ТОП 10:

Строение сперматозоида млекопитающих



Введение

Биология индивидуального развития – область науки, изучающая закономерности онтогенетического развития организмов.

Задача биологии индивидуального развития – исследование макро- и микроморфологических, физиолого-биохимических, молекулярных и генетических процессов, протекающих в развивающейся особи, выяснение факторов и механизмов, управляющих процессами развития на всех этапах онтогенеза животных.

Биология индивидуального развития входит в число ведущих биологических дисциплин и имеет большое значение для решения теоретических и практических проблем биологии. Основные фундаментальные задачи биологии индивидуального развития заключаются в выяснении молекулярно-генетических механизмов развития и роли межклеточных, межтканевых и межсистемных взаимодействий.

В настоящее время в биологии индивидуального развития создаются предпосылки, которые позволят разрешить многие прикладные проблемы медицины и сельского хозяйства, такие как лечение наследственных болезней, предупреждение врожденных уродств, выяснение механизмов регенерации, клеточного иммунитета и несовместимости тканей, борьба со злокачественными образованиями, понимание причин старения и продление жизни, создание генетических копий (клонов) животных, повышение продуктивности в рыбоводстве, птицеводстве и животноводстве.


Занятие 1

Половые клетки.

 

Строение сперматозоида млекопитающих

Сперматозоиды – мужские половые клетки, подвижные, видоспецифичные. Отделы сперматозоида: головка, шейка, хвост (средняя основная концевая части). Головка – передняя часть спермотазоида, состоит из ядра, акросомы (видоизмененный аппарат Гольджи). Шейка представляет собой цилиндр, в котором находятся 2 центриоли: проксимальная и дистальная. Хвост состоит из осевого комплекса (осевой нити), образованного 9 парами периферических и одной центральной парой микротрубочек (фибрилл), образующих цилиндр. Вокруг осевого комплекса в средней части в виде спирали (11-15 витков) располагаются митохондрии. В концевом отделе фибриллы располагаются в цитоплазме беспорядочно. Во всех отделах имеется небольшое количество цитоплазмы.

 

Строение яйцеклетки

Яйцеклетки – высокоспециализированные клетки, приспособленные к оплодотворению и дальнейшему развитию. Отличаются от сперматозоидов большими размерами и отсутствием центриолей. У большинства животных (за исключением губок и кишечнополостных) это неподвижные, одноядерные, округлой и овальной формы клетки. Основным отличительным признаком яйцеклеток хордовых является наличие желтковых включений в цитоплазме. На основе количества и распределения желтка в цитоплазме яйцеклетки создается их классификация.

Типы яйцеклеток:

- по содержанию желтка

 

               
   
 
 
алецитальные (безжелтковые)
   
 

 

 


 

 
 

 

 


Все яйцеклетки окружены плазмолеммой и имеют яйцевые оболочки: первичные (образованы яйцеклеткой), вторичные (вырабатываются клетками, окружающими яйцеклетку), третичные (образованы из веществ, выделяемых яйцеклеткой).

Яйцеклетки полярны, имеют анимальный и вегетативный полюса.

 

Препараты

№1. Сперматозоиды морской свинки (Рис. 1).

Железный гематоксилин.

Препарат представляет мазок спермы морской свинки. Под малым увеличением найдите зрелые сперматозоиды и рассмотрите их под большим увеличением. Обратить внимание на форму клетки, зарисовать и обозначить: 1 – головку, 2 – ядро, 3 – акросому, 4 – связующий отдел, 5 – протоплазматическую муфту (утолщение), 6 – хвостик. Отдельные экземпляры имеют несколько хвостиков за счет неправильного деления центриолей.

 

Рис. 1. Сперматозоиды морской свинки. Обозначения по тексту.

№2. Сперматозоиды петуха (Рис. 2).

Железный гематоксилин.

Спермии петуха необычного вида: они очень мелкие, короткие. Головка их представлена удлиненным утолщением одного конца в форме колпачка. Зарисовать и обозначить: 1 – головку, 2 – хвостик, шейка не видна.

 

Рис. 2. Сперматозоиды петуха. Обозначения по тексту.

 

№3. Яйцеклетка беззубки (Рис. 3).

Гематоксилин-эозин.

Препарат представляет собой срез половой железы беззубки. При малом увеличении найдите группы крупных, окрашенных в розовый цвет округлых клеток с ядром и ядрышком, расположенных между пучками волокон соединительной ткани. При большом увеличении зарисуйте 2-3 яйцеклетки. Обратите внимание на мелкозернистый характер цитоплазмы. Обозначить: 1 – оболочку, 2 – ядро, 3 – ядрышко,4 – хроматин, 5 – цитоплазму с желточными гранулами.

