Микробиологическая диагностика геликобактериоза

Возбудителем геликобактериоза — хронической инфекции же­лудка и 12-перстной кишки — является Helicobacter pylori.

Материалом для исследования являются биоптаты слизистой оболочки из очагов поражения, желудочный сок, секционный и резекционный материал (слизистая оболочка тела, антрального и пилорического отделов желудка, луковицы 12-перстной кишки), реже материал из полости рта (зубной налет, материал у воспа­ленных десен). Исследование необходимо проводится сразу ввиду нестойкости геликобактера во внешней среде; допускается непродолжительное хранение материала (до 4 ч) в транспортных средах для кампилобактеров при 4⁰ С.

Бактериоскопический метод - исследование гистологических срезов, окрашенных гематоксилин-эозином, из биоптата слизистой оболочки желудка и 12-перстной кишки, полученного при фиброгастродуоденоскопии. При микроскопии геликобактеры имеют харак­терную спиралевидную морфологию.

Бактериологический метод является основным в лабораторной диагностике геликобактериоза.Для выделения чистых куль­тур материал засевают на селективные плотные среды с кровью и антибиотиками (ванкомицин, амфотерицин В - по 10 мкг/мл и цефсулодин или триметоприм - 5 мкг/мл), в которые для инактивации образующихся при культивировании ингибиторов можно добавить активированный уголь или крахмал, а также на неселективные питательные среды (бруцеллезный агар с 5 — 7 % лошадиной крови). Посевы инкубируют в анаэробных контейнерах с газогенера­торными пакетами до 7 сут при 37 °С в атмосфере, содержащей 5 % кислорода и 10 % углекислого газа.

Колонии геликобактеров на питательных средах мел­кие или достаточно крупные, серые прозрачные. В мазках из колоний обнаруживают слегка изогнутые или прямые, реже, типичные грамотрицательные спирально изогнутые бакте­рии. При темнопольной или фазово-контрастной микроскопии выявляют характерную подвиж­ность клеток возбудителя. Для идентификации возбудите­ля проводят также биохимические и другие тесты (табл. 11).

Для этого чистую культуру геликобактера засевают на одну из сред с мочевиной и инкубируют ее в течение от 15 мин до 24 ч. В случае наличия уреазы происходит разложение мочевины с образованием щелочного продукта – аммиака, сопровождающееся изменением цвета индикатора среды.

Серодиагностика. Применяют РП, РНГА, РСК, ИФА для определения антител в крови больных хеликобактериозом. С помощью ИФА определяют специфические антитела класса IgG, которые выявляются у больных с высокой частотой, более длительно персистируют и отражают ак­тивность патологического процесса.

Экспресс-диагностика – прямая РИФ (специфическое све­чение хеликобактеров в препаратах слизистой оболочки)

Генодиагностика. Применя­ют ПЦР как экспресс-метод для обнаружения специфических фрагментов ДНК Helicobacter pylori в материале от больного.

Самостоятельная работа студентов

Изучение морфологии Helicobacter pylori (грамотрицательные спиралевидные бактерии - демонстрация).

Учет культуральных свойств Helicobacter pylori на эритрит-агаре (серые, плоские, прозрачные сливаю­щиеся колонии с неровным краем - демонстрация).

Учет уреазной активности Helicobacter pylori (отметить изменение цвета индикатора, свидетельствующее об изменении рН среды на щелочную в результате разложения мочевины с образованием аммиака).

Учет ИФА по определению антител класса IgG к геликобактеру (демонстрация).

После изучения темы студент должен знать: таксономию, морфологические и биологические свойства возбудителей эшерихиозов, иерсиниозов, кампилобактериозов, геликобактериозов, а также патогенез, эпидемиологию, основные клинические проявления и иммунитет; основные методы диагностики, специфической профилактики и лечения этих инфекций.

Изучив тему, студент должен уметь: уметь ставить ориентировочную и развернутую РА для идентификации эшерихий, оценивать результаты микробиологических анализов при эшерихиозах, иерсиниозах, кампилобактериозах, геликобактериозах.