Идентификации. Выделение чистых культур анаэробов

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА

РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

 

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Брянский государственный аграрный университет»

 

 

 

Г.Ф. Бовкун

 

 

 

 

ВЕТЕРИНАРНАЯ

МИКРОБИОЛОГИЯ

И МИКОЛОГИЯ

 

Учебно-методическое пособие с использованием элементов учебно-исследовательской работы для студентов по специальности  

 36.05.01 «Ветеринария»

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Брянская область

2019

 

УДК 619(07)

ББК 48

Б 72

 

Бовкун Г.Ф. Ветеринарная микробиология и микология: учебно-методическое пособие с использованием элементов учебно-исследовательской работы.Брянск: Издательство Брянский ГАУ, 2019 – 198 с.

 

 

«Ветеринарная микробиология и микология»: учебнометодическое пособие с использованием элементов учебноисследовательской работы составлено на основе требований Приказа ФГОС ВО – специалитет по специальности 36.05.01 «Ветеринария». Утвержден приказом Министерства образования и науки РФ от 22 сентября 2017 г. №974. Содержит современные сведения по разделам систематики, морфологии, физиологии, экологии микроорганизмов, а также методики бактериоскопических, бактериологических, серологических исследований, биологических свойствах возбудителей бактериальных болезней животных, методах диагностики, биопрепаратах, антибактериальных средствах лечения, методах контроля санитарного состояния кормов, молочных и мясных продуктов и соответствует содержанию компетенций УК-8, ОПК-1, ОПК-4, ОПК-6.

 

Рецензент: профессор кафедры вирусологии и радиобиологии им. академиков А.Д. Белова и В.Н. Сюрина ФГБОУ ВО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии – МВА имени К.И. Скрябина, доктор биологических наук Е. И. Ярыгина.

 

Рекомендовано к изданию методической комиссией института ветеринарной медицины и биотехнологии Брянского ГАУ, протокол №7 от 28.02.2019 года.

 

 

© Брянский ГАУ, 2019

_{© Бовкун Г.Ф.,} 2019

 

Содержание

 

ТЕМА 1 Правила работы в бактериологической лаборатории. Приготовление мазков. Характеристика палочковидных, кокков и извитых форм бактерий...... 5 ТЕМА 2. Морфология риккетсий, хламидий, микоплазм,   актиномицетов. Структура бактериальной клетки.................................................................................... 13

ТЕМА 3. Сложные методы окрашивания. Питательные

среды. Выделение чистых культур аэробов.................. 20 ТЕМА 4. Культуральные свойства микроорганизмов.... Фазы роста микроорганизмов. Работа второго дня по выделению чистых культур аэробов. Методы

Кампилобактериоза, дизентерии свиней, биопрепараты

 ............................................................................................... 154

ТЕМА 23. Лабораторная диагностика Куриккетсиоза,  

хламидиозов животных, биопрепараты............................. Патогенные микоплазмы................................................ 161

ТЕМА 24. Возбудители аспергиллеза. Лабораторная

Диагностика трихофитии, микроспории, биопрепараты

 ............................................................................................... 165

ТЕМА 25. Лабораторная диагностика микотоксикозов,

способы профилактики, лечения................................... 170

ТЕМА 26. Санитарно-бактериологическая и

микологическая оценка кормов..................................... 175

ТЕМА 27. Санитарно-микробиологическая оценка... 181 кисломолочных продуктов, сливочного масла, сыров

(самостоятельная работа)................................................ 181

ТЕМА 28. Санитарно-бактериологическая оценка мясопродуктов, яиц (самостоятельная работа).......... 187 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ............................................... 196

ТЕМА 1

Правила работы в бактериологической лаборатории.

Приготовление мазков.

Этапы приготовления мазка

Мазок – окрашенный препарат из убитых микроорганизмов, приготовленный на предметном стекле. Готовят мазки по этапам:

1. Приготовление мазка включает нанесение исследуемого материала на предметное стекло.

2. Высушивание при комнатной температуре.