 

Рис. 3. Яйцеклетка беззубки. Обозначения по тексту.

 

№4. Яйцеклетка лягушки (Рис. 4).

Гематоксилин-эозин.

Препарат представляет собой срез яичника лягушки. При малом увеличении заметны клетки разнообразных размеров и окраски на разных стадиях «большого роста». Мелкие клетки окрашиваются в синий цвет гематоксилином, более крупные – в красный цвет эозином. Различие окраски цитоплазмы связано с изменением физико-химической структуры яйцеклетки вследствие накопления в ее цитоплазме желтка. В крупных ядрах видны ядрышки и хроматиновые глыбки. Нарисуйте несколько клеток на разных стадиях, подчеркнув неодинаковость размеров и окраски. Обозначить: 1 – фолликулярную оболочку, 2 – ядро, 3 – ядрышки, 4 – хроматин, 5 – цитоплазму с желточными гранулами.

Рис. 4 Яичник лягушки с яйцеклеткой. Обозначения по тексту.

Занятие 2

Сперматогенез

В сперматогенезе различают 4 периода: размножение, рост, созревание (мейоз), формирование.

В период размножения первичные половые клетки (гоноциты) превращаются в сперматогонии, лежащие среди клеток Сертоли у стенки канальца. Сперматогонии многократно митотически делятся и вступают в период роста. На этой стадии они развиваются в сперматоциты Ι порядка. Они усиленно ассимилируют питательные вещества, значительно укрупняются и претерпевают глубокую физико-химическую перестройку, в результате которой подготавливаются к третьему периоду – созреванию (мейоз). В результате первого деления созревания (редукционного) каждый сперматоцит Ι порядка делится на два одинаковых сперматоцита ΙΙ порядка с гаплоидным числом хромосом. В результате второго деления созревания (эквационного) сперматоцит II порядка делится на две равноwtyyst клетки – сперматиды. В четвертом периоде – периоде формирования каждая сперматида в результате сложных цитологических преобразований превращается в сперматозоид.

 

Оогенез

Процесс развития женских половых клеток называется оогенезом. Протекает по тому же типу, что и сперматогенез, но имеет некоторые особенности. В оогенезе различают 3 периода: размножение, рост и созревание. В период размножения недифференцированные женские половые клетки многократно митотически делятся. Прекратив деления они становятся ооцитами Ι порядка и переходят в период роста. В нем различают два этапа: малый рост, когда ассимилируются новые вещества в цитоплазме и происходят синтетические процессы в ядре яйцеклетки, и большой рост, когда в клетке накапливается питательный желток. Затем ооцит вступает в период созревания или мейоз, в котором совершаются редукционное и эквационное деления. Процессы деления в ядре протекают так же, как в сперматогенезе, но судьба цитоплазмы иная. При редукционном делении образуются одна полноценная клетка – ооцит ΙΙ порядка и одна маленькая – первое редукционное (направительное) тельце. При эквационном делении каждый ооцит ΙΙ порядка делится на одну крупную клетку – зрелое яйцо и одну маленькую – второе редукционное тельце. Первое редукционное тельце также делится на две клетки. Период формирования в оогенезе отсутствует. Таким образом, в оогенезе из одной оогонии возникает только одна зрелая яйцеклетка, редукционные тельца рассасываются.

 

Препараты

№1. Семенник полевки (Рис. 5).

Гематоксилин-эозин.

Препарат представляет собой поперечный срез семенника полевки, в котором видны семенные канальцы. Между канальцами расположена рыхлая соединительная ткань. Срезы семенных канальцев, лежащие рядом, представляют собой в действительности один семенной каналец, перерезанный на разных уровнях. Так как процесс сперматогенеза протекает по длине канальца несинхронно, то на разных уровнях канальца, то есть на препарате на разных срезах через каналец, будут видны разные стадии сперматогенеза.

