, под плеврой, брюшиной, эпикардом, в сердечной мышце, в подкожной клетчатке и паренхиматозных органах. В межчелюстном пространстве – студенистый инфильтрат. Лимфатические узлы головы, шеи, грудной полости, кишечника увеличены, гиперемированы. Селезенка без изменений. Печень увеличена, под капсулой видны некротические узелки. Легкие кровенаполнены, также с очажками некроза. Почки наполнены кровью, под капсулой – точечные кровоизлияния. Слизистая оболочка кишечника воспалена, с точечными или полосчатыми кровоизлияниями. При подостром течении эпикард усеян кровоизлияниями, в сердечной сумке скапливается экссудат, при хроническом течении имеет место гнойно-фибринозное воспаление дыхательных путей, очаговое воспаление легких, плеврит фибринозный перикардит, отложение хлопьев фибрина на легочной и костальной плевре. Легкие могут приобретать мраморный вид.

Для подтверждения диагноза необходимы лабораторные исследования: из патологического материала паренхиматозных органов и лимфоузлов делают мазки-отпечатки, окрашивают их методом Романовского-Гимзе и проводят бактериоскопию. Делают посев эмульсии из взятого материала на мясопептонный бульон и пластинчатый агар, ставят биопробу на белых мышах или кроликах.

Лабораторный диагноз. Для выделения пастерелл используют только свежий патологический материал от нескольких трупов больных животных. Для первичного выделения и культивирования пастерелл пригодны только обогащенные питательные среды, в том числе МПА, с 5-10 % крови барана или лошади или сывороточный МПБ. Посевы из внутренних органов (кровь, печень, селезенка, легкие, трубчатая кость, головной мозг) и из мест поражения (лимфатические узлы, отечная ткань и др.) инкубируют в термостате при 37 0С в течение 24-48 ч. Из патологического материала готовят мазки и окрашивают по Граму, Романовскому-Гимзе или синькой Леффлера.

Вирулентность выделенной культуры определяют путем постановки биологической пробы. Белых мышей или кроликов заражают культурой пастерелл, выделенной от крупного рогатого скота, свиней, овец, птиц (голубей, кур, уток). Белых мышей и кроликов заражают подкожно в дозе 0,2-0,5 мл суточной культурой пастерелл; голубей и 90-120 суточных цыплят – бульонной культурой в дозе 0,5 мл внутримышечно. Кроликов перед заражением исследуют на пастереллоносительство. С этой целью в течение трех дней до заражения им закапывают в носовые отверстия по две капли 0,5 % водного раствора бриллиантовой зелени. Появление гнойного истечения свидетельствует о пастереллоносительстве. Этих кроликов не используют в опыте.

Для биопробы применяют также кровь или суспензию из паренхиматозных органов от павших животных. Через 24-48 ч после заражения культурой или исследуемым материалом подопытные животные погибают. На основании морфологии, культурально-биохимических свойств и биопробы ставят диагноз на пастереллез.

Специфическая профилактика. У переболевших животных образуется нестерильный иммунитет. После вакцинации животные (особенно птицы) могут оставаться пастереллоносителями.

Для профилактики и лечения больных животных используют гипериммунную сыворотку. Пастереллы высокочувствительны к гентамицину, левомицетину, стрептомицину, тетрациклинам и некоторым сульфаниламидным препаратам.

Ветеринарно-санитарная оценка и мероприятия. При наличии инфильтратов, дистрофических изменений в мускулатуре и внутренних органах, тушу и все субпродукты направляют на утилизацию. Если органолептические показатели нормальны и результаты исследований на сальмонелл отрицательны, то тушу и внутренние органы направляют на изготовление вареных колбас. В случае обнаружения сальмонелл мясо обезвреживают проваркой или направляют на изготовление консервов, мясных хлебов. Внутренние органы утилизируют.

