Серологическая и бактериологическая диагностика лептоспироза.

Материал засевают по 1-3 капли одновременно в 3-5 пробирок со специальной питательной средой и инкубируют при температуре 28-300С в течение 3 мес. Лептоспиры начинают размножаться через 7-20 дней, иногда 1-2 и очень редко – 3 мес. Наличие роста контролируют темнопольной микроскопией раздавленных капель, которые готовят через каждые 5 дней из всех пробирок. При обнаружении размножения лептоспир делают пересев в 3-5 пробирок со свежей средой. Получить культуры лептоспир удается не всегда.

Биологическая проба. Метод более эффективный, чем бактериологический; проводится с целью выделения и очистки культур лептоспир, определения вирулентности и дифференциации от сапрофитов.

Серологическое исследование. Для серологической диагностики лептоспироза используют РМА (реакция микроагглютинации) и реакцию агглютинации (РА). Пробы крови берут на 5-7-й день болезни и при исследовании отдельных животных повторно через 7-10 дней. Необходимо помнить, что антитела в крови у выздоровевших животных могут сохраняться до двух и более лет.

Реакция микроагглютинации (РМА) является высокоспецифичной, доступной, не требует дорогостоящего оборудования и больших затрат времени. Впервые серологическую диагностику лептоспироза у людей предложили Мартен и Пети в 1919г. Метод исследования ими был назван реакция агглютинации, в последующие годы называли – реакция микроагглютинации и лизиса (РМА и Л), в настоящее время  принято название реакция микроагглютинации (РМА). РМА нашла широкое применение и в ветеринарной практике. В разные годы учёными были предложены модификации серологического исследования (РМА) на лептоспироз: для собак – Уленгут и Циммерман (1936 г.); для крупного рогатого скота – Терских, Земсков (1939г.), Романенко, Любашенко (1940г.), Ляпустин (1945г.); для овец и коз – Терских, Газарян, Саркисян (1942г.), Ляпустин, Варфоломеева (1945г.); для свиней – Терских (1940г.) и др. Сущность реакции и цель применения. В основе реакции микроагглютинации (РМА) лежит специфическое взаимодействие между антигенами (живые культуры лептоспир) и антителами. РМА применяют с целью обнаружения в сыворотке крови животных антител, специфичных возбудителю лептоспироза, и определения их количества (титра).

Материалы исследований. Для исследования используют свежую, замороженную, высушенную на фильтровальной бумаге, консервированную фенолом или борной кислотой сыворотку крови. Кровь для серологического исследования берут в количестве 5-10 мл не ранее чем через 5-7 суток после проявления клинических признаков болезни или через 90 суток – для крупного рогатого скота, 60 суток – для свиней и животных других видов после введения вакцины. Компоненты реакции и подготовка материала к исследованию. В РМА участвуют сыворотка крови животных и культуры лептоспир. Нативные сыворотки проверяют (гемолизированные, загнившие, плесневелые и проросшие сыворотки не исследуют). Замороженные сыворотки оттаивают при комнатной температуре. Повторное замораживание сывороток не допускается. Сыворотки разбавляют физиологическим раствором невакцинированных животных в соотношении 1:25; вакцинированных животных – 1:50. После добавления антигена разведения удваиваются и составляют соответственно 1:50 и 1:100. При необходимости сыворотку разбавляют в соотношениях 1:100; 1:200; 1:400 и т.д. Консервация сыворотки крови методом высушивания. На квадраты белой фильтровальной бумаги (5х5см) наносят по 3-5 капель (0,05 мл каждая капля) сыворотки. Высушивание проводят при комнатной температуре. Высушенные пробы сыворотки пригодны для исследования в течение месяца. При исследовании сыворотки, высушенной на фильтровальной бумаге, вырезают одну или две капли (0,05 или 0,1 мл) сыворотки, измельчают ножницами и заливают в пробирки с физиологическим раствором в объёме 2,45 или 4,9 мл, соответственно, экстрагируют в течение одного часа при температуре 37±1°С. Полученный экстракт используют как исходное разведение сыворотки 1:25 или 1:50. Сыворотку крови животных при ввозе их в хозяйство и вывозе из него для племенных целей и целей воспроизводства разводят 1:25 и исследуют только в одном разведении (после добавления антигена разведение сыворотки будет соответствовать 1:50). При изучении этиологической структуры и обследовании импортируемого скота реакцию ставят со всеми приведенными в таблице антигенами, при обследовании животных в хозяйствах с известной этиологией и при перевозке внутри страны реакцию ставят с антигенами 4-7 серогрупп (Pomona, Tarassovi, Canicola, Hebdomadis, Sejroe, Grippotyphosa, Icterohaemorragiae). Диагностические штаммы лептоспир лаборатории получают во Всероссийском государственном научно-контрольном институте ветеринарных препаратов не реже одного раза в год. В реакции используют чистые культуры лептоспир в возрасте 5-15 суток без признаков агглютинации и лизиса. Через каждые три месяца лаборатории контролируют диагностические штаммы лептоспир в реакции микроагглютинации (РМА) с групповыми агглютинирующими сыворотками. Порядок постановки реакции. Разведенную сыворотку разливают мерной пипеткой или аппаратом Флоринского, начиная с большего разведения, в лунки агглютинационных пластин или пробирки по 0,1 мл в каждую. Сыворотку из каждого разведения разливают в отдельный ряд, состоящий из 4-23 лунок (пробирок) в зависимости от количества антигенов, используемых в реакции. Каждую культуру-антиген вносят по 0,1 мл в 1-3 лунки в зависимости от количества разведений сыворотки. После добавления антигенов пластины встряхивают и выдерживают в термостате при 30-37°С в течение часа. Контрольной служит смесь 0,1 мл культуры лептоспир с 0,1мл физиологического раствора. Лептоспиры в контрольном варианте должны оставаться подвижными, не иметь признаков лизиса и агглютинации.