Рассмотреть под большим увеличением семенные канальца, в просвете которых, расположены сперматозоиды. Каждый каналец окружен соединительнотканной оболочкой. Стенки канальца изнутри выстланы клетками Сертоли с угловатыми ядрами бедными хроматином. Непосредственно к клеткам Сертоли прилегают мелкие сперматогонии с темно окрашенными ядрами. Следующие один-два слоя клеток по направлению к просвету образованы крупными сперматоцитами Ι порядка. их ядра часто находятся в состоянии редукционного деления. Еще далее к центру располагаются ряды сперматоцитов ΙΙ порядка. В них происходит второе деление созревания. Эти клетки значительно меньше, и ядерные изменения в них видны неотчетливо. Еще ближе к центру расположены сперматиды. Они мельче сперматоцитов ΙΙ порядка, но в остальном морфологически мало от них отличаются. В просвете канальцев находятся сперматозоиды. Хвостики их часто веерообразно загнуты и обращены внутрь просвета, а головки ориентированы к стенке канальца. В соседнем срезе через каналец можно видеть другие стадии развития клеток. Здесь хорошо заметны сперматогонии и сперматоциты Ι порядка, а также некоторые стадии превращения сперматид в сперматозоиды. Зарисовать поперечные срезы семенного канальца и обозначить: 1 оболочку семенного канальца; 2 клетку Сертоли; 3 сперматогонии; 4 сперматоциты Ι порядка; 5 сперматоциты ΙΙ порядка; 6 сперматиды; 7 сперматозоиды.

 

Рис. 5. Семенник полевки. Обозначения по тексту.

№2. Яичник кошки (Рис. 6).

Гематоксилин-эозин.

При малом увеличении отметим, что яичник разделяется на две части: наружную, боле плотную и темно окрашенную – корковое вещество и центральную, более рыхлую и светлую – мозговое вещество. То и другое состоит из мышечных и соединительнотканных волокон, среди которых выделяются перерезанные в разных направлениях кровеносные сосуды. С поверхности яичник покрыт зачатковым эпителием, состоящим из кубических или плоских клеток. В яичнике млекопитающих все половые клетки являются ооцитами Ι порядка, то есть проходят период роста. Однако отдельные яйцеклетки находятся на разных фазах этого периода. В корковом слое, недалеко от поверхности, залегают своеобразные группы клеток. Они состоят из одной более крупной клетки с хорошо заметным ядром – ооцит Ι порядка, окруженной одним слоем плоских мелких питающих фолликулярных клеток. Это примордиальный или первичный фолликул. Яйцевые фолликулы надо рассматривать при большом увеличении микроскопа. По мере роста фолликула количество фолликулярных клеток увеличивается и они образуют несколько рядов кубических и цилиндрических клеток и фолликулы становятся сначала двухслойными, потом многослойными. Далее в нем возникает пространство, заполненное фолликулярной жидкостью, расслаивающей толщу фолликулярных клеток, и яйцевой фолликул превращается в зрелый Граафов пузырек, который различим невооруженным глазом. Снаружи фолликула дифференцируется волокнистая соединительная ткань стромы яичника, которая образует наружную соединительнотканную оболочку. Фолликулярные клетки в нем оттесняются к самым стенкам и образуют многослойный фолликулярный эпителий. Фолликулярные клетки окружают яйцеклетку и вместе с ней образуют яйценосный бугорок, который вдается в полость фолликула, заполненную фолликулярной жидкостью. Клетки, непосредственно окружающие яйцеклетку, создают лучистый венец. Вокруг яйцеклетки хорошо заметна блестящая оболочка. Если срез проходит мимо яйценосного бугорка, то Граафов пузырек кажется лишенным яйцеклетки. Тогда в центре фолликула будет видна полость, заполненная жидкостью, по краям несколько рядов клеток фолликулярного эпителия. Срез может пройти и поверхностно, только через фолликулярный эпителий, тогда полости на срезе не будет. Соединительнотканная оболочка в этом случае будет окружать только группу фолликулярных клеток. Так как не все фолликулы достигают полного развития, то в яичнике встречаются большое количество фолликулов, которые подвергаются распаду (атретические). Такие фолликулы имеют вид розовых образований с однородным содержимым – остатками погибшей в них яйцеклетки. Во время овуляции Граафов пузырек лопается, и зрелая яйцеклетка попадает на поверхность яичника. На месте лопнувшего Граафова пузырька в яичнике развивается желтое тело. При этом фолликулярный эпителий интенсивно разрастается и заполняет бывшую полость. В клетках откладывается липоидный пигмент желтого цвета (лютеин). Из стромы яичника в желтое тело врастают кровеносные сосуды. Желтое тело выполняет функцию железы внутренней секреции.

Зарисовать при малом увеличении и обозначить: 1- зачатковый эпителий; 2 - корковое вещество яичника; 3 - мозговое вещество яичника; 4 - первичные фолликулы; 5 - вторичные фолликулы; 6 - многослойные фолликулы; 7 - Граафов пузырек; 8 - соединительнотканную оболочку; 9 - фолликулярный эпителий; 10 - яйценосный бугорок; 11 - фолликулярную полость; 12 - ооцит Ι порядка; 13 - блестящую оболочку.

