Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь FAQ Написать работу КАТЕГОРИИ:  Археология Биология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия ЭкологияТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву 
Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Выделение и первичная идентификацияСодержание книги
Поиск на нашем сайте
При поступлении пробы исследуемого материала в лабораторию должны быть приняты меры по обеспечению наиболее благоприятных условии для выделения из нее искомых микроорганизмов. Следует по возможности скорее приступить к посеву материала в питательные среды, также чрезвычайно важны правильный выбор сред для первичного посева, их качественное приготовление, соблюдение правил техники посева и необходимого режима инкубации посевов. До момента посева подлежащий исследованию материал необходимо сохранять в прохладном месте, огражденном от прямых солнечных лучей. При выборе питательных сред учитывают прежде всего происхождение пробы клинического материала (испражнения, кровь, моча и др.), предполагаемые виды энтеробактерий в соответствутощей пробе, а также цель бактериологического исследования и учет другой информации (диагноз, эпидемическая ситуация и др.), содержащейся в сопроводительной документации. В табл. 5 приведены различные клинические пробы, исследуемые с целью выделения энтеробактерий; бактерии, которые могут содержаться в пробах, и рекомендуемые плотные и жидкие питательные среды для их выделения или обогащения соответственно каждой пробе. Таблица 5. Питательные среды для первичного посева в соответствии с исследуемым материалом.
Условные обозначения: + рекомендуемая среда Из плотных сред, производящихся в нашей стране, высокоселективным действием в отношении сальмонелл обладает висмут-сульфит агар. Селективными средами для выделения шигелл служат среды с антибиотиками, а для одновременного выделения и сальмонелл, и шигелл — агар Плоскирева. В числе коммерческих отечественных сред — агар с эозин-метиленовым синим (ЭМС) и Эндо, будучи слабоселективными, являются в основном дифференциальными средами. Разработаны специализированные среды: для селективного выделения протеев среда Газиумаровой (1978), а эдвардсиелл — среда Эт-2 Калины (1981). Следует упомянуть и о предложенных оригинальных средах для выделения сальмонелл из испражнений методом «подвижного роста» [Литинский Ю. И. и др., 1976]. За рубежом широкое применение получили такие высокоселективные среды для выделения сальмонелл и шигелл, как SS-aгap, дезоксихолатцитратный агар Лейфсона, ксилозолизин-дезоксихолатный агар (XLD), НЕ-агар (Hektoen enteric) или среды только для выделения сальмонелл— бриллиантовый зеленый — феноловый красный и ксилозолизин-бриллиантовый зеленый агары и др. В числе слабоселективных сред для выделения энтеробактерий широко используют агар Мак Конки. Как упоминалось, селективными средами для выделения шигелл служат среды с антибиотиками, практическая разработка которых в нашей стране принадлежит А. Б. Черномордику (1957). В качестве их основ применяют обычные коммерческие среды (Плоскирева, ЭМС, Эндо) с добавлением антибиотика, привыборе которого учитывают данные антибиотикограммы выделяемых в данной местности штаммов шигелл. В числе антибиотиков в этих средах используют тетрациклин, стрептомицин, левомицетин, а за рубежом нередко новобиоцин, ампициллин и др. (в среде Мак Конки). Предложено несколько способов внесения антибиотиков в среду. Широко известен метод Черномордика (1958), при котором предусматриваются две чашки Петри с какой-либо из сред (Плоскирева, ЭМС, Эндо): в одной из чашек среда содержит антибиотик, а в другой— нет. В целях экономии указанных коммерчеких питательных сред и чашек Петри были предложены две модификации сред с антибиотиками с использованием одной чашки. Одна из этих модификаций А. Б. Черномордика и др. (1974)предполагает внесение антибиотика лишь в одну половину чашки с какой-либо коммерческой средой, в то время как другая половина чашки содержит ту же среду без антибиотика — метод градиентных чашек. В другой модификации антибиотиком пропитывается полоска фильтровальной бумаги, помещаемая под агаровым слоем, вокруг которой создается зона концентрации антибиотика, граничащая