3. Фиксация - умертвление микроорганизмов, проводят несколькими способами: 

▪ нагревая над пламенем спиртовки, 

▪ погружая в этиловый спирт на 10 -15 мин; 

▪ погружая в смесь этиливого спирта и этилового эфира на 10 -15 мин; -

▪ выдерживая в ацетоне 5 мин; 

▪ выдерживая в метиловом спирте 2-3 мин.

4. Окрашивание выполняют, используя анилиновые краски: карболовый фуксин Пфейфера в течение 1 -2мин, метиленовый синий при экспозиции 5 -10 мин.

Существует простой метод окрашивания, когда используют только красительи выявляют особенности морфологии микроорганизмов и сложные методы, когда устанавливают особенности химического состава бактерий, выявляют отдельные бактериальные структуры.

Способность микроорганизмов окрашиваться называют тинкториальными свойствами.

Бактериоскопическое исследование включает приготовление мазка и его микроскопирование, в результате обнаруживают микроорганизмы.

 

Характеристика палочковидных бактерий

Бактерии – одноклеточные организмы растительного происхождения, но лишенные хлорофилла, размножающиеся простым делением. Составляют царство Procariotae (прокариоы) в составе которого четыре отдела Gracilicutes, Firmicutes, Tenericutes, Mendosicutes. По форме бактерии подразделяют на палочковидные, шаровидные, извитые. К царству Procariotae относят также риккетсий, хламидий, микоплазм, актиномицеты.

Палочковидные бактерии самая многочисленная группа прокариот. Имеют цилиндрическую форму и осевую симметрию. Палочковидных бактерий называют от латинского bacterium – палочка.

Большинство бактерий располагается по одиночке, если они располагаются парами, называют диплобактериям, если цепочками – стрептобактериями.

Палочковидных тонких, слегка извилистых называют микобактерями, среди них сапрофиты и возбудители туберкулеза.

Прямые или изогнутые палочки с утолщениями на концах - коринобактерии (от греч. koryne, булова), среди них сапрофиты и возбудитель дифтерии человека.

Длинные, толстые палочки с заостренными концами

– фузобактерии, они сапрофиты и один возбудитель некробактериоза животных Fusobacterium necrophorum.

Палочковидных, образующих споры, называют бациллами (Bacillus, Bac.). Споры – структуры, формирующиеся при неблагоприятных для бацилл условиях. Спора содержит геном, окруженный мощной оболочкой, выдерживающей высокие температуры. За счет мощной оболочки споры могут храниться в окружающей среде десятки лет. По форме споры могут быть овальные, цилиндрические.

Бациллы могут располагаться по одиночке, парами (диплобациллы), цепочками (стрептобациллы). Среди бацилл есть возбудители, полезные, много условно патогенных.

Палочковидных, образующие споры на концах клеток, с диаметром превышающим толщину клетки, называют клостридии (Clostridium, Cl.), располагаются одиночно. Морфология кокков

Кокки от греч. kokkos – ягода, имеют шаровидную форму. Составляют три таксономические группы: грамположительные, грамотрицательные и грамотрицательные с коккобациллами.

Грамположительные относят к отделу Firmicutes в составе которого три семейства: Micrococcaceae, Streptococcaceae, Peptococcaceae и самостоятельные роды.

По расположению клеток друг относительно друга грамположительные кокки подразделяют на микрококки, стрептококки, стафилококки, тетракокки и сарцины.

Микрококки имеют сферическую форму, располагаются по одиночке. Составляют род семейства Micrococcaceae, обитатели почвы, пресных вод, типовой вид Micrococcus luteus.

Диплококки располагаются парами. У человека циркулируют возбудители из рода Neisseria, названного в честь А Нейссера – первооткрывателя гонореи, в составе рода N.gonorrhoeae и N.meningitidis – возбудитель менингококковой инфекции, протекающей с роражением носоглотки с последующей септицемией или менингитом.

Стрептококки составляют род Streptococcus семейства Streptococcaceae, имеют сферическую форму, располагаются цепочками. Известно 20 видов, среди них сапрофиты - обитатели кожи, полезные - продуценты молочнокислого брожения и возбудители. Виды подразделяют по классификации Р. Лэнсфилд (1933) на 17 серогрупп и обозначают заглавными латинскими буквами от А до О. Широко известны 5 возбудителей болезней животных.