Кровь и кишки больных животных подвергают утилизации, шкуры дезинфицируют 1 % раствором соляной кислоты, разведенным в 20 % растворе поваренной соли в течение 2 суток в местах первичной переработки животных. Сбор эндокринного сырья не разрешается. Категорически запрещен вывоз с производства мяса и субпродуктов в сыром виде.

Молоко больных животных подлежит кипячению и использованию в хозяйстве.

Возбудители гемофилёзов.

Возбудители гемофилезов вызывают: гемофилезный полисерозит – инфекционная болезнь поросят послеотъемного возраста, характеризующаяся сепсисом, серозно-фибринозным воспалением плевры, перикардита, брюшны и суставов.

Гемофилезная плевропневмония – инфекционная болезнь свиней, характеризующаяся при остром течении геморрагическим воспалением легких и фибринозным плевритом, при подостром и хроническом – развитием очаговой гнойной некротизирующей пневмонией и фибринозным плевритом (2).

Классификация возбудителей:

Сем. Pasteurellaceae

Род Haemophilus

Виды:

H. Parasuis (1)

H. pleuropntumoniae.(2)

Восприимчивы свиньи, поросята в послеотъемный период.

Патогенез и факторы вирулентности: возбудитель заносится кровью на серозные оболочки или легочную ткань. Образуемые эндотоксины возбудителем вызывают различные воспалительные процессы.

Методы диагностики:

Материал для исследования:

в зависимости от локализации патологических изменений используют:

экссудат из перитониальной, плевральной полостей, соскобы с пораженных серозных оболочек;

легкие, средостенные и бронхиальные лимфатические узлы.

микроскопия:

методы окраски: по Граму;

микрокартина: полиморфные мелкие палочки до 0,5 мкм, могут быть в виде коротких цепочек и даже кокков;

грамотрицательны;

спор не образуют;

образуют капсулу;

неподвижны.

культивирование: на посев на питательные среды: шоколадный МПА (к расплавленному МПА при 90oC добавляют 10% крови барана – среда приобретает цвет шоколада), кровяной МПА и др. с баккормилками, для этого после посева исследуемого материала делают крестообразный посев кишечной палочки или стафилококка.

особенности выделения культуры: аэробы,оптимальная температура 37oC;

срок культивирования 18-20 часов

Культуральные свойства: на плотных питательных средах – мелкие слизистой консистенции колонии.

биохимические свойства: сахаролитические и протеолитические выражены слабо;

гемолиз не вызывают.

Биопроба: заражают внутрибрюшинно трех морских свинок или белых мышей.

Бруцеллы (история открытия, роль в патологии животных и человека, биологические свойства различных видов бруцелл). Патологический материал и бактериологические методы диагностики бруцеллеза; Биопрепараты.

Патологический материал и бактериологические методы диагностики бруцеллеза; Биопрепараты.

Бруцеллез– зоонозное инфекционно-аллергическое заболевание, склонное к хронизации и протекающее с преимущественным поражением опорно-двигательного аппарата, сердечно-сосудистой, нервной и половой систем.

История открытия возбудителей.

Бруцеллез как заболевание известен давно, со времен Гиппократа, но научное его изучение началось в 60-х годах Х1Х века. В то время оно получило название «средиземноморская, или мальтийская лихорадка» В 1886 г. Д.Брюс обнаружил возбудителя заболевания в мазках из селезенки погибшего от бруцеллеза больного (впоследствии этот возбудитель был назван В.melitensis). В 1897 году датские ученые выделили сходные микроорганизмы при инфекционных абортах у коров. В 1914 г. Д Траум обнаружил аналогичных возбудителей у больных свиней и назвали их В.suis. В 1920 г эти бактерии были объединены в один род, названный в честь Д.Брюсса бруцеллами. Позднее были выделены другие виды бруцелл: в 1957 г - В.neotomae(от кустарниковых крыс); в 1970 – В. оvis(от барана); В.canis(от гончих собак). Серологические исследования при диагностике бруцеллеза были начаты в 1897 году А.Райтом и Д.Семплом. Большой вклад в изучение заболевания внесли русские ученые А.Ф.Билибин, Г.П.Руднев, А.А.Вершилова и другие.