с обеих сторон полоски с зонами среды без антибиотика — метод бумажной полоски, предложенный В. К. Матвеюком (1975). В связи с наблюдаемыми различиями в спектре антибиотико-устойчивости у шигелл разных видов частота их выделения на средах с одним антибиотиком в зависимости от вида шигелл может колебаться от 20 до 30%. С целью нивелирования этих колебаний рекомендуется внесение в соответствующую среду двух антибиотиков с использованием двух бумажных полосок, каждая из которых в отдельности пропитана одним из двух антибиотиков [Прямухина Н. С. и др., 1979; Черномордик А. Б. и др., 1980]. Ценность сред с антибиотиками теснейшим образом связана с осуществлением и оперативным учетом результатов контроля за спектром антибиотикоустойчивости шигелл. Отмечено, что в условиях меняющейся тактики применения антибиотиков в терапии дизентерии, ветеринарной практике и др. штаммы шигелл могут не только приобретать новые, но и утрачивать прежние маркеры устойчивости. Последнее следует иметь в виду при конструировании сред с антибиотиками [Прямухина Н. С. и др., 1980]. Для посева проб материала, обычно содержащих разнообразную микрофлору (испражнения, гной, секционный материал и др.), наиболее целесообразно применять высокоселективные среды, а для проб, обычно не содержащих микроорганизмы (кровь, спинномозговая жидкость и др.), — слабоселективно-дифференциальные среды. Однако учитывая возможность выделения из испражнений или другого материала в качестве возбудителей заболеваний не только патогенных, но и условно-патогенных энтеробактерий, которые могут сильно подавляться на высокоселективных средах, оптимальным является одновременное применение тех и других сред. Среды, рекомендуемые для накопления некоторых энтеробактерий, не выпускаются отечественной промышленностью, их готовит в лабораториях в соответствии с рецептурой, прилагаемой в специальном разделе данного руководства. В числе указанных (табл. 5) жидких обогатительных сред несколько сред предназначено для накопления сальмонелл. Из них селенитовый бульон, магниевая среда, среды Мюллера или Кауфмана рекомендуются для посева таких материалов, как испражнения, гной и др., а желчный бульон, среда Рапопорт — для материалов, обычно не содержащих микроорганизмы (кровь, спинномозговая жидкость и др.). Попытки разработки специализированной среды для накопления шигелл (при исследовании клинических проб материала) поока были безуспешными. В связи с этим пытались применить для шигелл «сальмонеллезные» среды обогащения. Многочисленными работами доказано, что из этих сред определенным эффектом обогащения только в отношении S. sonnei обладает селенитовый бульон, другие среды для накопления шигелл не пригодны. По общему признанию наиболее подходящей в качестве накопительной среды для шигелл служит грамнегативный (GN) бульон [Hajna A., 1955], изготовление которого в виде сухого коммерческого препарата осуществляется рядом зарубежных фирм (Difco, BBL и др.). Благоприятной средой для накопления клебсиелл и энтеробактеров при исследовании таких материалов, как слизь из зева и носа, кровь и др., является глюкозный бульон. В нашей стране предложены специализированные среды (см. табл. 5) для накопления протеев — среда П-1 [Калина Г. П., 1975], клебсиелл — среда К-1 [Калина Г. П., 1980], иерсиний [Ющенко Г. В., 1980], эдвардсиелл — среда Эт-1 [Калина Г. П.,1981]. Большинство из указанных в табл. 5 плотных сред выпускаются в виде отечественных сухих коммерческих препаратов. Хотя приготовление этих сред очень просто, однако качество их зависит от тщательности выполнения даже самых несложных процедур. Так, делая навеску сухой массы, следует не только ее точно взвешивать, но и быть уверенным в исправности весов, кроме того, важно не допускать потерь при переносе навески. Необходимо обеспечить полное растворение порошка в соответствующем объеме дистиллированной воды, а при нагревании и кипячении взвеси не допускать пригорания. Перед употреблением среды необходимо убедиться, что она достаточно подсушена и на ее поверхности отсутствует конденсационная влага. Исследуемую пробу материала засевают прямым посевом в чашки с плотными селективно-дифференциальными средами и одновременно в жидкую среду обогащения с последующим