Теоретическая часть приготовления питательных сред

Для культивирования микрoорганизмов необходимы питательные среды, из которых микробы получают материал для пластических и энергетических процессов клетки. Любая питательная среда должна содержать органогены

(углерод, водород, кислород, азот) и элементы (фосфор, калий, магний, железо, сера), а также факторы роста (витамины и некоторые аминокислоты, гормоны).

Универсальные среды пригодны для большинства микрoорганизмов.

Элективные среды (избирательные) пригодны для развития определенных групп микрoорганизмов и менее пригодны для культивирования других микрoорганизмов.

Естественными питательными средами для микрoорганизмов могут являться молочный, мясной, рыбный бульон, овощи, фрукты, а также их отвар.

Чаще используются искусственные питательные среды, т. е. приготовленные из известных химических соединений в определенных концентрациях. При культивировании на них микрoорганизмов можно легко исследовать их физиологические свойства.

Для получения плотных сред в бульоны вводят желирующие вещества

(агар-агар - 1,5- 2%, желатин - 10-15%)

Агар-агар - это высокомолекулярное вещество типа полисахарида, получаемое из морских водорослей.

Желатин – это белковое вещество, получаемое из кожи, сухожилий, хрящей животных.

Эти вещества при нагревании растворяются и дают коллоидный раствор, а при охлаждении образуют плотный студень.

 

При подготовке к работе письменно ответьте на вопросы

1.Приведите классификацию питательных сред с конкретными примерами.

2. Дайте определение, что такое чистая культура микроорганизмов.

3. Объясните, с какой целью в микробиологии используют микробиологические петли.

4. Почему питательную среду МПА нужно охладить при посеве?

Ход работы

Приготовление питательных сред

1.1. Среда Ганзена (для дрожжей)

В 1 см³ дистиллированной воды растворяют глюкозы 5 г, пентона – 10 г, фосфорнокислого калия – 3 г, сернокислого магния – 25 г.

1.2. Картофельная среда (для бактерий)

Очищенный картофель нарезают ломтиками, которые укладывают в чашки Петри и стерилизуют в автоклаве при давлении 1 атм. 30 мин или в сушильном шкафу при температуре 120^оС в течение 20 – 30 мин.

1.3. Среда Чапека (для мицелиальных грибов)

Глюкоза – 30 г, азотнокислый натрий – 2 г, фосфорнокислый калий – 1 г, сернокислый магний – 0,5 г, хлористый калий – 0,5 г, сернокислое железо – 0,01 г, вода – 1000 см³.

1.4. Капустная среда (для молочно - кислых бактерий)

1 см³ молока, 20 г. измельченной капусты помещают в кастрюлю, заливают водой и кипятят в течение 10 мин., затем отжимают через двойной слой марли, полученную жидкость фильтруют и в 2 раза разводят водой. К отвару добавляют 2 % глюкозы и 1 % пентона. Стерилизуют при давлении 0,5 атм. 30 мин.

1.5. Мясопептонный агар (МПА) – удобная для использования питательная среда заводского приготовления. Порошок (4 гр.) высыпают в холодную воду (100см^зперемешивают, а затем нагревают при помешивании до полного растворения агара. Фильтруют, разливают по колбам или пробиркам, закрывают ватными пробками и стерилизуют в автоклаве. Является универсальной питательной средой.

1.6. Среда Эндо (для кишечной палочки)

Готовится из сухого порошка заводского происхождения. Способ приготовления указан на этикетке упаковки.

Техника посевов и пересевов

Посевом называют внесения в стерильную питательную среду какого-либо исследуемого материала для культивирования микрoорганизмов.

Пересевом называют перенос выращенных микрoорганизмов в стерильную среду. Пересевы производят так, чтобы в питательную среду не попали из воздуха или с поверхности окружающих предметов посторонние микрoорганизмы. Пересевы часто делают для поддержания чистых культур микрoорганизмов в чистом виде долгое время.

 

Произвести следующие посевы

2.1. Посев уколом (для внесения анаэробов). Посев производится длиной иглой в столбик МПА или желатина питательного. Для этого пробирку переворачивают кверху дном и иглой с посевным материалом прокалывают столбик среды снизу до самого дна. Пробирку закрывают обожженной ватной пробкой.

2.2. В стерильную чашку Петри стерильной пипеткой вливают 1 см³ посевного материала, заливают стерильной питательной средой расплавленной и охлажденной до

48-50^о С. Закрывают крышкой, размешивают круговыми движениями по столу.

 

2.3. Посев на поверхность застывшей среды произвести при помощи шпателя, а на МПА в пробирке микробиологической петлей.

 

Техника пересевов

1. Посевы производят вблизи пламени горелки, в пламени которой стерилизуют петли, ватные тампоны, пробирки, края пробирок.

2. В левую руку берут одну пробирку с пересеваемой культурой, другую - с питательной средой и держат в наклонном положении между указательным и большим пальцем.

3. Петли держат в вертикальном положении над пламенем горелки и прокалывают докрасна.

4. Достают ватные пробки, держат их безымянным пальцем и мизинцем правой руки

5. Обжигают края пробирок

6. Внося петлю в пробирку с пересеваемой культурой, захватывают небольшое число микрoорганизмов, стараясь не зацепить стенок, перенося во вторую пробирку со стерильной питательной средой.

7. Петлю вынимают, обжигая края и внутренние концы пробирок. Если пробка загорится, то ею закрывают пробирку, а наружный конец гасят рукой или пинцетом.

8. Петли вновь обжигают в пламени, на пробирке делают соответствующие записи: название культуры, дату пересевов.

В конце работы учащиеся должны отметить, какие питательные среды они приготовили, какие выполнили посевы и пересевы.

Лабораторная работа №5

Тема: Санитарно – бактериологический анализ проб воздуха, воды.

Цель: 1. Приобретение навыков микробиологического контроля

2. Углубление знаний по роли микроорганизмов в пищевых производствах.

Материальное обеспечение: стерильные колбы,микроскопы, чашки Петри, предметные и покровные стёкла, стерильная среда МПА.

 

При подготовке необходимо ответить на следующие вопросы:

1. Понятие «микрофлора» воды.

2. Необходимость контроля воздуха и воды.

3. Правила приготовления препаратов и плотных питательных сред.

4. Будет ли отличаться микрофлора воздуха и воды по своему составу.

 

Посев воды.

При исследовании водопроводной воды обжигают кран в пламени горящего ватного тампона, смоченного спиртом. Открывают кран и спускают воду 10 мин. Наливают воду в стерильную колбу с ватной пробкой. Отбирают стерильной пипеткой 1 см³, выливают в чашку Петри и заливают охлажденным до 45^оС мясопептонным агаром. Чашки закрывают и, когда среда застынет, их переворачивают вверх дном, и ставят в термостат для выращивания на 48 час. при Т=37^оС.