Реакція нейтралізації ( РН )

РН основана на пригніченні цитопатогенного ефекту в культурі клітин після змішування зі специфічними сироватками (антитілами). РН інфекційної і цитопатичної дії вірусів здійснюється на чутливих до вірусу живих системах та культурах клітин. З матеріалу, що містить вірус, готують серійні розведення і обробляють специфічною сироваткою, після чого цією сумішшю заражують культуру тканини, курячі ембріони чи лабораторних тварин. Контролем є чутлива система, заражена вірусом, оброблена нормальною сироваткою. Позитивною вважають РН при відсутності ЦПД в культурі клітин, змін в курячих ембріонах, захворювання чи загибель тварин. Оскільки більшість середовищ, що використовуються для культивування еукаріотичних клітин, містять індикатор, оцінити реакцію нейтралізації можна по зміні (чи його відсутності) кольору середовища – кольорова РН.

Реакція гальмування гемадсорбції (РГГадс) використовується для ідентифікації гемадсорбуючих вірусів і визначення титру антитіл в сироватках. Для постановки цієї реакції використовують матеріал від хворої людини, специфічні імунні сироватки та культуру клітин. На першому етапі цієї реакції матеріал від хворого змішують зі специфічними імунними сироватками і таку суміш наносять на культуру клітин.

Інтерпретація результатів проводиться наступним чином:

Позитивна реакція - відсутність адсорбції еритроцитів на культурі клітин. Такий результат утворюється у випадку коли вірус з матеріалу від хворого нейтралізується антитілом специфічної імунної сироватки. При нанесенні такої суміші на культуру клітин вірус вже не здатен проникати у клітину, не залишає на її поверхні специфічні антигені, і на ній не адсорбуються курячі еритроцити.

 

 

		Схема позитивної РГГАдс

При негативній реакції внаслідок того, що на першому етапі не відбулося нейтралізації вірусу антитілом імунної сироватки, вірус проникає в клітину і при нанесенні курячих еритроцитів відбувається гемадсорбція.

Реакція гальмування гемаглютинації (РГГА) базується на блокуванні гемаглютиніна – віруса антитілами специфічної імунної сироватки.

еритроцити антитіла вірус нейтралізація вірусів спец.сир-ки антитілами і гальмування гемаглютинації Схема позитивної РГГА

На першому етапі данної реакції вірусвмісний матеріал від хворої людини змішують зі специфічними імунними сироватками, потім додають курячі еритроцити.

При позитивному результаті, тобто коли вірус нейтралізується антитілом специфічної імунної сироватки, не відбувається гемаглютинації і курячі еритроцити осідають на дно комірки пластикої планшетки у вигляді осаду з ровними краями – „гудзика”.

 

 

При негативній реакції – нейтралізація віруса антитілами специфічної імунної сироватки не відбувається, тому у комірці спостерігається ефект гемаглютинаці – осад у вигляді „парасольки”.

 

Імуноферментний аналіз (ІФА) став одним з провідних методів у експрес-діагностиці вірусних інфекцій. Частіше всього застосовується його твердофазний сендвіч-варіант. Діагностичні набори для ІФА містять пластикові 96-комірчасті планшети, на дні комірок яких фіксовані специфічні антитіла. При додаванні в комірку досліджуваного матеріалу з відповідним вірусом останній зв’язується з антитілом. На другому етапі у відмиті комірки додають моноклональні чи монорецепторні антитіла з прікріпленою до них молекулою ферменту (пероксидази або лужної фосфатази). Оскільки моноклональні антитіла (МкАТ) спрямовані на один із етапів складного вірусного антигену, вони не конкурують з полівалентною сироваткою, яка зв’язує антиген. Після додавання індикатора і відповідного субстрату, відбуваеться зміна (від жовтого до коричневого) забарвлення внаслідок зміни рН (розщеплення субстрату). Забарвлення, що з’являється, аналізують на багатоканальних спектрофотометрах.

 

Реакція імунофлюоресценції (РІФ) в прямому і непрямому варіантах також досить широко застосовується для ідентифікації вірусів і ще частіше для експресс-діагностики вірусних захворювань.

Прямий метод РІФ – як еспресс метод для діагностики вірусних інфекцій, оснований на тому, що віруси з матеріалу від хворого оброблені імунними сироватками з антитілами, міченими флуорохромом, здатні світитися в УФ-променях люмінісцентного мікроскопу.

Непрямий метод РІФ оснований на виявленні комплексу антиген (вірус)-антитіло за допомогою антиглобулінової (проти антитіл) сироватки, міченої флуорохромом.