Підрахунок формених елементів крові

Мета Ознайомитись з методами підрахунку еритроцитів, лейкоцитів. Визначити вміст їх у крові.

 

Прилади та матеріали. Мікроскоп, лічильна камера Горяєва, пробірки, піпетки, скляні палички, 3% розчин хлориду натрію, 4% розчин оцтової кислоти, підфарбований метиленовим синім або генціанвіолетом, стерильний скарифікатор, настойка йоду, вата.

Об’єкт дослідження Кров для аналізу.

 

Питання для теоретичної підготовки Будова еритроцитів.

Вплив різних факторів на кількість еритроцитів у крові. Анемії, ерітроцитози. Класифікація та функції лейкоцитів. Лейкоцитозі і лейкопенії. Фагоцитоз, його біологічне значення. Тромбоцити, їхня роль в організмі.

 

Завдання 1 Методи взяття крові

Невелику кількість крові можна взяти в людини, уколовши пучку четвертого пальця на лівій руці після обмивання шкіри цієї ділянки спиртом і ефіром. Прокол шкіри роблять на глибину 2-3 мм спеціально для цього пристосованим стерильним скарифікатором. Першу краплину крові знімають сухою марлею. Підносять піпетку до каплі крові, не торкаючись ранки, нахиляють капіляр до низу і нагнічують кров у піпетку. Відразу після взяття крові на пучку накладають марлю з розчином спирту (іноді додатково обробляють розчином йоду)і тримають великим пальцем, поки не припиниться кровотеча.

Завдання 2 Знайомство з камерою Горяєва.

 

 

 

Мал.1. Лічильна камера Горяєва.

А – лічильна камера (вид зверху).

Б – сітка Горяєва (1 – малий квадрат; 2 – великий квадрат).

В – змішувач для еритроцитів.

Г - змішувач для лейкоцитів.

 

Сітка Горяєва складається з 225 великих квадратів(15´15). Частину з них розділено вертикально і горизонтально на 16 маленьких квадратиків. Таких великих квадратів, які містять по 16 маленьких, в камері 25. Глибина камери дорівнює 1/10 мм, бік малого квадрата – 1/20 мм, отже, об’єм одного малого квадрата становить 1/4000 мм³ (1/20 ´ 1/20 ´ 1/10 = 1/4000) Одиницею відліку є маленький квадрат.

 

Завдання 3 Підрахунок кількості еритроцитів.

Камеру Горяєва накривають покривним скельцем і притирають його до появи райдужних кілець. Камеру розташовують під мікроскопом і розглядають при малому збільшенні, а потім при великому(до отримання чіткого зображення сітки Горєва).

Кров набирають в меланжер до мітки 0,5, протирають його кінчик фільтрувальним папером, потім до заповнюють розчином (3% NaCl) до мітки 101 (при цьому досягається розбавлення – в 200 разів). Обережно протягом хвилини змішують кров, затиснувши капіляр першим і третім пальцями. Видувають із змішувача на ватку 3 краплі, а 4-ту наносять на середню площадку камери біля краю покривного скельця. Капілярними силами крапля втягується під покривне скельце і заповнює камеру. Після заповнення камери вичікують 1-2хв (доки осядуть формені елементи) і починають підрахунок при малому збільшенні мікроскопа. Підрахунок еритроцитів зручно вести при об'єктиві *8 і окулярі *15.

Підраховують кількість еритроцитів в 5 великих квадратах камери Горяєва (кожний з яких розділений на 16 маленьких, що складає в цілому 80 маленьких квадратів), які розташовані в різних місцях сітки (наприклад, по діагоналі). При цьому доцільно користуватись правилом:

"До даного квадрата відносяться всі еритроцити, які розташовані в середині та на верхній і лівій його межі".

Розраховують вміст еритроцитів у 1 мкл крові за формулою:

 

х = (n ´ 4000 ´ 200)/80 = n ´ 10000, де

 

х - число еритроцитів в 1 мкл цільної крові,

n - сума еритроцитів в 80 маленьких квадратах.

В нормі кількість еритроцитів в крові становить 4,5-5 млн./ мкл (1 мкл = 1 мм³).

 

Завдання 4. Підрахунок кількості лейкоцитів крові.

Камеру Горяєва накривають покривним скельцем і притирають його до появи райдужних кілець. Камеру розташовують під мікроскопом і розглядають при малому збільшенні (до отримання чіткого зображення сітки Горяєва).

Заповнюють змішувач кров'ю до мітки 0,5(0,02 мл), протирають його кінчик фільтрувальним папером і до заповнюють 4% розчином оцтової кислоти, підфарбованим метиленовим синім до мітки 11 (0,4 мл).

Обережно змішують кров, затиснувши капіляр першим і третім пальцями, протягом хвилини. Видувають зі змішувача на ватку 1/3 його об'єму, а наступну краплю наносять на середню площадку камери біля краю покривного скельця.

Підраховують кількість лейкоцитів в 25 великих квадратах (що відповідає 400 малим) камери Горєва, які розташовані в різних місцях сітки(наприклад, по діагоналі). При цьому доцільно користуватись правилом:

"До даного квадрата відносяться всі лейкоцити, які розташовані в середині та на верхній і лівій його межі".

 

Розраховують вміст лейкоцитів в 1 мкл крові за формулою:

х = (n ´ 4ООО ´ 2О)/4ОО = n ´ 200, де

 

х – кількість лейкоцитів в 1 мкл крові

n - сума лейкоцитів в 400 маленьких квадратах.

В нормі кількість лейкоцитів в крові становить 5-8 тис/мкл.

Зарисувати фрагмент сітки камери Горєва з великими та малими квадратами. Записати результат і зробити висновки про відповідність підрахованих формених елементів крові.

 

 

Питання для самопідготовки та контролю

1. Яка техніка підрахунку еритроцитів та лейкоцитів?

2. В яких одиницях вимірюють кількість еритроцитів і лейкоцитів крові?

3. Які особливі фізико-хімічні властивості еритроцитів?

4. Що таке ерітрон, еритроцитоз, еритропенія?

5. Характеристика та функції лейкоцитів.

6. Що таке лейкоцитоз та лейкопенія і яки причини їх виникнення?

7. У хворих на серповидноклітинну анемію еритроцити набувають подовженої форми (у вигляді серпа). Здатність приєднувати кисень при цьому суттєво не порушується. З чим пов’язані паталогічні явища?

 

Лабораторна робота № 2.