 

Таблица 1 - Виды патологии и морфология патогенных стрептококков

 

Признаки		Название возбудителей, серогруппы
	Str. pyogenes	Str. agalactia	Str.  pneumonia	Str. equi	Str.faecalis
Патология	Пиодермии, пневмонии, хо- лициститы у мо- лодняка и взрослых	Серозный и катаральный мастит у коров	Стрептококкоз молодняка	Мыт жеребят	Энтерококковая инфекция поросят
Морфологические свойства	Мелкие, сферической формы, цепочками	Мелкие, сферической формы, цепочками	Мелкие, имеют форму треугольников, парами	Крупные, овальной формы, длинные цепи	Мелкие, сфериче- ской формы, цепочками

 

Стафилококки имеют сферическую форму, располагаются гроздьями (от геч. Staphyle виноградная гроздь, относят к семейству Micrococcaceae и роду Staphylococcus, В составе рода три вида St. аureus, St. saprophyticus, St. еpidermidis). 

St. saprophyticus – сапрофит, обитатель кожи человека и животных, St. epidermidis – условно патогенный. St. аureus - возбудитель 120 клинических форм стафилококковой инфекции у человека и животных. Клинически стафилококковая инфекция может проявляться заболеваниями трех групп:

▪ местным первично-гнойным воспалением кожи и мягких тканей, к которым относят образование фурункулов, карбункулов, абсцессов, флегмон и нагноением ран;

▪ системная стафилококковая инфекция проявляется пневмонией, маститом, отитом, холициститом;

▪ генерализованная – клинически проявляется стафилококковым сепсисом, протекает тяжело на фоне инфекционно-токсического шока (ИТШ).

У молодняка животных стафилококковая инфекция протекает генерализованно, а заболевание называют стафилококкоз.

К грамположительным коккам относят тетракокки – представителей семейства Peptococcaceae, имеют сферическую форму располагаются по четыре, составляют род. Все тетракокки сапрофиты.

Сарцины – крупные, сферической формы клетки, образующие скопления в нескольких плоскостях, сапрофиты, обитатели почвы, кишечника, всегда присутствуют в воздухе. Сарцины объединены в род семейства

Peptococcaceae.

 

Характеристика извитых

К извитым относят представителей отдела Gracilicutes, порядка Spirochaetales, семейств Spirochaetaceae, Leptospiraceae, Spirillaceae, Vibrionaceae. В составе семейств множество родов.

К семейству Spirochaetaceae относят род спирохеты – крупные спирали с большим количеством завитков, представители этого рода сапрофиты - обитатели грязных водоемов, сточных вод.

К роду кристиспира (Cristispira) относят мелкие спирали с большим количеством завитков, комменсалы моллюсков.

Представители рода Treponema мелкие спирали с большим количеством завитков, типовой вид Treponema pallidum – возбудитель сифилиса человека, Treponema hyodysenteriae возбудитель анаэробной дизентерии поросят

К роду Borrelia, представители которого спирали, имеющие от 3 до 10 неправильных крупных завитков.

Представители этого рода возбудители: Borrelia recurrentis – возбудитель сыпного тифа человека; Borrelia anserine – боррелиоза птиц. 

Лептоспиры – мелкие вогнутые или изогнутые спирали, с завитками-крючками на концах составляют семейство Leptospiraceae, в его составе один род Leptospira и два вида Leptospira biflexa - сапрофит и Leptospira interrogans – возбудитель лептоспироза животных человека, представлен 183 серовариантами, объединенных в 25 серогрупп, имеющих название.

К семейству Spirillacea относят род Campylobacter.

Выделено и описано 15 видов и 15 подвидов кампилобактерий (греч. kampylos – изогнутый) - полиморфных изогнутых палочек в виде запятой или летящей чайки. Среди видов сапрофиты и возбудители: Campylobacter fetus venerslis (подвид)-возбудитель кампилобактериоза крупного рогатого скота, Campylobacter fetus fetus - кампилобактериоза мелкого рогатого скота, Campylobacter jejuni - кампилобактериоз птиц и человека.

