Устройство жидкостного хроматографа

Подвижная фаза подаётся в колонку с пом. насоса. До попадания в насос подвижная фаза должна быть профильтрована и освобождена от растворённых в ней газов, так как пузырьки газа при попадании в колонку приводят к снижению её эф-ти. Ввод пробы в жидкостный хроматограф может проводиться с помощью петлевого дозатора.

Хроматографические колонки в ВЭЖХ, в отличие от газохроматографических колонок, прямые. Длина 10 - 30 см, внутр. диаметр 4 - 6 мм. Корпус колонки представляет собой цилиндр.трубку, изготовленную из стекла, нержавеющей стали.На верхнем и нижнем концах колонки расположены фильтры, представл. собой диски из пористой нержавеющей стали. Назначение фильтров – удерживание сорбента в колонке и задержка механических примесей.

Практическое применение

Высокоэффективная жидкостная хроматография используется для разделения, в том числе и препаративного выделения, обнаружения и идентификации, а также количественного опр. вещ-в различной хим. природы.

Основные области применения ВЭЖХ в фармацевтическом анализе:

- идентификация лекарственных веществ, присутствующих в лекарственных формах;

- определение примесей в лекарственных веществах

-количественное опр. лекарственных вещ-в, входящих в состав лекарственных форм

- опр. лекарственных вещ-в в биолог. объектах

92. Ионообменная хроматография Характеристика подвижных и неподвижных фаз. Ионообменное равновесие. Понятие об ионной и ион-парной хроматографии. Практическое применение ионной хроматографии.

В качестве неподвижных фаз в ионообменной хроматографии используются различные ионообменники.

Ионообменниками (ионитами) называют электролиты, у которых один ион является полимерным макроионом, а ионы противоположного знака могут обмениваться на ионы, находящиеся в растворе.

Катионообменники содержат в своей структуре ионогенные группы кислотного характера, анионообменники – основного. В состав амфотерных ионообменников входят и кислотные, и основные

группы.

Каждый ионообменник содержит в своей структуре определённое число функциональных групп, способных к ионному обмену. Число таких групп в единице массы (или объёма) ионообменника характеризуется величиной обменной ёмкости. Практически обменную ёмкость выражают в виде количества ионов (в ммолях), поглощённых 1 г сухого или 1 мл набухшего ионообменника в Н- или Cl-форме при определённых условиях.

В качестве подвижных фаз в ионной хроматографии чаще всего

используют водные растворы, поскольку вода является высокополярным растворителем и способствует ионизации вещества. Хроматогра фирование может проводиться при разных значениях рН в зависимости от природы разделяемых веществ и типа используемого ионообменника. С сильнокислотными и сильноосновными ионообменниками

работают при рН 2 – 12, слабокислотными – 5 – 12, слабоосновными –

2 – 6.

Ионообменное равновесие

Процесс обмена иона А, связанного с матрицей ионообменника

(R), на ион В, находящийся в растворе, можно представить в виде

равновесия:

R A + B ↔ R B + A

На практике для описания ионообменного равновесия используют концентрационную константу, называемую коэффициентом селективности

(KB/A), или смешанную константу, называемую исправленным коэффициентом селективности (K’B/A):

 

Для описания ионообменного равновесия используют также концентрационный коэффициент распределения (D), который равен

отношению равновесной концентрации иона в сорбенте к его равно-

весной концентрации в растворе

Ионной хроматографией называется колоночная ионообменная

жидкостная хроматография с кондуктометрическим детектирова-

нием.

Ион-парной хроматографией называется вариант жидкостной

хроматографии, при котором в подвижную фазу добавляют реагент,

в состав которого входит гидрофобный ион, хорошо адсорбирую-

щийся на поверхности неподвижной фазы– силикагеля с привитыми

алкильными группами

Ион-парная хроматография используется для разделения ионизированных веществ, которые обладают хорошей растворимостью в полярной подвижной фазе, незначительным сродством к неполярной неподвижной фазе и не могут быть удовлетворительно разделены в условиях обычной обращённо-фазовой ВЭЖХ.

93. Эксклюзионная хроматография. Механизм разделения. Характеристика используемых растворителей и носителей. Практическое применение в фарм анализе.

В эксклюзионной хроматографии (гель-хроматографии) разделение основано на различиях в размерах и форме молекул. В качестве твёрдого носителя испол. разл. сетчатые полимеры («гели»). Неподвижной фазой является элюент, наход. в порах зёрен твёрдого носителя, подвижной фазой - этот же элюент, протекающий вдоль слоя частиц полимера.

В процессе хроматографирования более мелкие молекулы проникают в поры геля и задерживаются в находящейся в них неподвижной фазе. Более крупные молекулы не проникают в поры и поэтому движутся быстрее. Выход компонентов смеси из колонки происходит в порядке уменьшения их молекулярных масс. Величина коэффициента распределения (D) в эксклюзионной хроматографии может находиться в пределах от 0 до 1. Для крупных молекул D = 0,удерживаемый объём равен свободному объёму колонки -VR = Vm. В случае молекул, размер которых позволяет им свободно диффундировать через пористый материал, D = 1

Для эффективногоразделения в данном виде хроматографии приходится применять длинные колонки или несколько соединённых друг с другом колонок.

Твёрдые носители:

1. Мягкие - сефадексы, агранозные гели, полиакриламидные гели- орг. ВМС с небольшим кол-вом поперечных связей. Они гидрофильны. Обладают высокой эффективностью и прим. для разделения смесей низкомол.вещ-в.

Процесс хроматорафирования на мягких гелях называется гель-фильтрационной хроматографией.

2. Полужёсткие (сополимеры стирола дивинилбензола, поливинилацетатные гели).Гидрофобны.Их получают полимеризацией. Фактор емкости= 1.2-1.8

Процесс хроматографирования на таких гелях называется гель-проникающей хроматографией.

3. Жёсткие( силикагели и пористые стекла)- имеют фиксированный размер пор, кот. не изменяется ни при каких усл.бывают как гидрофильн., так и гидрофобными.

В качестве растворителей в эксклюзионной хроматографии используют воду, диметилформамид, хлороформ, толуол и т.д. Выбор растворителя зависит от типа используемого геля, вида разделяемых веществ, применяемой системы детектирования.

Основное назначение гель-хроматографии - разделение смесей высокомолекулярных соединений и определение молекулярно-массового распределения полимеров. Для отделения высокомол. вещ-в от низкомол. (белков от АК и низкомол. пептидов)чаще испол. гель-фильтрационная.

94. Бумажная и тонкослоная хроматография.Характеристика подвижных и неподвижных фаз. Анализ плоскостной хроматограммы. Практическое применение бумажной и тонкослойной хроматографии.

Жидкостная хроматография - группа хроматографических методов, в которых подвижной фазой является жидкость.

В плоскостной хроматографии подвижная фаза перемещается в плоском слое сорбента.

В качестве сорбентов в ТСХ используют силикагель, кизельгур, оксид алюминия, целлюлозу и др.