высевом из нее на указанные пластинчатые среды. На плотные высокоселективные среды, включая среды с антибиотиками, посевного материала наносится больше, чем на слабоселективные. При одновременном применении сред обоих типов для высева материала из одной и той же пробы посев на слабоселективную среду может быть сделан шпателем, использованным перед этим для посева на высокоселективную среду, т. е. без внесения в нее новой порции материала. Для посева на плотные питательные среды используют стеклянный шпатель или проволоку (желательно платиновую), вмонтированную в специальную рукоятку, которая заканчивается петлей. При посеве на поверхность агара у края чашки наносят 1—2 капли исследуемого материала и растирают его непрерывными движениями шпателя на небольшом участке агара, после чего, оторвав шпатель от поверхности, продолжают растирание им же на оставшейся не засеянной части среды. Поверхность агара в чашке Петри может быть также засеяна петлей. Нанесенный у края чашки исследуемый материал распределяют поочередно на каждой секторной четверти агара непрерывными движениями петли из стороны в сторону, повертывая чашку под углом 90°. Перед каждым последующим сектором петля должна стерилизоваться, благодаря чему достигается рост изолированных колоний. В среды с бумажными полосками, пропитанными антибиотиками, посевной материал наносят на агар в зоне полосок, распределяя его вначале в этой зоне, а затем по остальной поверхности агара. Посевы выращивают при температуре 37 °С на пластинчатых питательных средах в течение 18—20 ч (48 ч на висмут-сульфит агаре), в средах обогащения максимальный срок инкубации посевов не должен превышать 18 ч (кроме желчи и крови). Это связано с тем, что обычно селективные среды обогащения недостаточно токсичны, чтобы полностью подавить рост эшерихий, энтерококков и других непатогенных микроорганизмов. Однако в первые 8—12 ч в селенитовой среде число эшерихий снижается, а после 12 ч эти бактерии начинают размножаться [Leifson Е., 1936]. Теоретическим обоснованием этого феномена служат данные Н. П. Чижовой (1972), исследовавшей механизм селективного (для сальмонелл) действия указанной среды. Как известно, рост бактерий в селенитовой среде сопровождается восстановлением селенита натрия до свободного селена, но какого-либо научного объяснения неодинакового токсического действия селена на энтеробактерии не приводилось. Оригинальными исследованиями Н. П. Чижовой были установлены различия в способах восстановления селена сальмонеллами и эшерихиями. У первых этот процесс осуществляется внеклеточно, а у вторых — внутриклеточно, что и сопряжено с гибельными для клеток эшерихий изменениями в морфологической структуре и функциональной деятельности. Автором показано также, что свойственное эшерихиям внутриклеточное восстановление селена происходит лишь в первые 12 ч, в более поздние сроки отмечается появление и накопление селенитрезистентных мутантов эшерихий, которые приобрели способность восстанавливать селен аналогично сальмонеллам. Таким образом, выявленные Н. П. Чижовой закономерности являются теоретическим обоснованием необходимости непродолжительных (в пределах 12—18 ч) сроков выращивания посевов в селенитовой среде. При целенаправленном исследовании на Y. enterocolitica и У. pseudotuberculosis посевы в жидкую среду обогащения инкубируют в условиях холодильника (4°С), проводя первый высев из нее на плотную среду через 6—18 ч. Последующие высевы делают на 2-е сутки и затем через каждые 2—4 дня на протяжении 14 сут (при отрицательных результатах). Чашки с посевами для выделения иерсиний инкубируют при 25—26 °С, просматривая их через 18—20 ч и повторно на 2-е сутки. Образцы всех исследуемых материалов желательно сохранять в холодильнике до следующего дня и при необходимости следует проводить повторный высев. При невозможности сохранения пробы в указанных условиях следует получить материал заново для повторного исследования. При слишком густом росте, затрудняющем выделение культуры, рекомендуется рассев в чашку с селективно-дифференциальной средой. Помимо указанных общих правил посева исследуемого материала, требуется соблюдение особенностей посева соответственно характеру пробы. Если испражнения доставлены без