К извитым относят вибрионы представителей семейства Vibrionaceae – мелкие изогнутые палочки в виде запятой. Типовой вид Vibrio cholerae – возбудитель холеры человека, среди вибрионов много сапрофитов.

 

Вопросы для обсуждения

 

1. Классификация микроорганизмов.

2. Этапы приготовления мазка.

3. Характеристика палочковидных.

4. Характеристика кокков. 5. Характеристика извитых.

 

 

 

ТЕМА 2

Характеристика хламидий

Мелкие кокковидные, внутриклеточные паразиты, имеющие особый цикл размножения. За пределами клетки образуют элементарные тельца, атакующие клетки, а внутри клетки – ретикулярные, разрушающие ее. Геном хламидий представлен смесью ДНК и РНК, имеют клеточную стенку и рибосомы.

Хламидии объединены в семейство Chlamidiaceae, состоящее из двух родов Chlamidia и Chlamydophila. К роду Chlamidia относят:

▪ C.trachomatis - возбудителя трахомы человека;

▪ C. suis – возбудителя хламидиоза свиней; ▪ C. muridarum циркулирует у хомяков и мышей; К роду Clamydophila относят:

▪ C.pneumonia- возбудитель пневмонии у человека и лошади;

▪ C. pecorum, C. abortus – возбудитель хламидиоза крс, мрс, свиней;

▪ C. psittaci – возбудитель орнитоза птиц и человека; ▪ C. felis – возбудитель хламидиоза кошек. Характеристика микоплазм

Микоплазмы – свободноживущие, мелкие прокариоты, лишенные клеточной стенки и неспособные синтезировать ее компоненты. Клеточную стенку заменяет трехслойная клеточная мембрана, обеспечивающая осмотическую резистентность клеток. Характеризуются полиморфизмом и образуют кокковидные, нитевидные, колбовидные формы.

Микоплазмы относят к отделу Tenericutes, классу Mollicutes, семейству Mycoplasmataceae, роду Mycoplasma.

В составе рода 64 вида, среди которых сапрофиты и возбудители. 

 

Таблица 2 - Микоплазмы, патогенные для животных

 

Признаки	Название возбудителей
	M. mycoides	M.agalactia	M.gallisepticum
Автор и дата открытия	Нокар, Ру, 1893	Данатьен, 1923	Нельсон, 1936

Продолжение таблицы 2

Название заболевания, клинические признаки

Перипневмония крупного рогатога скота (ПВЛ), экссудативная плевропневмония

Агалактия коз (мертворожденные, септицемия, мастит, у козлят септицемия, синовиит, артрит)

Респираторный микоплазмоз у молодняка индеек, кур (фибринозный аэросаккулит)

 

В патологии человека M.pneumonia вызывает атипичную пневмонию, M.hominis, M.urealyticum – урогенитальный микоплазмоз.

 

Вопросы для обсуждения

 

1. Характеристика грибов.

2. Характеристика риккетсий и микоплазм.

3. Характеристика актиномицетов, хламидий.

4. Структура бактериальной клетки.

ТЕМА 3

Рис. 7

 

Сущность окраски по Граму

Бактерии, которые окрашиваются по Граму подразделяют на грамположительные (фиолетовые) и грамотрицательные (розовые).

Грамположительные бактерии имеют трехслойную клеточную стенку с большим количеством муреина, они прочно взаимодействуют с краской генцианвиолетом, рН цитоплазмы слабо кислый, хорошо адсорбирующий анионы иода, что укрепляет комплекс краски. Под действием спирта они не обесцвечиваются и сохраняют фиолетовое окрашивание.

Клеточная стенка грамотрицательных бактерий двухслойная, белковая, слабо воспринимающая окрашивание. рН цитоплазмы – нейтральный, анионы иода не адсорбируются и комплекс краски не укрепляется. Под воздействием спирта он разрушается, бактерии обесцвечиваются, необходимо докрашивание фуксином в розовый цвет.