У животных заболевание проявляется инфекеционными абортами.

Таксономия

Род - Вrucella,

виды: В. abortus, В.melitensis, В.suis, В.саnis, Вovis, В.neatomae. Наиболее патогенны для человека – первые 3 вида.

Морфология. Возбудители представляют собой мелкие кокковидные палочки размерами 0,6 -1,5 х О,5 – 0,7 мкм, грам (-), неподвижные, спор не образуют. Свежевыделенные штаммы могут образовывать нежную капсулу. Бруцеллы отличаются выраженным полимофизмом; в мазках бактерии располагаются беспорядочно.

Культуральные свойства.

Бруцеллы – строгие аэробы. Они требова- тельны к питательным средам, для их роста необходимы тиамин, ниацин, биотин. Они хорошо растут на печеночном, сывороточном или кровяном агаре (с добавлением 0,5% эритроцитов барана). Особенностью бруцелл бычьего типа является их потребность в повышенном содержании в атмосфере углекислого газа. На плотных питательных средах бруцеллы образуют выпуклые гладкие мутноватые колонии с перламутровым оттенком (S-формы). При длительном выращивании колонии приобретают желто-зеленый оттенок. Возможна диссоциация вR-формы. В жидких средах наблюдается рост в виде диффузного помутнения. Характерен медленный рост бруцелл, особенно - первых генераций: при посеве из органов появляются через 1-3 недели и более. При пересеве лабораторных культур рост наблюдается через 1-2 дня. Оптимальные условия культивирования: температура - 370С, рН среды – 6,6-7,4.

Биохимическая активность

Выражена слабо: бруцеллы ферментируют глюкозу и арабинозу до кислоты, разлагают белки с образованием сероводорода, восстанавливают нитриты, индол не образуют.

Разделение на виды основано на биохимических различиях, в частности, на способности расти на средах с фуксином и тионином, на лизабельноти специфическими фагами, а также на агглютинабельности монороцепорными сыворотками.

Антигенная структура У бруцелл выявлено до 15 антигенных фракций. Различают родовой и поверхностный антигены. М-антиген доминирует у В.melitensis;A-антиген преобладает у В.abortusи Вsuis;R-антиген свойственен шероховатым формам. Третий, поверхностный антигенL, термолабильный, имеет сходство сVi-антигеном сальмонелл. Имеются общие антигены с возбудителями туляремии и с холерными вибрионами.

Факторы патогенности.

Бруцеллы обладают эндотоксином, имеющим высокую инвазивную способность. Они продуцируют такжеферменты патогенности: гиалуронидазу и нейраминидазу.Адгезивные свойствасвязаны с пилями-1 и белками наружной мембраны. Считают, что возбудитель, обладая высокойинвазивностью, может проникать в организм человека через неповрежденые кожные и слизистые покровы. Бруцеллы могут образовывать капсулу. Кроме того, бруцеллы обладают выраженными аллергогенными свойствами.

Резистентность. Возбудители довольно устойчивы во внешней среде: при температуре 10-130С они могут сохраняться в воде и влажной почве до 5 месяцев, в молоке – 9 месяцев, в сыре – до 1 года. Они устойчивы к низким температурам, и в замороженном мясе выживают до 5 месяцев. Хуже они переносят высокую температуру: при 700С погибают в течение 10 минут, при кипячении – мгновенно. Чувствительны к 3 % раствору хлорной извести. 1% хлорамину, 0,5% лизолу, 2% формалину, которые губят их за 5 минут

Эпидемиоогия.Основной источники резервуар инфекции - больные домашние животные: овцы, козы, свиньи, крупный рогатый скот. В редких случаях источником инфекции могут быть лошади, верблюды и некоторые другие животные, которые выделяют возбудителя с молоком, мочой, калом, околоплодной жидкостью.