консерванта, их суспендируют в изотоническом растворе натрия хлорида в соотноше-нии 1:10. На высокоселективных средах количество посевного-материала необходимо увеличить в 3—5 раз по сравнению со слабоселективными средами. В среду обогащения испражнения вносят в соотношении 1:5 и тщательно перемешивают. При. взятии материала ректальным тампоном его погружают в среду обогащения. Пробирки с посевами помещают в термостат, а по окончании инкубации делают высевы на плотные селективно-дифференциальные среды. Кровь. После посева крови, выполненного как указано выше, и инкубации в термостате трехкратно делают высев (ежедневно) на плотные среды Эндо, ЭМС или слабощелочной агар, а при отрицательном результате — еще на 6-е и 10-е сутки. При посеве рвотных масс и промывных вод желудка с целью накопления возбудителя используют соответствующие среды двойной концентрации при соблюдении соотношения засеваемого материала и среды 1:1. Желчь (дуоденальное содержимое) засевают во флаконы с 50 мл питательного бульона в соотношении 1:10 и на плотные селективно-дифференциальные среды. Оставшуюся желчь также помещают в термостат. Мочу после центрифугирования или без него засевают в среды для обогащения двойной концентрации в соотношении 1:1. Гной, пунктаты органов, акссудат, слизь из зева и носа, мокроту. отделяемое цервикального канала матки засевают в жидкие и плотные питательные среды для обогащения и выделения. Спинномозговую жидкость центрифугируют и осадок засевают на питательные среды для обогащения и выделения. Соскоб с розеол засевают, как указано выше, в среду обогащения. Операционный материал — содержимое удаленного червеобразного отростка или кусочек другого органа (ткани), желчного и мочевого пузыря исследуют, как испражнения, желчь и мочу соответственно. Женское грудное молоко засевают в жидкие и плотные питательные среды для обогащения и выделения. Материал, полученный при патологоанатомическом вскрытии, засевают либо непосредственно на плотные среды прикосновением (отпечатком) поверхности среза органов к агару, либо тщательно измельчают в стерильных фарфоровых ступках при добавлении небольшого количества жидкости (питательный бульон, изотонический раствор натрия хлорида). Полученную взвесь засевают на плотные среды и, если это необходимо среду обогащения. Кровь,мочу, желчь исследуют соответственно. Изучение и интерпретация характера роста на плотных средах как предварительный этап идентификации микроорганизмов требуют большой тщательности и определенного практического опыта. От начальной оценки колоний в первую очередь зависит исход бактериологического исследования. При этой оценке учитывают различные характеристики колоний, относительное число колоний каждого типа, чистоту культуры, видимые реакции в среде, наступающие в результате метаболизма бактерий. Визуальную характеристику колоний получают, держа чашку в одной руке и осматривая поверхность агара на наличие микробного роста, а также просматривая его в проходящем дневном или искусственном свете. Во время осмотра чашку на клоняют в разных направлениях при достаточном освещении так, чтобы свет мог падать под различными углами; кроме того можно применять также ручную лупу. В числе характеристик колоний учитывают их размер (диаметр в миллиметрах), форму, возвышение над поверхностью (плоская, выпуклая), особенности края (ровный, волнистый и др.) и поверхности (блестящая, матовая и т. д.), цвет, плотность (прозрачная, мутная) и консистенцию (вязкая, пленчатая и др.). Обращают также внимание на возможное образование пигмента, наличие специфического запаха, изменение цвета среды, Все эти признаки колоний и ругие культуральные свойства энтеробактерий различных родов подробно описываются в соответствующих главах. Решающее значение при оценке роста энтеробактерий на пластинчатых средах имеет дифференциация по окраске изолированных колоний, зависящей от отношения бактерий к дифференцирующим компонентам сред. В качестве дифференцирующих субстратов в средах для выделения энтеробактерий используют углеводы, аминокислоты и др., утилизация которых выявляется с помощью различных индикаторов (табл. 6, 7). Таблица 6. Характеристика колоний энтеробактерий на высокоселективно-дифференциальных средах.