 

Техника окраски по Граму

● На фиксированный мазок наносят краску генцианвиолет на 2 мин.

● Краску сливают, наносят раствор Люголя на 1 мин.

● Сливают раствор Люголя и наносят этиловый спирт на 30 сек.

● Отмывают мазок водой.

● Наносят фуксин Пфейфера на 2 мин.

● Отмывают мазок водой, высушивают, промокая фильтровальной бумагой.

 

Питательные среды

Питательные среды – это субстраты для выращивания бактерий. Они должны быть:

● Полноценными по питательному составу, содержать вещества в легкоусвояемой форме.

● Изотоничными, содержать не более 1-0,9% солей. ● Иметь оптимальный рН, чаще нейтральный 7,0 –

7,2.

● Иметь оптимальный окислительновосстановительный потенциал (eh).

● Должны быть стерильными и прозрачными.

Питательные среды готовят:

▪ из продуктов животного происхождения: мясо говядины, молоко, яйца, сыворотка крови;

▪ из продуктов растительного происхождения: картофель, морковь, кукурузный экстракт;

▪ синтетические, состоят из химически чистых соединений.

 

Вопросы для обсуждения

 

1. Программированный контроль по разделу «Морфология и структура микроорганизмов».

 

 

 

 

 

ТЕМА 4 Культуральные свойства микроорганизмов. Фазы роста микроорганизмов. Работа второго дня по выделению чистых культур аэробов. Методы идентификации. Выделение чистых культур анаэробов

 

Цель занятия. Программированный контроль по разделу «Морфология и структура микробов». Познакомиться с методикой изучения культуральных свойств микроорганизмов. Разобрать фазы роста микроорганизмов, методы идентификации, методы выделения чистых культур анаэробов.

 

Оборудование и материалы. Рабочие места бактериологов, посевы исследуемого материала, посевы разных микроорганизмов на плотных и жидких питательных средах, посевы микроорганизмов на дифференциально – диагностических питательных средах. Анаэростат, среды для выращивания анаэробов. Электронный ресурс, таблицы «Культуральные, протеолитические, биохимические свойства микроорганизмов»

 

Задание для самостоятельной работы студентов. 1. Выполнить работу второго дня по выделению чистых культур аэробов, результат бактериоскопии зарисовать. 2. Представить характеристику выросших колоний и биологических свойств микробов. 

 

 

 

Рис. 8

Таблица 3 - Характеристика колоний

 

 

Подвижные микроорганизмы образуют колонии «с роением», т.е. растут в виде пленки. Их характеризуют по таким признакам как поверхность, рельеф, консистенция, структура, прозрачность, пигмент, запах.

Культуры, выращенные на жидких средах, называют бульонными, у них изучают:

▪ поверхностный рост (пристеночное кольцо, пленка); 

▪ интенсивность помутнения (слабое, умеренное, сильное, стойкое, проходящие);

▪ характер осадка (плотный, зернистый, хлопьевидный, в виде комка ваты);

▪ количество осадка (обильное, скудное).

Пигментообразующие микроорганизмы вызывают окрашивание питательной среды и осадка.

 

Фазы роста микроорганизмов

Под ростом микроорганизмов понимают необратимое увеличение числа клеток.

Рост микроорганизмов после посева в питательную среду происходит по фазам:

▪ лаг-фаза (задержки роста), в этот период микроорганизмы адаптируются к новым условиям. Продолжительность этой фазы различная и зависит от состава питательной среды, видом микроорганизма, заканчивается с началом размножения;

▪ экспоненциальная фаза (логарифмическая) характеризуется постоянной максимальной скоростью деления клеток. Количество клеток удваивается в единицу времени. Скорость деления зависит от вида микроорганизмов, так E.coli делится каждые 20 мин, а нитробактерии – через 5-10 час. В экспоненциальную фазу образуется огромное количество бактерий, происходит значительный расход субстрата, количества О2, накапливаются токсические метаболиты, скорость генерации (generation лат. размножение) снижается, появляются погибшие клетки;

▪ стационарная фаза характеризуется равнодействи-

ем между генерацией и гибелью. Количество биомассы, полученное в стационарную фазу называют выходом или урожаем. В конце этой фазы гибель клеток усиливается;

▪ фаза отмирания характеризуется экспоненциальной гибелью клеток (автолизом). В живых также остается много клеток, но только тех, которые находятся в покое и характеризуются стабильными биологическими свойствами.