У человека наиболее часто заболевание вызывается В.melitensis, которые обусловливают наиболее тяжелые формы заболевания. Реже человек заражается В.abortusот крупного рогатого скота, однако клинически выраженные инфекции при этом регистрируются редко. Наиболее опасными в смысле заражения являются периоды отелов скота, так как в околоплодной жидкости содержится большое количество возбудителей. Больной человек не опасен для окружающих.

Механизмы заражения- разнообразны; наиболее частый –фекальноно-оральный. Большую опасность представляют сырое молоко и молочные продукты, не подвергающиеся в процессе приготовления тепловой обработке (брынза, сыр). Мясо представляет меньшую опасность – только в случаях его недостаточной тепловой обработки. Контактно-бытовойпуть заражения возможен при попадании возбудителя на поврежденные кожные или слизистые покровы при уходе за больными животными; при оказании им родовспомогательной помощи или при разделке туш больных животных.Воздушно-капельный путьзаражения описан при вдыхании воздушно-пылевой смеси, содержащей инфицированные частицы шерсти, навоза, земли во время уборки помещения. Известны также случаи лабораторного заражения медицинских работников.

Патогене и клинические особенности.

Бруцеллы проникают в организм человека через слизистые оболочки или кожные

покровы, не оставляя никаких изменений в области входных ворот. Лимфогенным путем возбудители заносятся в региональные лимфоузы и накапливаются в них. Они подвергаются фагоцитозу, но способны выживать внутри фагоцитов за счет выделения низкомо- лекулярных факторов, угнетающих слияние фагосом с лизосомами. Внутри фагоцитов бруцеллы могут формировать L-формы и длительно перси- стировать в организме. Обратный переход в исходные формы обуслов- ливает рецидив болезни. Из разрушенных макрофагов возбудители попадают в кровоток и диссиминируют в печень, селезенку, почки, костный мозг, эндокард. В пораженных органах образуются очаги некроза, окруженные инфильтратами. Возбудители могут попасть в молочные железы человека и появляться в грудном молоке. Из-за метастатических очагов размножения бруцелл в органах в клинической картине заболевания появляются признаки очаговых поражений со стороны опорно-двигательного аппарата, нервной и других систем. С выходом возбудителей в кровеносное русло связаны явления бактеремии и эндотоксинемии. При хроническом процессе формируются аутоиммунные механизмы

Клинические особенности. Инкубационный период – 1-4 недели (он может длиться до 2-3 месяцев). Болезнь начинается с озноба, подъема температуры, нарастающей интоксикации, слабости, могут развиваться явления орхита, эпидидимита, артрита. Поражения нервной системы проявляются в виде плекситов и радикулитов. У женщин может развиться оофорит, эндометрит, нарушения менструального цикла.

Профилактика

Неспецифическаяие мероприятиязаключаются в соблюдении правил личной гигиены и режима обработки сельскохозяйственной продукции; в осуществлении профилактики заболеваемости среди животных.

Специфическаяпрофилактика. В эндемичных очагах инфекции проводят вакцинацию живой вакциной, получаемой из аттенуированного штамма В. аbortus. Вакцинация – накожная, однократная. При отрицате-льной кожной пробе и отсутствии выработки антител проводится ревакцинация.

Лечение Терапия основана на применении антибиотиков широкого спектра действия. Препараты выбора: тетрациклины, аминогликозиды (стрептомицин); в тяжелых случаях – рифампицин Для лечения хронических форм заболевания применяется убитая бруцеллезная вакцина.

Микробиологическая диагностика.

При бактериологическом методе исследуемым материалом является: кровь, пунктат костнго мозга, моча. Посев производится в 2 флакона, в одном из них создается повышенная концентрация углекислого газа. При появлении видимого роста делают пересев на плотную питательную среду для выделения чистой культуры и последующей идентификации бактерий в РА с видовыми сыворотками.