Культивирование микроорганизмов

Культивирование – это выращивание бактерий на питательных средах.

Выращивание больших объемов бактерий на жидких или полужидких средах в биореакторах называют глубинным культивированием.  

Для культивирования необходимы условия:

▪ оптимальная температура: для большинства микроорганизмов 37⁰ , для лептоспир 28-30⁰ , грибов 26-28⁰ ;

▪ оптимальный рН, для большинства 7,0 – 7,2, при глубинном культивировании его корректируют;

▪ оптимальный окислительно-восстановительный потенциал: для аэробных микроорганизмов приток стерильного кислорода, для анаэробных - вакуум.

В лабораторных условиях культивирование проходит при оптимальной постоянной температуре, а для анаэробов еще и в бескислородных условиях.

Глубинное культивирование проводят в биореакторах, при соблюдении всех параметров, поэтому оно более результативное, накопление бактерий в несколько раз больше, чем в лабораторных условиях. Глубинное культивирование можно проводить как периодический процесс и по типу непрерывного, проточного.

Чистая культура - популяция бактерий одного вида, выращенная на питательной среде.

Культуры, полученные в результате размножения нескольких видов бактерий, называют смешанными, исследованию не подлежат и уничтожаются.

Штамм – культура имеющая четкие видовые свойства и биологические особенности.

Клон – культура, выращенная из одной бактериальной клетки.

Посев – внесение исследуемого материала в питательную среду. Существует несколько способов посева:

▪ способом Дригальского – штрихами по поверхности питательной среды в чашке Петри;

▪ глубинный, когда в чашку Петри вносят исследуемый материал, затем заливают расплавленной, а затем охлажденной до 40⁰  питательной средой;

▪ уколом, пользуясь бактериологической петлей или пипеткой сеют на полужидкие среды или на плотные, но расплавленные и охлажденные;

▪ смешиванием исследуемого материала с жидкой питательной средой с помощью бактериологической петли или пипетки;

▪ зигзагом сеют на плотные среды в пробирках с помощью бактериологической петли;

▪ газоном сеют на плотные среды в чашки Петри, равномерно распределяя бульонную культуру по поверхности, избыток удаляют;

- по Шукевичу, когда исследуемый материал помещают в конденсат плотной питательной среды в пробирке, применяют для подвижных бактерий.

Изучение питательных сред, условий культивирования необходимы для осваивания самого точного метода микробиологических исследований - бактериологического исследования.

Бактериологическое исследование включает выделение микроорганизмов из среды их обитания, получение чистой культуры и ее идентификацию (определение вида).

Первая задача бактериологического исследования – выделение чистой культуры. Аэробные микроорганизмы выделяют в три этапа.

 

Этапы выделения чистых культур аэробов

Первый день: 1. Бактериоскопия по Граму или ориентировочным методом исследуемого материала, проводят не всегда.

2. Посев исследуемого материала на плотные среды.

Второй день: 1. Изучают характер роста и отмечают «типичные колонии».

2. Проводят бактериоскопию «типичных колоний».

3. Посев «типичных колоний» на жидкие и плотные среды в пробирках.

Третий день: 1. Просматривают агаровые культуры, если рост однородный – культуры чистые.

2. Проводят бактериоскопию бульонных культур, если в мазках одинаковые микроорганизмы – культуры чистые, приступают к идентификации.

 

Вопросы для обсуждения

 

1. Программированный контроль по разделу «Морфология и структура микроорганизмов».

 

 

 

 

 

ТЕМА 4 Культуральные свойства микроорганизмов. Фазы роста микроорганизмов. Работа второго дня по выделению чистых культур аэробов. Методы идентификации. Выделение чистых культур анаэробов

 

Цель занятия. Программированный контроль по разделу «Морфология и структура микробов». Познакомиться с методикой изучения культуральных свойств микроорганизмов. Разобрать фазы роста микроорганизмов, методы идентификации, методы выделения чистых культур анаэробов.

 

Оборудование и материалы. Рабочие места бактериологов, посевы исследуемого материала, посевы разных микроорганизмов на плотных и жидких питательных средах, посевы микроорганизмов на дифференциально – диагностических питательных средах. Анаэростат, среды для выращивания анаэробов. Электронный ресурс, таблицы «Культуральные, протеолитические, биохимические свойства микроорганизмов»

 

Задание для самостоятельной работы студентов. 1. Выполнить работу второго дня по выделению чистых культур аэробов, результат бактериоскопии зарисовать. 2. Представить характеристику выросших колоний и биологических свойств микробов. 

 

 

 

Рис. 8