Рост для большинства микроорганизмов после посева заканчивается за 16 – 24 часа, есть исключения: возбудители туберкулеза растут 3 недели, бруцеллеза 30 дней, паратубуркулеза – 7 месяцев.

 

Методы идентификации

Идентификация - определение вида микроорганизмов, проводят, изучая биологические свойства:

▪ морфологические и тинкториальные, бактериоскопией мазков, окрашенных по Граму или сложными методами;

▪ культуральные свойства, посевом на среды общего

назначения, элективные, дифференциальнодиагностические;

▪ биохимические свойства – способность расщеплять специфические углеводные субстраты, для этого делают посевы на среды Гисса, среду Клигера, трехсахарный агар с мочевиной и другие. Изменение цвета свидетельствует о деятельности ферментных систем микроорганизмов, биохимические свойства можно изучать на приборе «Vitec»;

▪ протеолитические свойства – способность расщеплять белковые субстраты, изучают посевом на МПБ или ПБ с индикаторными бумажками для выявления образования аммиака, сероводорода, индола. Посевом в МПЖ (мясопептонный желатин), чтобы установить возможность микроорганизмов послойно или полностью плавить субстрат, вызывать расплавление в виде воронки (возбудитель сибирской язвы), в виде «чулка» (золотистый стафилококк);

▪ гемолитические свойства – способность разрушать эритроциты за счет гемолизина, токсина белковой природы, для этого делают посев изучаемой культуры на МПА с 5% дефибринированной крови барана или кролика (кровяной агар). Различают три разновидности гемолиза:

- альфа-гемолиз, когда в эритроцитах под действием токсина идет превращение гемоглобина в метгемоглобин, а вокруг колоний образуется зона с зеленым или коричневозеленым цветом;

- бета-гемолиз характеризуется полным разрушением эритроцитов, вокруг колоний образуется прозрачная, бесцветная зона;

- дельта-гемолиз – разрушение эритроцитов человека, коровы, лошади и других животных;

▪ антигенные свойства – выявление специфических, для изучаемого микроорганизма, антигенных комплексов по результатам взаимодействия с диагностическими иммунными сыворотками. Антигенные свойства изучают с помощью серологических реакций;

▪ вирулентные свойства – болезнетворность выделенных культур по отношению к лабораторным животным, заражая лабораторных животных: белых мышей, морских свинок, кроликов взвесью агаровых, бульонных культур, фильтратов изучаемых микроорганизмов. Метод заражения лабораторных животных с целью выявления вирулентности возбудителя называют биопробой. Результат учитывают, определяя Dlm (dosis letalis minima) – наименьшей дозы, которая убивает 100% подопытных животных. В настоящее время возникают затруднения в определении этого показателя, поэтому оценку вирулентности проводят по LD₅₀ – дозе живых микробных клеток в 1мл исследуемого материала (КОЕ/мл), вызывающей гибель 50% подопытных животных; 

▪ генетическую специфичность ДНК микроорганиз-

мов с помощью ПЦР, для идентификации с помощью ПЦР можно использовать не только чистые культуры, но и субстраты обитания микроорганизмов, содержащие разные виды микробов. 

Идентификацию по биохимической и протеолитической активности микоорганизмов проводят автоматизировано:

▪ с помощью микротест - систем на приборе Vitec; ▪ с помощью планшетов для прибора микро Такса;

▪ используя наборы тест – систем API 20^TM –учет визуальный.

 

Вопросы для обсуждения

1. Коллоквиум №1 по разделу «Общая микробиология».

 

Вопросы коллоквиума 1

1. Систематика микроорганизмов.

2. Систематика грибов.

3. Характеристика грибов и микозов.