Таблица 7. Характеристика колоний энтеробактерий на слабоселектнвно-дифференциальных средах
Дифференцирующим субстратом в среде Плоскирева, Эндо, Мак Конки служит лактоза, по отношению к которой отличают бесцветные колонии бактерий, не ферментирующих этот углевод (шигеллы, сальмонеллы и др.), от окрашенных колоний бактерий, обладающих этой способностью (большинство эшерихий, клебсиелл, энтеробактеров, некоторые представители цитробактеров и др.). Единственным, дифференцирующим признаком на висмут-сульфит агаре служит образование сероводорода, при наличии которого колонии имеют черную окраску с металлическим блеском и характерное почернение среды под ними; некоторые сальмонеллы формируют колонии с зеленой окраской различной интенсивности и разных оттенков. В некоторых средах использованы сложные дифференцирующие системы, дающие возможность по двум или нескольким признакам различать колонии большего числа представителей энтеробактсрий. Так, SS-aгap и дезоксихолатцитратный агар Лейфсона позволяют дифференцировать колонии энтеробактерий по продукции сероводорода и ферментации лактозы, НЕ-агар — не только по продукции сероводорода, но еще и по ферментации трех углеводов, a XLD-агар — к тому же и по декарбоксилированию лизина. Дифференциация колоний эдвардсиелл от других энтеробактерий на среде Эт-2 основывается на сочетании комбинированного использования их свойств образовывать сероводород, декарбоксилировать лизин и на отсутствии способности сбраживать маннит. Эдвардсиеллы формируют колонии с черным центром, в то время как другие энтеробактерии, в том числе и продуцирующие сероводород, но не обладающие лизиндекарбоксилазой (P. vulgaris, P. mirabilis) или ферментирующие маннит (сальмонеллы, цитробактеры), таких колоний не образуют. В основе среды для выделения протеев лежит подавление роста сопутствующей микрофлоры входящим в ее состав поверхностно-активным веществом, который не препятствует росту протеев. В зависимости от поставленной цели, характера исследуемого материала, обследуемого контингента и др. микробиолог, изучая колонии, определяет дальнейший ход бактериологического анализа, включая их отбор. При наличии «подозрительных» на шигеллы или сальмонеллы лактозоотрицательных колоний они подлежат первоочередному отсеву (не менее 3—5 колоний). При отсутствии таких колоний с целью выделения условно-патогенных энтеробактерий для дальнейшего изучения снимают по нескольку колоний, различных по форме и окраске. Методика отсева колоний имеет большое значение для получения чистой культуры бактерий. Колонию следует снимать малой бактериологической петлей или иглой, прикасаясь к поверхности колонии в центре. Охлаждать петлю или иглу прикосновением к визуально свободной от роста поверхности питательной среды нельзя, ибо следует помнить, что на селективных для шигелл и сальмонелл агаровых средах эшерихии и другие энтеробактерий растут плохо, часто не способны ферментировать лактозу и формировать визуально выявляемые колонии. Поэтому при изоляции колоний, подозрительных на патогенные энтеробактерии, рядом лежащие колонии других микроорганизмов одной петлей могут быть перенесены в среды для биохимической идентификации, где сапрофиты, не подвергаясь более селективному подавлению, нормально развиваются, образуя тем самым смешанную культуру и обусловливая ложные результаты биохимических тестов. Одним из эффективных вспомогательных методов при определении чистоты культуры и ориентировочного распознавания колоний может служить метод микроскопии колоний в косопроходящем свете по Landy (1950). Для этой цели испытуемую культуру рассевают по поверхности чашки с питательным агаром так, чтобы обеспечить рост изолированных колоний. Принцип методики изучения колоний