Микробиологическая диагностика кампилобактериозов

Возбудителями кампилобактериозов - кишечных инфекций, склонных к генерализации и вы­раженным токсико-аллергическим осложнениям, являются Campylobacter jejuni и Campylobacter coli. Оппортунистические инфекции различной локализации и тя­жести вызываются преимущественно Campylobacter fetus.

Материалом для исследования в зависимости от характера за­болевания являются испражнения, гной, ликвор, кровь, рвотные массы и др., которые с учетом нестойкости возбудителя во внешней среде должны быть доставлены в лабораторию как можно скорее.

Бактериоскопический метод является весьма чувствительным ввиду характерной морфологии кампилобактеров (грамотрицательные изогнутые, S-образные или извитые палочки размером 0,2- 0,9x0,5-5,0 мкм).

Бактериологический метод. Для выделения чистых куль­тур исследуемый материал засевают на селективные плотные среды (с кровью, факторами роста и антибиотиками) или используют для выделе­ния метод фильтрации. Неконтаминированный материал засевают на неселективные среды обогащения (бруцеллезные бульон или агар, содержащий пептон, дрожжевой эк­стракт, глюкозу и гидросульфит натрия в качестве редуцента).

Селективные среды (Скирроу, Престо­на, эритрит-агар) для кампилобактеров содержат баранью кровь (фактор роста) и селективные добавки (антибиотики триметоприм, ванкомицин, амфотерицин Д, полимиксин В и цефалотин), ингибирующие рост нормальной микрофлоры. Культивирование кампилобактеров осуществляется в специальной газовой атмосфере, состоящей из азо­та, углекислого газа и кислорода в соотношении 85:10:5, ко­торая создается применением специальных газогенераторных пакетов, по­мещаемых вместе с посевами в герметично закрывающиеся емкости. Посевы инкубируют при 42⁰ С.

Метод фильтрации основан на способности подвижных кам­пилобактеров активно проходить через мембранные фильтры с по­рами диаметром 0,45 — 0,65 мкм. Фильтр укладывают на поверхность неселективной плот­ной среды в чашке Петри, наносят на него 10—15 капель суспензии фе­калий, инкубируют чашку при 37⁰ С в течение 1 ч, после чего фильтр снимают, а чашку инкубируют в микроаэрофильных условиях. Проникшие через фильтр кам­пилобактеры образуют через 48 — 96 ч на поверхности среды характерные колонии - серые, плоские, с неровным краем, сливаю­щиеся по ходу штрихов. На бо­лее сухих средах колонии выпуклые, блестящие, округлые, без выраженной тенденции к распространению; гемолиз отсутствует.

Выделенные культуры идентифицируют по морфологии (маз­ки, окрашенные по Граму), характерной «винтообразной» под­вижности (исследование в препарате «раздавленная капля с использованием темнопольной или фазово-контрастной микроско­пии), биохимическим свойствам и чувствительности к антибио­тикам. Основные свойства некоторых видов кампилобактеров и Helicobacter pylori представлены в таблице 12. Важным признаком С. jejuni является гидролиз гиппурата натрия (в 0,4 мл 1% водного раствора гиппурата суспендируют петлю выделенной куль­туры, пробирку помещают на 2 часа в термостат при 37⁰ С, после чего добавляют 0,2 мл 3,5% раствора нингидрина в ацетон-бутаноловой смеси и вновь помещают в термостат). Пурпурное окрашивание взвеси свидетельствует о положительная пробе. Культура с типичной морфологией, выросшая при 42 °С на селективной среде, положительными пробами на оксидазу и на гидролиз гиппурата, относится к виду С. jejuni.

Нитратный тест культуру выполняют на нитрат­ном бульоне Барретта или полужидкой среде Мюллера-Хинтона с 0,2 % нитрата калия; тест-реактивом является сульфоновая кислота в смеси с нафтиламином. Положительный нитратный тест характеризуется появлением красного окрашивания.

Таблица 12. Дифференциация некоторых видов кампилобактеров и Helicobacter pylori

 

Биологические свойства	Campylobacter Jejuni	Campylobacter coli	Campylobacter fetus	Helicobacter pylori
Рост при 42^0С	+	+	-	-
Рост при 25^0С	-	-	+	-
Уреаза	-	-	-	+
Нитратредуктаза	+	+	+	-
Гидролиз гиппурата натрия	+	-	-	-
Каталаза	+	+	+	+
Устойчивость к:
налидиксовой кислоте	±	-	±	+
Цефалотину	+	+	-	+

 

Обозначения: (+) - наличие свойства, (-) - отсутствие свойства, (±) – непостоянное свойство

 

 

Генодиагностика. Для диагностики кампилобактериоза предложена ПЦР.

Серологическая диагностика при кампилобактериозе не прово­дится из-за наличия у кампилобактера групповых антигенов и возникновения вследствие этого перекрестных реакций антител против этого микроорганизма с другими микробами.

Самостоятельная работа студентов

 

1. Изучение морфологии Campylobacter jejuni (грамотрицательные изогнутые, S-образные или извитые палочки - демонстрация).

2. Учет культуральных свойств Campylobacter jejuni на эритрит-агаре (серые, плоские, сливаю­щиеся колонии с неровным краем - демонстрация).