4. Этапы приготовления мазка.

5. Характеристика палочковидных.

6. Разновидности кокков.

7. Характеристика извитых.

8. Характеристика риккетсий.

9. Характеристика хламидий.

10. Характеристика микоплазм.

11. L –формы бактерий, прото-, сферопласты.

12. Характеристика актиномицетов.

13. Структура бактериальной клетки.

14. Сложные методы окрашивания.

15. Техника и сущность окраски по Граму.

16. Способы размножения микроорганизмов.

17. Проницаемость и транспорт питательных веществ в клетки микроорганизмов.

18. Химический состав бактериальной клетки.

19. Типы питания бактерий.

20. Токсины микроорганизмов.

22. Питательные среды.

22. Культивирование бактерий, определения: чистая культура, смешанная культура, штамм, клон.

23. Типы дыхания бактерий.

24. Спиртовое и молочнокислое брожения.

25. Пропионовокислое, маслянокислое и ацетонобутиловое брожения.

26. Культуральные свойства бактерий.

27. Фазы роста микроорганизмов.

28. Выделение чистых культур аэробов.

29. Методы идентификации.

30. Выделение чистых культур анаэробов.

31. Мутации у микроорганизмов. 32. Рекомбинации у микроорганизмов.

 

ТЕМА 5 Методы стерилизации. Химические противомикробные препараты. Методы определения чувствительности микроорганизмов к АБП и фагам

 

Цель занятия. Коллоквиум по разделу «Общая микробиология». Разобрать методы стерилизации, познакомиться с оборудованием для стерилизации. Разобрать и познакомиться с образцами химических противомикробных препаратов.

Разобрать и освоить методы определения микроорганизмов к антибиотикам, их распределения по группам на основе химической структуры и клинического применения. Познакомиться с методами определения чувствительности возбудителей к фагам. 

 

Оборудование и материалы. Оборудование и инструменты для стерилизации. Образцы химических противомикробных препаратов.

Образцы антибиотиков и бактериофагов. Посевы ДДМ готовые к учету, Посев по методу серийных разведений, готовый к учету, чашки со средой АГВ, стерильные пипетки, бульонная культура, диски с антибиотиками. Образцы бактериофагов, посевы по методу Отто, Фюрта, Аппельмана, Грация готовые к учету 

 

Задание для самостоятельной работы студентов. 1. Познакомиться с оборудованием для стерилизации. 2. Познакомиться с химическими противомикробными препаратами и распределить представленные в таблице образцы по группам назначения. 3.Освоить постановку и учета метода ДДМ, распределить образцы антибиотикам по группам на основе химической структуры и клинического применения.2. Познакомиться с образцами фагов и методами определения чувствительности возбудителей к бактериофагам.

 

Таблица 4 - Распределение препаратов по группам назначения

 

Название препарата	Дезинфектант	Антисеп- тики	Химиотерапевтические
			суль- фанилам	нитро- фур.	хино- лон
Хлорная известь
Фуразолидон
Н2 О2

Продолжение таблицы 4

Формалин
Лизол
ДП-2
Энрофлоксацин
Офлоксацин
Фурациллин
Нифуроксазид
Бисептол
Биопаг
Фенол
Хлорамин
Стрептоцид
Норфлоксацин
Надуксусная кислота

 

Вопросы для обсуждения

 

1. Типы взаимоотношений в микромире.

2. Характеристика и классификация антибиотиков.

3. Продуценты антибиотиков.

4. Применение антибиотиков и характеристика кормовых антибиотиков. 5. Характеристика фагов.

 

 

 

ТЕМА 6 Санитарно-гигиеническая оценка почвы. Круговорот азота и углерода. Микрофлора воды и воздуха, санитарно-бактериологическая оценка

 

Цель занятия. Разобрать и освоить методику санитарно-бактериологического исследования почвы. Разобрать механизм круговорота азота и углерода в почве. Разобрать и освоить методику исследования и учета санитарно-бактериологической оценки воды и воздуха.

