Дослід 1. Реакція на полісахариди.

Принцип методу. При взаємодії крохмалю з йодом утворюються комплексні адсорбційні сполуки, які забарвлюються в синій колір. Синє забарвлення пояснюється адсорбцією йоду крохмалем і утворенням комплексних сполук крохмалю з йодом.

Це можна виразити за допомогою схеми:

Матеріальне забезпечення: 1 % розчин крохмалю, розчин Люголя (розчин йоду в йодиді калію), штатив з пробірками, піпетки.

Хід роботи. У пробірку вносять 0,5 мл розчину крохмалю та додають 1 – 2 краплі розчину Люголя. Спостерігають появу синього забарвлення.

Зробити висновок.

 

Дослід 2. Виявлення глікогену в печінці.

Принцип методу. Глікоген, як і крохмаль, з йодом утворює забарвлені сполуки (крохмаль – темно-синього кольору, глікоген – червоно-бурого).

Матеріальне забезпечення: печінка свіжа або свіжозаморожена, розчин Люголя (розчин йоду в йодиді калію), 1 % розчин ацетатної кислоти, фарфорова ступка, водяна баня, паперові фільтри, штатив з пробірками, піпетки.

Хід роботи. 0,5 г свіжозамороженої печінки поміщають у склянку, подрібнюють ножицями, заливають 4 мл кип’яченої дистильованої води, переносять у пробірку та кип’ятять впродовж 2 – 3 хв (для інактивації ферментів). Пізніше вміст пробірки переливають у фарфорову ступку та розтирають до отримання однорідної маси. Цей гомогенат розводять 1 мл дистильованої води, переносять у пробірку та кип’ятять на водяній бані 20 хв, додаючи воду по краплях у міру википання рідини.

Для повнішого осадження білків киплячу рідину підкислюють 5 – 10 краплями 1 % розчину ацетатної кислоти.

Осад білка відділяють фільтруванням через змочений водою паперовий фільтр. До фільтрату додають 2 – 3 краплі розчину Люголя. При наявності у досліджуваному матеріалі глікогену розчин набуває характерного червоно-бурого забарвлення.

Клініко-діагностичне значення. Глікоген – полісахарид, який є основним резервом вуглеводів в організмі. Головне депо для глікогену – печінка та м’язи. Норма в крові – 16,2 – 38,7 мг/л.

Підвищення концентрації глікогену в крові спостерігають при інфекційних захворюваннях, хворобах крові, що супроводжуються лейкоцитозом, новоутвореннях.

Зниження концентрації характерне для дітей з гострими гепатитами. Важливе клінічне значення має цитохімічне визначення рівня глікогену в клітинах крові, кісткового мозку та печінці.

 

Контроль виконання лабораторної роботи

1. При додаванні до гомогенату, що містить глікоген, розчину йоду утворюється забарвлена сполука:

А. Синього кольору

В. Червоно-бурого кольору

С. Зеленого кольору

D. Безбарвна сполука

Е. Фіолетового кольору

 

2. У пацієнта виникають судоми у м’язах при напруженій фізичній роботі, а поза тим почуває себе здоровим. При біопсії м’язової тканини виявлено значний надлишок глікогену. Концентрація глюкози в крові нижче норми. Про недостатність якого ферменту слід думати?

 

3. Відомо, що глікоген, який становить енергетичний запас організму, відкладається про запас у печінці та м’язах, але не створює резерву в мозку, який у великій кількості використовує глюкозу. Поясніть, чому глікоген не запасається у мозку?

 

Приклади тестів “Крок-1”

1. Глікоген – полісахарид, що має здатність нагромаджуватися в печінці та м’язах. Процеси синтезу та розпаду глікогену в клітинах регулюються завдяки включенню механізмів фосфорилування ключових ферментів обміну глікогену:

А. Глікогенсинтази і глікоген-фосфорилази

В. Глікогенфосфорилази і ліпази

С. Глікогенсинтази і протеїнкінази

D. Фосфопротеїнфосфатази і протеїнкінази

Е. Аденілатциклази і ліпази

2. Дитина квола, апатична. Печінка збільшена та при її біопсії виявлено значний надлишок глікогену. Концентрація глюкози в крові нижча від норми. У чому причина наведених порушень?

A. Знижена активність глікоген-

фосфорилази в печінці

B. Знижена активність глікоген-

синтази

C. Знижена активність глюкозо-6-фосфатізомерази

D. Знижена активність глюкокінази

E. Дефіцит гена, який відповідає за синтез глюкозо-1-фосфатуридил-

трансферази

3. При дослідженні крові у хворого виявлена виражена гіпоглюкоземія натще. При дослідженні біоптату печінки виявилось, що в клітинах печінки не відбувається синтез глікогену. Недостатність якого фермента є причиною захворювання?

А. Глікогенсинтази

В. Фосфорилази

С. Альдолази

D. Фруктозодифосфатази

Е. Піруваткарбоксилази

4. Фосфоролітичний розпад вуглеводів відіграє ключову роль у мобілізації полісахаридів. У результаті дії ензиму фосфорилази глікоген розпадається з утворенням:

A. Глюкозо-1-фосфату

B. Глюкозо-1,6-дифосфату

C. Глюкозо-6-фосфату

D. Глюкози

E. Фруктозо-6-фосфату

5. У дитини з точковою мутацією генів виявлено відсутність глюкозо-6-фосфатази, гіпоглікемію та гепатомегалію. Вкажіть вид патології, для якої характерні ці ознаки:

А. Хвороба Аддісона

В. Хвороба Гірке

С. Хвороба Паркінсона

D. Хвороба Корі

Е. Хвороба Мак-Ардля

 

Індивідуальна самостійна робота студентів

1. Особливості метаболізму вуглеводних компонентів глікокон'югатів та генетичні порушення їх обміну.

Література

Основна:

1. Губський Ю.І. Біологічна хімія. – Київ-Тернопіль: Укрмедкнига, 2000. – 508 с.

2. Гонський Я.І., Максимчук Т.П., Калинський М.І. Біохімія людини. – Тернопіль: Укрмедкнига, 2002. – 744 с.

3. Скляров О.Я., Сергієнко О.О., Фартушок Н.В. та ін. Обмін вуглеводів. Біохімічні та клінічні аспекти. – Львів: Світ, 2004. – 111 с.

4. Клінічна біохімія / За ред. Склярова О.Я. - Київ: Медицина, 2006. – 432 с.

5. Біологічна хімія. Тести та ситуаційні задачі. / За ред. О.Я. Склярова. – Львів: Світ, 2006. – 271 с.

6. Біохімічні показники у нормі і при патології. Навчальний довідник / За ред. Склярова О.Я. – К.: Медицина, 2007. – 320 c.

Додаткова:

1. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.: Медицина, 1998. – 704 с.