Учет и оценка реакции. Реакцию, учитывают микроскопией капель из каждой лунки в тёмном поле микроскопа при увеличении 20х10 или 40х7х1,5. Капли из лунок наносят на предметное стекло бактериологической петлёй из большего разведения к меньшему и просматривают их без покровного стекла.

Капли наносят двумя способами:

- бактериологической петлёй диаметром 3 мм. Наносят на стекло сразу до 30 капель и просматривают их под микроскопом;

- бактериологической петлёй диаметром 1мм. Наносят на предметное стекло в освещённый центр поля зрения одну каплю и просматривают её, передвигая столик на 2-3 мм, и рядом с первой наносят и учитывают вторую каплю. Перед взятием каждого нового антигена петлю прокаливают и охлаждают. 

Результаты реакции оценивают в крестах:

++++ (#) агглютинированы 100 % лептоспир;

+++   агглютинированы 75 % лептоспир;

++     агглютинированы 50 % лептоспир;

+       агглютинированы 25 % лептоспир;

-        агглютинация отсутствует.

Агглютинация проявляется в склеивании лептоспир и образовании паучков. Паучок включает от 3-5 до нескольких десятков и сотен лептоспир. Свободные концы лептоспир сохраняют подвижность. В начальных разведениях сыворотки может наблюдаться лизис лептоспир, проявляющийся в набухании и прекращении движения клеток, появлении зернистости и полного распада микробных клеток. Положительной считают РМА, с оценкой в два креста и более при отсутствии агглютинации в контроле. Наличие специфических антител в сыворотке крови животных в титре 1:50 и выше невакцинированных, и 1:100 и выше у вакцинированных свидетельствуют об инфицировании данной особи лептоспирами и, возможно, лептоспироносительстве. По результатам реакции микроагглютинации возбудителями лептоспироза считают лептоспиры той серологической группы, к которой обнаружены антитела в наиболее высоком титре.

88.Возбудитель кампилобактериоза (вибриоза).

Кампилобактериоз — инфекционная болезнь крупного рогатого скота, овец, свиней, домашних и диких птиц, комнатных животных. У млекопитающих отмечают аборты, временное бесплодие, задержание последа, вагиниты, метриты, рождение нежизнеспособного молодняка, тяжелые кишечные заболевания; у кур — снижение прироста массы бройлеров, яйценоскости кур несушек и падеж цыплят. Выделено и описано 15 видов и подвидов кампилобактерий, но не все они патогенны для животных и человека.

В естественных условиях кампилобактериозом болеют: крупный рогатый скот, овцы, реже козы, свиньи,домашние и дикие птицы, дикие животные. Основной возбудитель кампилобактериоза крупного рогатого скота — подвид С. venerealis, овец — С. fetus. От крупного рогатого скота также выделяют подвид С. fetus, С. jejuni и сапрофитный подвид С. bubulus. Описаны случаи диареи у молодняка и взрослых животных разных видов — коров, овец, коз, свиней и собак, вызванные С. jejuni. Заболевание свиней могут обусловить под

виды С. venerealis и С. mucosalis. У кур чаще всего обнаруживают патогенные С. jejuni.

У человека болезнь вызывает штамм С. jejuni, протекает она как острое желудочнокишечное заболевание. Имеются сообщения о выделении подвидов С. venerealis и С. fetus. Установлено, что патогенность С. jejuni связана с действием эндотоксина, термолабильного и термостабильного энтеротоксинов.