при косом освещении отличается от обычного метода микроскопии тем, что объект рассматривают не в проходящем свете, а освещенным косо направленным лучом, обусловливающим цветное окрашивание рассматриваемых колоний и выявление строения их поверхности. Этого эффекта достигают с помощью зеркальца от бинокулярной лупы или микроскопа, помещенного на столе между лупой и осветителем вогнутой стороной вверх и слегка повернутого так, чтобы обеспечить угол падения луча 41—42 °С. Зеркальце помещают на равном расстоянии (12—14 см) между осветителем и центром предметного столика лупы. Для удобства работы зеркальце зажимают специальным устройством. Используют увеличение Х40. При правильной установке узкий пучок света от лампы осветителя с помощью зеркала должен освещать скользящим светом центр чашки с посевом, где создается наиболее правильное освещение. Молодые колонии (10—18-часовые), находящиеся в гладкой форме, при косом освещении имеют гомогенную структуру поверхности и цвет, характерный для энтеробактерий отдельных родов: розово-голубой у шигелл, зелено-желтый у сальмонелл и т.д. При известном навыке ориентировочная дифференциация колоний некоторых энтеробактерий становится доступной. Колонии шероховатой и переходных форм светятся более тускло, их цвет перестает быть типичным, а приобретает зеленовато-серые, бежевые тона. Поверхность колоний становится исчерченной — концентрически, радиально или в виде ячеек [Пехлецкая В. Я. и др., 1957; Хоменко Н. А., 1961]. Установлено, что цветное свечение колоний — это оптический феномен, связанный с волновой природой света и его дифракцией. Разница в цвете зависит от ширины микробных клеток, составляющих колонию. Гомогенность или исчерченность поверхности и яркость свечения обусловлены ориентацией бактерий в колонии, их взаиморасположением [Акатова Н. С., 1966]. Микроскопию колоний в косопроходящем свете широко используют также при селекционной работе с энтеробактериями и микроорганизмами других семейств. При обычном исследовании оценка колоний ограничивается указанными характеристиками, после чего отобранные колонии пересевают на среды для первичной идентификации. При чрезвычайных эпидемических ситуациях на этом этапе могут быть проведены дополнительные исследования. Так, некоторые из числа тестов, предназначенных для определения родов или видов энтеробактерий и дифференциации их от представителей других семейств, могут быть применены для ориентировочного изучения колоний (при условии их изолированного роста). Исследования могут быть направлены на прямое определение индола, когда небольшую часть испытуемой колонии наносят на полоску фильтровальной бумажки, пропитанной реактивом Ковача; немедленное появление красного цвета указывает на наличие индола. С целью определения наличия цитохромоксидазы часть колонии втирают в участок бумажной полоски, содержащей реактив, выявляющий этот фермент. Быстрое, через несколько секунд, появление соответствующего окрашивания выявляет цитохромоксидазную активность. Для прямой серологической идентификации небольшое количество материала из колонии суспендируют в маленькой капле изотонического раствора натрия хлорида и затем соединяют с каплей специфической агглютинирующей сыворотки. Можно также малое количество испытуемого материала размешать бактериологической петлей непосредственно в сыворотке. Появление бактериальной агглютинации свидетельствует о наличии соответствующего антигена. Указанные тесты могут служить лишь для весьма ориентировочного представления об изучаемых бактериях, а выявленные с их помощью свойства требуют последующего уточнения при работе с чистыми культурами. Как указывалось, чистые культуры подвергают дальнейшему изучению на комбинированных средах, позволяющих