 

Оборудование и материалы. Образцы почвы, питательные среды для посева почвы. Посевы возбудителей по ДДМ. Образцы бактериальных землеудобрительных препаратов. Питательные среды для посева воздуха, образцов воды для санитарно-бактериологической оценки. Аппарат Кротова. Посевы воды, воздуха готовые к учету.

 

Задание для самостоятельной работы студентов. 1. Провести учет посевов по ДДМ на прошлом занятии. 2. Освоить методику санитарно-гигиенической оценки почвы. 3. Разобрать механизм круговорота азота и углерода, познакомиться с образцами землеудобрительных препаратов. 4. Разобрать и освоить методики исследования и учета санитарно-бактериологической оценки воды. 5. Разобрать методики исследования и учета санитарномикробиологической оценки воздуха.

 

Таблица 7 - Чувствительность испытуемой культуры к АБП

АБП	Диаметр зоны	Чувствительность	Заключение

Продолжение таблицы 7

 

Таблица - 8 Категория загрязненности почвы

 

Категория загрязненности	Количество колоний БГКП	Количество Колоний энтерококков	Патогенные бактерии

 

Таблица 9 – Категории загрязненности почв

 

Категория загрязненности	Количество колоний БГКП	Количество колоний энтерококков	Патогенные бактерии
Чистая	1-9	1-9	Нет
Загрязненная	10 и больше	10 и больше	Есть

 

При наличие роста на селенитовой среде исследования продолжают: делают посевы на среду Эндо, отсевают бесцветные колонии, идентифицируют выделенную культуру по биохимическим, протеолитическим и антигенным свойствам.

Способность почвы к самоочищению обусловлена:

● деятельностью гнилостных бацилл и бактерий разлагать белковые соединения животного, растительного происхождения;

● минерализацией образующигося при гниении аммиак нитрифицирующими бактериями;

● активностью целлюлозолитических бактерий в аэробных и анаэробных условиях разлагать клетчатку, минерализовать образующиеся соединения.

 

Круговорот азота

Почва – среда обитания многочисленных микробов, которые осуществляют круговорот, N,C,H, S,P,Fe и др. элементов. Такие процессы повышают плодородие почвы.

В почве много возбудителей, длительно хранятся в ней споры таких возбудителей как столбняк, ботулизм, эмкар, злокачественный отек.

Больше всего микробов в черноземных почвах, в неплодородных – мало.

Важное значение для плодородия имеет круговорот азота, его осуществляют микроорганизмы в несколько процессов.

Начинается круговорот гниением или аммонификацией.

Аммонификация – (гниение) разложение растительного, животного белка.

В аэробных условиях белок разлагается с образованием преимущественно: NH₃, CO₂ , H₂O, сульфатов, некоторая часть NH₃ улетучивается и разлагается до молекулярного N₂ и молекулярного Н₂, остальная часть – усваивается бактериями.

Гниение в аэробных условиях проводят: - Bacillus subtilis – сенная палочка; Bac.mycoides – корневидная бацилла; Bac. мesentericus- картофельная палочка; Bac.megaterium – капустная палочка; Proteus vulgaris – вульгарный протей, имеет факультативный тип дыхания, но тяготеет к аэробным условиям; Bac.cereus; E.coli – кишечная палочка.

Перечисленные микробы имеют набор протеолитических ферментов протеаз и пептидаз, с помощью которых расщепляют белки до полипептидов и олигопептидов. Образовавшиеся аминокислоты преобразуются дезаминированием, декарбоксилированием, переаминированием, в результате образуется NH₄ ⁺ , СО₂ и вода.

В анаэробных условиях белки также под действием протеаз и пептидаз разрушаются до аминокислот, которые подвергаются декарбоксилированию, переаминированию, дезаминированию до NH₄ ⁺ , СО₂,аминов, Н₂ S, воды и органических кислот.

При гниении белков животного происхождения в анаэробных условиях вместо аминов чаще образуются диамины или птомаины, ядовитые соединения, из которых самый ядовитый кадаверин в совокупности их называют трупным ядом.

Гниение в анаэробных условиях проводят: Сl. рutrificum; Cl.sporogenes.