К экспериментальному заражению культурами видов и подвидов кампилобактерий, вызывающих поражение мочеполовых органов, восприимчивы только беременные животные: овцы, козы, морские свинки, хомяки. Материал им вводят подкожно, внутрибрюшинно, интравагинально или орально. Возбудители диарейных заболеваний животных (С. jejuni, С. coli) легко вызывают экспериментальную инфекцию при оральном заражении.

89.Патогенные микоплазмы (особенности морфологии, культивирования, значение в патологии животных). все что нашла

Микоплазмы — класс бактерий, одноклеточных микроорганизмов[2][3], не имеющих клеточной стенки, которые были открыты при изучении плевропневмонии у коров. Микоплазмы, по всей видимости, являются наиболее низкоорганизованными, самостоятельно воспроизводящимися живыми организмами. Основным компонентом мембраны являются стерины, в цитоплазме располагаются рибосомы и нуклеоид. Микоплазмы не синтезируют пептидогликан. Обладают выраженным полиморфизмом — от мелких сферических, эллипсовидных, кольцевидных клеток до нитевидных, ветвящихся мицелиальных форм размером 0,6–30 мкм. В культурах в жидких питательных средах обнаруживаются шаровидные образования размером 75–250 нм, их называют элементарными телами, они являются минимальными репродуцирующими единицами. Все микоплазмы грамотрицательны. Некоторые исследователи считают, что микоплазы ответственны за развитие патологий респираторного и урогенитального трактов, иммунной, эндокринной и нервной систем, а также опорно-двигательного аппарата. Другие отрицают существенную роль микоплазм в патогенезе человека.

Возбудители риккетсиозов.

Возбудители риккетсиозов животных и человека (ку-лихорадка, сыпной тиф и др.).

Эрлихии — мелкие плеоморфные микроорганизмы, размножающиеся в цитоплазме циркулирующих лейкоцитов восприимчивых хозяев. Грамотрицательные, окрашиваются по Романовскому — Гимзе в синий цвет, неподвижные. В бесклеточных средах и куриных эмбрионах не размножаются. Чувствительны к тетрациклину.

Возбудители болезней крупного и мелкого рогатого скота, лошадей, представителей семейства собачьих.

Коудрии — плеоморфные кокковидные или эллипсовидные микроорганизмы 0,2–0,5 мкм в поперечнике. Размножаются в

цитоплазме эндотелия сосудов жвачных животных. Неподвижные, грамотрицательные. Красятся в синий цвет анилиновыми красками по Романовскому — Гимзе. Не растут в бесклеточных средах. Чувствительны к сульфаниламидам и тетрациклину. Переносятся иксодовыми клещами рода Аmblуоmmа. Вызывают сердечную водянку — септическую болезнь домашних животных в Африке. От вирулентных штаммов гибнет 20–96% животных.

Неориккетсии — мелкие плеоморфные организмы 0,3–0,4 мкм в поперечнике. Размножаются преимущественно в цитоплазме клеток лимфоидных тканей собак. Грамотрицательные, неподвижные. Красятся анилиновыми красками в синий цвет. Не растут на бесклеточных питательных средах. Чувствительны к тетрациклину. Переносчик — трематода.

Выделены у заболевших семейства собачьих на среднем и западном побережье США.

Бартонеллы — паразиты эритроцитов человека и других позвоночных. Округлые и эллипсоидные формы, или тонкие и прямые, или изогнутые палочки внутри эритроцитов либо на их поверхности размером менее 3 мкм в диаметре. Окрашиваются анилиновыми красками, лучше всего по Гимзе после фиксации метиловым спиртом. В них не обнаружены эукариотические ядра, что отличает их от простейших, паразитирующих в эритроцитах. Грамотрицательны. Культивируют на средах без живых клеток. 

Род Grachamella обнаружен только в эритроцитах млекопитающих. Его представители: имеют клеточную стенку; неподвижны; жгутиков нет; грамотрицательные; вызывают грахамеллез грызунов; имеют широкое географическое распространение.

Анаплазмы — облигатные паразиты эритроцитов диких и домашних позвоночных. Палочковидные, сферические, кокко

видные или кольцеобразные тельца. Грамотрицательны. По Гимзе окрашиваются в красный цвет.

Риккетсиозы целесообразно подразделять на группы болезней в соответствии с родовой и видовой принадлежностью их возбудителей. Собственно риккетсии относят к возбудителям риккетсиозов (ку-риккетсиоз, сыпной риккетсиозный тиф и др.), эрлихии — эрлихиозов, коудрии — коудриозов, неориккетсии — неориккетсиозов и т.д