Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Устройство и принцип работы цитофлуориметр
Проточный цитофлюориметр – это прибор, позволяющий быстро оценить состав клеточной популяции по флюоресценции и оптическим характеристикам клеток. С помощью этого прибора можно определить абсолютное и относительное число клеток разных популяций и субпопуляций. Цитофлуориметр позволяет анализировать как фиксированные, так и живые клетки диаметром от 0,5 мкм до 40 мкм. Система для проточной цитофлюориметрии состоит из следующих основных устройств: цитометр и управляющий компьютер. Система подачи жидкостей – важный компонент цитометра. Она осуществляет подачу образца в измерительную ячейку таким образом, что частицы суспензии проходят через центральную зону лазерного луча (область с максимальной интенсивностью света) строго по одной. Принцип работы: Клеточная суспензия, предварительно меченная флюоресцирующими моноклональными антителами или флуоресцентными красителями, попадает в поток жидкости, проходящий через проточную ячейку. При этом минимальный объем образца должен составлять 0,5 мл. Необходимо следить за объемом образца, поскольку попадание пузырьков воздуха в проточную ячейку приведет к искажению потоков жидкостей, закупорке ее, и в итоге к искажению результатов. Образец должен представлять собой суспензию единичных частиц (клеток) без агрегатов во избежание получения неверных результатов или закупорки проточной ячейки. Оптимальная плотность суспензии – 106 в 1 мл. В момент пересечения клеткой лазерного луча (точка детекции) детекторы фиксируют: · рассеяние света под малыми углами (от1°до 10°) (для определения размеров клеток). · рассеяние света под углом 90° (позволяет судить о соотношении ядро/цитоплазма, а также о неоднородности и гранулярности клеток). · интенсивность флуоресценции по нескольким каналам флуоресцентности (от 2 до 18-20) – позволяет определить субпопуляционный состав клеточной суспензии и др. К основным преимуществам метода относятся быстрота анализа и возможность одновременной оценки многих параметров клетки; размера, оптической плотности, поверхностных антигенов. Проточная цитофлюориметрия применяется также для анализа ДНК при исследовании клеточного цикла. В большинстве клинических лабораторий для определения поверхностных антигенов лимфоцитов используют цельную кровь. Суть метода заключается в следующем: - к небольшому объему цельной крови добавляют меченные флюорохромом моноклональные антитела; - после инкубации, необходимой для связывания антител с антигенами клеточной поверхности, разрушают эритроциты; - с помощью проточного цитофлюориметра анализируют клеточный состав пробы. Результаты исследования выражают в виде абсолютного и относительного числа лимфоцитов разных популяций. Оценку результатов проводят с учетом нормальных показателей, которые зависят от возраста, пола и расы. Простой способ проверки надежности результатов заключается в том, что относительное содержание основных популяций лимфоцитов (Т-, В- и NK-лимфоцитов) в сумме должно составлять 100%.
Популяц-й анализ – позволяет оценить кл. попул. по флюр. и оптич. хар-кам кл.; абс. и относ. число кл. разных попул. и суб. попул. Иммунофлюоресценция позволила разработать уникальный по своим возможностям метод отбора нужных клеток из смешанных суспензий (ил. 57). Такую суспензию (например, фракцию лейкоцитов крови человека) подвергают обработке иммуноглобулинами двух разных типов: одни из них комплементарны специфическому антигенному маркеру клеток определенной группы (например, Т-клеток) и мечены дающим при возбуждении зеленый свет флюорохромом, вторые - маркеру другой группы (например, В-лимфоцитов) и мечены флюорохромом, испускающим при возбуждении той же длиной волны красный свет. Затем смесь помещают в прибор FACS (от англ. fluorescence activated cell sorter), который в русскоязычном варианте чаще всего называют «лазерный проточный цитометр». Клетки в тонкой струе жидкости по одной пропускаются через луч лазера с длиной волны, возбуждающей свечение в конъ-югированных с антителами флюорохромах. Сложная оптическая система прибора регистрирует сразу несколько параметров прошедшей через луч клетки: ее размеры, наличие цитоплазматических гранул и испускаемый свет. В зависимости от информации, поступившей из оптического блока в механический блок, сепаратор направит клетку с определенными характеристиками в нужный сосуд. Одновременно связанная с прибором компьютерная система регистрирует, сколько и каких клеток было проанализировано, что позволяет кроме сортировки получить количественные данные о составе изучаемой суспензии. Недостатками реакций иммунофлюоресценции является невозможность их применения к объектам, молекулы которых могут флюоресцировать, и невысокая точность определения количеств анализируемых антигенов.
|
|||||
Последнее изменение этой страницы: 2017-02-07; просмотров: 885; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 3.16.130.155 (0.005 с.) |