осуществлять их предварительную идентификацию по сочетанию ряда признаков, важных для определения семейства, родов или некоторых видов энтеробактерий, К числу таких сред в нашей стране относят коммерческую среду Клиглера, прототипом которой является зарубежная KI, а также агар Олькепицкого, двухслойную комплексную среду (ДУКС) и трехсахарный агар с солями железа (обозначаемый за рубежом ТSI), которые готовят по рецептурным прописям (см. раздел «Питательные среды и реактивы»). В зарубежной микробиологической практике используют, кроме KI и TSI, агар с лизином и солями железа (LIA), полужидкий агар с орнитином (МIO) и др., выпускаемые в виде сухих коммерческих препаратов. Посев на указанные среды проводят вначале по скошенной части в виде прямой линии, затем в толщу агарового столбика и закапчивают по скошенному агару штрихом. Следует иметь в виду, что укол в толщу агарового столбика не должен достигать дна, с тем чтобы не нарушились условия для сбраживания глюкозы в относительно анаэробных условиях. Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня, учитывать результаты необходимо не позднее чем через 18 – 24ч. Первоосновой многих комбинированных сред послужила среда Ресселя [Russell F., 1911], предназначавшаяся для выявления образования кислоты и газа при ферментации глюкозы и лактозы. В 1917 г. I. Kligler модифицировал ее добавлением сульфатного железа и тиосульфата натрия с целью выявления продукции сероводорода. Состав сред Клиглера и TSI аналогичны, за исключением содержания в последней еще и сахарозы. Агар Олькеницкого представляет собой вариант трехсахарного агара, в котором в качестве индикатора сероводорода использована соль Мора и включена мочевина. В табл. 8 показаны реакции энтеробактерий на средах Олькеницкого и Клиглера. О ферментации лактозы (сахарозы) на этих средах судят по изменению цвета агара в скошенной части, а о ферментации глюкозы — в столбике, в котором при газообразовании появляются пузырьки (разрывы среды или ее отслоение от стенок пробирки). Образование сероводорода устанавливают по почернению среды ниже скошенной части агара, а при его интенсивной продукции наступает почернение всего столбика среды. В среде Олькеницкого при росте культуры, гидролизующей мочевину, происходит щелочение, вследствие чего вся среда приобретает ярко-красный цвет. В случае указанного расщепления мочевины в среде Олькеницкого учет ферментации углеводов невозможен. При интенсивном образовании сероводорода в этой или в средах Клиглера и TSI, когда целиком вся среда чернеет, учет ферментации углеводов затруднителен. Однако следует помнить, что процесс образования сероводорода протекает в кислой среде, поэтому почернение столбика свидетельствует о расщеплении глюкозы, свойственном всем энтеробактериям. ДУКС, разработанная в 1978 г. Г. П. Калиной, лишена указанных недостатков. В ДУКС, как и в агаре Олькеницкого, можно определить ферментацию глюкозы, лактозы и сахарозы, образование сероводорода и наличие уреазы (табл. 9). (Преимущество ДУКС обусловлено послойным расположением мочевины, субстратов для индикации сероводорода и углеводов, что не мешает учету ферментации последних. Уместно отметить, что определить образование сероводорода можно лишь с помощью упомянутых сред Клиглера, Олькеницкого, TSI, ДУКС. Таблица 8. Первичная идентификация энтеробактерий по биохимическим реакциям в комбинированной среде
Условные обозначения: К— кислота; КГ — кислота и газ; Г — газ;. учет реакций затруднен; — реакция отрицательная; + реакция полож
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
|
Последнее изменение этой страницы: 2016-09-13; просмотров: 849; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 18.119.255.183 (0.012 с.) |
