Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь FAQ Написать работу КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Технология рекомбинантных днк, или генная инженерияСодержание книги
Поиск на нашем сайте
Форма проведения лекции: обзорная лекция, мозговая атака План лекции 1. Методы иммунного ответа: интерфероны, лимфокины и монокины (интерлейкины); фактор некроза опухолей. 2. Механизмы действия, функциональные аспекты, получение с помощью генно-инженерных методов, клинические и терапевтические испытания инсулина, соматотропина, медиаторов иммунного ответа. 1.Цитокины – большая гетерогенная группа белков с различными функциями, синтезируемая лимфоретикулярными клетками. Цитокины участвуют во многих видах взаимодействий, обеспечивающих функционирование иммунной системы и контроль гемопоэза. Первая группа цитокинов была представлена интерферонами (ИФН), часть цитокинов была классифицирована как интерлейкины (ИЛ), пронумерованные в порядке их обнаружения. ИФН – это группа эндогенных гликопротеидов с м.м. около 3000, которые оказывают неспецифическое противовирусное действие, влияя на клеточные метаболические процессы синтеза РНК и белка. Первоначально было установлено, что ИФН вырабатывают клетки, инфицированные вирусами (тип 1), в дальнейшем – что ИФН вырабатывают также лимфоциты в ходе иммунной реакции (тип 2). Для получения больших количеств ИФН используют шестидневные однослойные культуры клеток куриного эмбриона или культивируемые лейкоциты крови человека, зараженные определенным видом вируса. Иными словами, для получения ИФН создают определенную систему вирус-клетка. Из клетки человека изолирован ген, ответственный за биосинтез ИФН. Экзогенный человеческий ИФН получают, используя технологию рекомбинантных ДНК. Процедура выделения кДНК ИФН-ов состоит в следующем: - из лейкоцитов человека выделяют мРНК, фракционируют ее по размерам, проводят обратную транскрипцию, встраивают в сайт модифицированной плазмиды. - полученным продуктом трансформируют Е.соli, образовавшиеся клоны подразделяют на группы, которые идентифицируют. -каждую группу клонов гибридизируют с ИФН-мРНК. -из образовавшихся гибридов, содержащих кДНК и кРНК, выделяют мРНК, проводят ее трансляцию в системе синтеза белка. -определяют интерферонную противовирусную активность каждой смеси, полученной в результате трансляции. Группы, проявившие интерферонную активность, содержат клон с кДНК, гибридизировавшийся с ИФН-мРНК; повторно идентифицируют клон, содержащий полноразмерную ИФН- кДНК человека. ИФН проявляют некоторые виды активности как лимфокины и иммуномодуляторы. ИФН 1 типа, действующие преимущественно как ингибиторы репликации вирусов в клетке, реализуют свой эффект, стимулируя выработку рибосомами клеток хозяина клеточных ферментов, которые тормозят продукцию вирусов, нарушая трансляцию вирусной мРНК и синтез вирусных белков. ИФН вырабатывают большинство видов животных, но проявление их активности видоспецифично, то есть они действуют только у того вида животных, в которых вырабатываются. Описаны три основных человеческих ИФН: -ИФН -a, представляющий собой фибробластный ИФН типа 1; ИФН -b - человеческий фибробластный ИФН типа 1; ИФН -g - человеческий иммунный ИФН типа 2. ИФН, вырабатываемые клетками любого типа, различают по химическому строению и виду активности. ИФН является одним из основных эндогенных факторов, препятствующих поражению организма вирусной инфекцией (таблица 1). ИФН вызывают индукцию трех ферментов: - протеинкиназы, нарушающей начальный этап построения пептидной цепи, - олигоизоаденилат синтетазы, активирующей РНК-азу, которая разрушает вирусную РНК; -фосфодиэстеразы, разрушающей конечные нуклеотиды иРНК, что приводит к нарушению элонгации пептида. 2. С учетом антивирусного и иммуномоделирующего эффектов ИФН в НПО «Биомед» предложены и успешно апробированы суппозитории с ИФН an1 и пробиотиками при терапии дисбактериозов вирусной и бактериальной этиологии, кандидозов; в гинекологической практике для лечения эндометритов, кольпитов, вагинитов и гинекологического герпеса. Побочные эффекты ИФН включают лихорадку, утомляемость, головные боли, слабость, анемии, желудочно-кишечные и сердечно-сосудистые нарушения. Развитие методов клонирования генов в значительной мере облегчило продукцию високоочищенных цитокинов всех типов и идентификацию большинства интерлейкинов (ИЛ). Специфический ген человеческого ИЛ с присоединенным к нему сегментом ДНК, кодирующим маркерный пептид (участок гибридной белковой молекулы, облегчающий идентификацию и очистку белка), переносят в микробные клетки-продуценты, где экспрессируется химерный белок (продукт клонированного гена, защищенный одной или несколькими аминокислотами от расщепления протеиназами клетки-хозяина). Конструирование рекомбинантных молекул ИЛ осуществляется набором специфических ферментов. Маркерный пептид, входящий в состав химерного белка, очищают иммунноафинной хроматографией. Главным из цитокинов являются ИФНg и ИЛ-2. ИФНg - ключевой медиатор активации системы естественной цитотоксичности, регулирует процесс дифференцировки естественных киллерных клеток и их цитотоксическое взаимодействие с клетками-мишенями, стимулирует цитотоксические и регуляторные функции макрофагов, активирует цитотоксические лимфоциты. Под действием ИФНg повышается продукция цитокинов, таких как ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ -12, ИФНb и фактора некроза опухолей a. ИЛ реализуют эффект через рецепторы на поверхности соответствующих клеток-мишеней. Многие ИЛ проходят стадию клинического излучения, другие нашли разнообразное применение в лечении инфекций, воспалительных, аутоимунных и неопластических расстройств. ИЛ-1 показан для лечения воспалений и септического шока. ИЛ -2 включен в схемы лечения имуногенных опухолей (меланомы, почечноклеточного рака, рака мочевого пузыря). Таблица 1 Терапевтическое применение ИФН человека
Контрольные вопросы 1. Инсулин. Источники получения. Видовая специфичность. 2. Перспективы имплантации клеток, продуцирующих инсулин. 3. Методы идентификация инсулина; производство готовых лекарственных форм инсулина. 4. Каким образом изучаются фармакологические и токсикологические свойства инсулина. 5. Классификация, α-, β~, γ-интерфероны 6. Видоспецифичность интерферонов. 7. Ограниченные возможности получения. 8. Перспективы практического применения препаратов.
Лекция 8
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Последнее изменение этой страницы: 2016-09-18; просмотров: 956; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 3.142.172.250 (0.007 с.) |