Микробиология кормов, методы санитарно-микробиологической оценки качества кормов. Возбудители кормовых токсикоинфекций и токсикозов.

Для бактериологического исследования от каждой партии корма составляют два образца весом не менее 500 г. Один из них направляют в лабораторию, а другой сохраняют на предприятии (хозяйстве) до окончания исследования. В лаборатории проводят следующие исследования:

1 Определение общего количества микробных клеток.

 В стерильную пробирку помещают 1 г корма, добавляют 9 мл физиологического раствора и перемешивают. Из полученной взвеси готовят последующие разведения (1: 100, 1: 1000, 1: 10 000, 1: 100 000, 1: 1 000 000). После оседания взвешенных частиц из верхнего слоя жидкости делают посевы. Для количественного учета микробного обсеменения в стерильные бактериологические чашки вносят по 1 мл каждого разведения и заливают 10—15 мл стерильного, расплавленного и охлажденного до температуры 44—45° С мясо-пептонного агара. После застывания среды чашки помещают в термостат при температуре 37° С. После 24—48-часового термостатирования проводят подсчет выросших колоний только в чашках, где содержатся не более 300 колоний. Результаты, полученные при подсчете колоний, умножают на разведения, суммируют и определяют количество микробов в 1 г кормов.

2 Исследование на патогенные сальмонеллы. Навеску исследуемого материала 50—200 г измельчают в фарфоровой ступке и вносят в колбу, содержащую среду предварительного обогащения (пептонная вода, МПБ с содержанием 5% маннита) при соотношении материала и среды 1:5. Содержимое колбы тщательно перемешивают и ставят в термостат при температуре 37° С. Через 16—18 часов производят посевы на бактериологические чашки с твердыми дифференциально-диагностическими средами: висмут-сульфит агар, средой Плоскирева или Левина и т.д в соотношении 1:5. После 16—18-часового выдерживания в термостате при 37° С из обогатительных сред бактериологической петлей производят вторично посевы на чашки с твердыми дифференциально-диагностическими средами, которые помещают в термостат при 37° С. Засеянные чашки просматривают через 16, 24, 48 часов. На висмут-сульфит агаре S. typhi и S. paratyphi А растут в виде мелких, серовато-зеленых колоний с черным центром; S. cholerae suis — в виде зеленых колоний. Колонии почти всех других сальмонелл значительно крупнее, темно-коричневого цвета, окруженные светлым ореолом, цвет участка среды под колонией черный. На среде Плоскирева сальмонеллы растут в виде прозрачных или нежно-розовых колоний, на среде Левина — в виде прозрачных, бледных, нежно-розовых или розовато-фиолетовых колоний.

3 Исследование на энтеропатогенные типы кишечной палочки. 50 г корма помещают в колбу, содержащую 500 мл физ. раствора, встряхивают на шуттель-аппарате в течение 30 минут и из полученной взвеси стерильными пипетками готовят разведения 1:100, 1: 000, 1:10 000, 1:100 000, 1:1 000 000. По 1 мл каждого разведения вносят в пробирки со средами Эйкмана, Кесслера или Кода. Посевы помещают в термостат при температуре 43° С для первых двух сред и при 37° С — для последней. Через 24 часа учитывают рост: на среде Эйкмана —по помутнению среды и образованию газа, на средах Кесслера и Кода — по изменению цвета сред. Титр кишечной палочки устанавливают по наибольшему разведению, в котором еще наблюдался ее рост. Из пробирок, где наблюдается рост микробов, производят посев на плотные дифференциально-диагностические среды Эндо, Левина в бактериологических чашках, разделенных на секторы для каждого разведения.

4 Исследования на анаэробы. 50 г корма растирают в стерильной ступке с физиологическим раствором и засевают в несколько пробирок со средой Китта — Тароцци, молоком и по две чашки со средами Вильсона — Блера и кровяным агаром по Цейслеру. Для уничтожения вегетативных форм по одной пробирке с жидкими средами прогревают при температуре 80° С в течение 20 минут. Посевы помещают в термостат при температуре 37° С. Чашки должны находиться в специальных аппаратах для анаэробных культур, куда заранее вносят тот или иной поглотитель кислорода. Результаты посевов регистрируют в первый же день. Почернение среды Вильсона — Блера в течение 1—3 часов после посева, свертывание молока с образованием ноздревато-губчатого сгустка и прозрачной сыворотки в течение 6 часов, а также быстрое начало роста на среде Китта — Тароцци (через 4—5 часов) при обильном газообразовании является характерным для клостридиум перфрингенс. Рост клостридиум ботулинум, наблюдаемый обычно на 2—3-й день, характеризуется помутнением среды Китта — Тароцци, образованием осадка и запахом прогорклого масла.

Биологическую пробу проводят на морских свинках или белых мышах путем внутрибрюшинного заражения бульонной культурой. При положительном результате подопытные животные гибнут через 12—48 часов. Для идентификации отдельных возбудителей или типов одного вида ставят опыт нейтрализации токсина специфической сывороткой. Для этого минимальную смертельную дозу культуры в смеси с 0,2—0,5 мл соответствующей типоспецифической сыворотки выдерживают в термостате 45 минут и вводят мышам внутрибрюшинно. Для контроля испытуемую культуру или фильтрат вводят мышам без сыворотки. Вид и тип микроба определяют по выживаемости мышей, получившихсоответствующую сыворотку.

5 Исследование на ботулизм (наличие токсинов) в качестве подопытных животных используют белых мышей. При этом могут быть применены два способа:

а) нейтрализация токсина противоботулиновой сывороткой. Корм предварительно растирают в ступке с физиологическим раствором и настаивают в течение 1—2 часов при комнатной температуре. Настои центрифугируют и фильтруют через ватно-марлевый фильтр. К 0,5 мл фильтрата добавляют 0,2 мл поливалентной противоботулиновой сыворотки. Смесь выдерживают 1 час при комнатной температуре, затем одному животному вводят подкожно 0,5 мл фильтрата, другому — смесь фильтрата с сывороткой в той же дозе.

б) разрушение токсина кипячением фильтрата. Одну половину фильтрата кипятят в течение 30 минут. Затем одному животному внутрибрюшинно вводят 0,5—1,0 мл некипяченого фильтрата, другому — в этой же дозе прокипяченного. Положительным результатом биологической пробы по первому и второму способам считают гибель мышей, наступившую как от фильтрата, не обработанного противоботулиновой сывороткой, так и от фильтрата, не подвергнутого кипячению.

Оценка кормов. Корм используют сельскохозяйственным животным при отрицательных результатах исследования на сальмонеллы, энтеропатогенные типы кишечной палочки и токсинообразующие анаэробы при условии его соответствия другим показателям действующих стандартов. При обнаружении сальмонелл, энтеропатогенных типов кишечной палочки, анаэробных микроорганизмов и их токсинов, протея корм запрещается использовать животным без дополнительной обработки. 

Микологическое и микотоксикологическое исследование кормов. Кроме бактериологических показателей в кормах определяют наличие плесневых грибов и дрожжей, а так же их токсинов. Посевы проводят на специальные питательные среды агар Чапека, Сабуро, сусло агар и другие. Микроскопическим методом определяют род гриба. Наиболее часто корма поражаются патогенными и токсигенными грибами, относящимися к родам Mucor, Rhisopus, Aspergilus, Fusarium, Penicillium, Stachybotrys. Токсины определяют постановкой биопробы на лабораторных животных.