Серологический метод диагностики вирусных инфекций

Основан на определении в крови больного противовирусных антител в сероло­гических реакциях с использованием специфических вирусных ан­тигенов - диагностикумов или специальных тест-систем. Серологические реакции при вирусных инфек­циях ставят в жидкой среде (РСК, РТГА, РНГА, РОНГА, РТОНГА, РИА), в геле (РПГ, РРГ, РВИЭФ) или на твердофазном носителе (например, на стенках лунки полистиролового планшета с фиксацией на них од­ного из компонентов иммунной реакции – антигена или антитела). Известны такие твердофазные методы как ИФА, ИЭМ, РГадсТО, РИФ, РГадс, РТГадс.

Нередко, вследствие наличия в крови большинства здоровых людей естественных противовирусных антител, серологическая диагностика вирусных инфекций основывается на исследовании парных сыво­роток, взятых в начале и в разгаре болезни или в периоде реконвалесценции с целью определения нараста­ния титра антител. Диагностически значимым считается нарастание титра антител в четыре раза и более.

Повышение чувствительности серологических методов достигается адсорбцией антигенов или антител на эритроцитах (РНГА, РОНГА, РТОНГА, РГадсТО, РРГ), меткой ферментами (ИФА), радиоактивными изотопами (РИА, РПГ) или флюорохромами (РИФ), Используется также прин­цип лизиса эритроцитов (как индикаторной системы) при взаимодействии антигенов и анти­тел в присутствии комплемента (РСК, РРГ).

Реакция связывания комплемента (РСК) в виде варианта связывания комплемента на холоде (в течение ночи при температуре +4⁰ С) часто применяетсяв вирусологии для ретроспективной диагностики ряда вирусных инфекций и для определения вирус-специфических антигенов в материалах от больных.

Реакция радиального гемолиза (РРГ) в агарозном гелеоснована на явлении гемолиза эритроцитов, сенсибилизированных антигеном, под влиянием вирусспецифических антител в присутствии комп­лемента и применяется для сероло­гической диагностики гриппа, ОРВИ, краснухи, паротита, тогавирусных инфекций.

Для постановки реакции к бараньим эритроцитам (0,3 мл 10%-й суспензии) добавляют 0,1 мл неразведенного вирусного антигена и смесь выдерживают 10 мин при комнатной температуре. К 1,2% агарозе при температуре 42⁰ С добавляют 0,3 мл сенсибилизи­рованных эритроцитов и 0,1 мл комплемента, смесь разливают на предметные стек­ла или в лунки полистироловых планшетов, в зас­тывшем геле агарозы с помощью пробойника вырезают отверстия и заполняют их исследуемыми и контрольной сыворотками. Стекла или панели закрывают крышкой и помещают их во влажной камере на 16-18 часов в термостат. Учет реакции осуществляют по диаметру зоны гемолиза вок­руг отверстий, заполненных сывороткой. В контроле гемолиз отсутствует.

Самостоятельная работа студентов

1. Выделение вирусов на культуре ткани. Изучение особенностей цитопатического действия(ЦЦД) вирусов при различных вирусных инфекциях:

· синцитиальный тип (вирус кори, парагриппа) - образование гигантских многоядерных клеток и синцития в клетках культуры ткани с формированием цитоплазматических включений (демонстрация);

· аденовирусный тип - образование внутриядерных включений, агрегация клеток (демонстрация);

· деструктивный тип (пикорнавирусы) - дегенерация клеток с отторжением их от поверхности стекла (демонстрация);

· герпетический тип - образование гигантских клеток с внутриядерными включениями (вирусы герпеса, цитомегаловирусы – демонстрация)).

2. Индикация вирусов в клетках культуры ткани:

· гемадсорбция - адсорбция на клетках эритроцитов, добавленных к культуре ткани, инфицированной вирусом парагриппа (демонстрация);

· подавление метаболизма клеток вирусом полиомиелита (цветная проба –демонстрация). Клетки культуры ткани в процессе их культивирования вырабатывают кислые продукты метаболизма, при этом цвет среды, в которую добавлен индикатор метиловый красный, изменя­ется с красного на желтый. Клетки, инфицированные вирусом, разрушаются и цвет среды не меняется, оставаясь красным;

· интерференция вирусов - отсутствие репродукции вируса в культуре ткани, инфицированной другим вирусом, не обладающим цитопатическим эффектом (демонстрация).