Комплемент, лабораторное исследование функций

Комплемент - это группа сывороточных белков, состоящая из протеаз и их активаторов. Существуют два механизма активации комплемента - классический и альтернативный. Комплемент играет важную роль в защите от микробов, активирует катаболизм циркулирующих иммунных комплексов и участвует в регуляции функций иммунной системы.

5.1 Определение гемолитической активности комплемента. Для исследования компонентов классического пути активации комплемента определяют его гемолитическую активность. Суть метода заключается в следующем: - разные разведения сыворотки больного и нормальной сыворотки добавляют к эритроцитам барана, покрытым антителами; - степень гемолиза оценивают фотометрически по выходу гемоглобина в раствор.

За единицу гемолитической активности комплемента принимают величину, обратную тому разведению сыворотки, при котором разрушаются 50% эритроцитов.

Существуют модификации метода, основанные на применении небольших объемов исследуемой сыворотки. Определение гемолитической активности комплемента по 100% гемолизу основано на гемолизе в геле. Суть этого метода заключается в следующем: - в геле, содержащем покрытые антителами эритроциты барана, делают лунки; - в лунки вносят разные разведения исследуемой и нормальной сывороток; - гемолитическую активность комплемента оценивают по диаметру зон гемолиза.

Активность комплемента зависит от целого ряда факторов, поэтому нарушение правил забора и хранения сыворотки обычно приводит к ошибочным результатам исследования.

Определение гемолитической активности комплемента позволяет обнаружить недостаточность компонентов комплемента, прежде всего участвующих в образовании мембраноатакующего комплекса. Кроме того, оценка этого показателя может использоваться для выявления активации комплемента, например при СКВ и гломерулонефрите, хотя чувствительность метода для этого недостаточно высока.

Оптимальный метод выявления активации комплемента заключается в определении продуктов расщепления его компонентов.

Иммунные комплексы циркулирующие: методы определения

Методы, основанные на выявлении СЗ и продуктов его расщепления, связанных с иммунными комплексами:

- На клетках линии Raji находятся рецепторы к СЗ. При добавлении исследуемой пробы к клеткам Raji иммунные комплексы, связанные с этим компонентом комплемента, фиксируются на поверхности клеток. Связанные с клетками иммунные комплексы выясняются с помощью меченых антител к иммуноглобулинам.

- Иммунные комплексы, связанные с С3, можно также выявить с помощью меченых антител к С3 или бычьего конглютинина. Другая группа методов основана на связывании иммунных комплексов с меченым или фиксированным на твердой подложке С1q.

Для получения надежных результатов рекомендуется одновременно несколько методов определения иммунных комплексов. Поскольку результаты определения циркулирующих иммунных комплексов часто противоречивы и малоинформативны, это исследование проводится редко.

44.иммунотипирование используется в медицине при злокачественных опухолях, при различных заболеваниях крови.?Например, иммунотипирование ALL (моноклональные антитела к В-клеточным антигенам, Т-клеточным антигенам, common ALL -антигенам, Null-антигенам)

Лимфоциты способны синтезировать антитела для защиты организма от хронических инфекций и поддерживают определенный уровень иммунитета при инфекционных процессах.

Пролиферативную активность Т-лимфоцитов оценивают по интенсивности синтеза ДНК в ответ на стимуляцию митогеном (поликлональная стимуляция) или антигеном (моно- и олигоклональная стимуляция). В последнем случае применяются распространенные антигены или аллоантигены. Интенсивность синтеза ДНК оценивают по включению в нее меченных радиоактивным изотопом нуклеозидов, например 3Н-тимидина. Результаты обычно выражают в импульсах в минуту (имп/мин) и в виде индекса стимуляции - отношение радиоактивности стимулированных и нестимулированных лимфоцитов. Митогены стимулируют пролиферацию значительной части Т-лимфоцитов, поэтому результат оценивают обычно через 3 сут. Антиген стимулирует пролиферацию только тех Т-лимфоцитов, которые несут рецептор к нему, поэтому индуцированную антигеном пролиферацию оценивают через 5-7 сут. Для оценки пролиферативной активности Т-лимфоцитов, как и при проведении кожных проб, применяют набор широко распространенных антигенов. У ВИЧ-инфицированных пролиферативная реакция Т-лимфоцитов на распространенные антигены может быть снижена уже на ранних стадиях заболевания. Прогрессирование ВИЧ- инфекции и других иммунодефицитов сопровождается снижением реакции Т-лимфоцитов на аллоантигены, а впоследствии - и на митогены. Отсутствие реакции на митогены свидетельствует о тяжелой недостаточности клеточного иммунитета.