 
 

 


Рис. 6. Яичник кошки. Обозначения по тексту.

Занятие 3

Оплодотворение.

Оплодотворением называют слияние сперматозоида с яйцеклеткой, завершающееся объединением их ядер в единое ядро оплодотворенного яйца – зиготы.

Взаимодействие половых клеток (гамет) делится на три фазы:

1 – дистантное взаимодействие, осуществляющееся на некотором расстоянии, до соприкосновения гамет;

2 – контактное взаимодействие, происходящее при непосредственном соприкосновении поверхностей гамет;

3 – сингамия, т.е. процессы, протекающие после вхождения сперматозоида в яйцо.

 

Сингамия

Вхождение сперматозоида в яйцо у разных животных совершается на неодинаковых этапах оогенеза. Процесс слияния ядер происходит после прохождения обоих делений созревания. В период завершения женского мейоза ядро сперматозоида преобразуется в мужской пронуклеус, ядро яйцеклетки – в женский пронуклеус. Конечная стадия сближения пронуклеусов – образование метафазной пластинки деления зиготы.

 

Препараты

№1. Оплодотворение у лошадиной аскариды (Рис. 7).

Гематоксилин.

Препарат представляет собой группу яйцеклеток аскариды на разных стадиях оплодотворения. Имеются неоплодотворенные яйцеклетки, в которых одно ядро, мелкозернистая цитоплазма, около оболочки – сперматозоиды. Есть яйцеклетки, в которых наблюдается момент внедрения сперматозоида в яйцо. Имеются оплодотворенные яйцеклетки с двумя ядрами: одно более рыхлое, это женское ядро в стадии лептонемы профазы, другое более компактное, нередко еще сохраняющее треугольную форму – это мужское ядро. В отдельных яйцеклетках между наружным краем цитоплазмы и оболочкой сохраняются редукционное тельце.

Зарисовать при большом увеличении несколько яйцеклеток на разных стадиях оплодотворения и обозначить: 1 – ядро яйцеклетки; 2 – цитоплазму; 3 –оболочку; 4 – сперматозоид около яйцеклетки; 5 – внедряющийся сперматозоид; 6 – женский пронуклеус в стадии лептонемы профазы; 7 – мужское ядро.

 

 

Рис. 7. Оплодотворение у лошадиной аскариды.

Обозначения по тексту.

 

№2. Деление созревания яйцеклетки лошадиной аскариды (Рис. 8).

Железный гематоксилин.

Препарат представляет собой поперечный срез матки аскариды, набитой яйцеклетками, окруженными толстыми оболочками. Некоторые яйцеклетки еще не оплодотворены, в другие уже проникли сперматозоиды. Ядро сперматозоидов набухает, разрыхляется, увеличивается в объеме и превращается в мужской пронуклеус. Рассмотрим яйцеклетки на стадии 1 деления созревания (редукционного), в ядре которых наблюдается стадия лептонемы профазы. В отдельных яйцеклетках в ядре наблюдается конъюгация хромосом – стадия зигонемы профазы. Во всех яйцеклетках хорошо заметно перивителлиновое пространство и редукционные тельца.

Зарисовать при большом увеличении несколько яйцеклеток на разных стадиях деления созревания и обозначить: 1 – женский пронуклеус; 2 – мужской пронуклеус; 3 – перивителлиновое пространство; 4 – первое редукционное тельце; 5 – второе редукционное тельце; 6 – лептонема профазы; 7 – зигонема профазы (коньюгация хромосом).

 

 

Рис. 8. Деление созревания яйцеклетки лошадиной аскариды.

Обозначения по тексту.

 

 

№3. Синкарион у лошадиной аскариды (Рис. 9).

Железный гематоксилин.

Препарат представляет собой поперечный срез матки аскариды, заполненной яйцеклетками. Рассмотрим яйцеклетки, в которых женский и мужской пронуклеусы сближаются. В других яйцеклетках наблюдается слияние (сингамия) пронуклеусов и образование синкариона (соядрие). В отдельных яйцеклетках мы различаем соприкасающиеся ядра, в других оболочка ядер уже растворилась и хромосомы объединились в общую группу. Во всех яйцеклетках хорошо заметно перивителлиновое пространство и редукционные тельца.

Зарисовать при большом увеличении несколько яйцеклеток на разных стадиях сближения пронуклеуса и обозначить: 1 – пронуклеусы; 2 –перивителлиновое пространство; 3 – первое редукционное тельце; 4 – второе редукционное тельце; 5 – синкарион.

Рис. 9. Синкарион у лошадиной аскариды.

Обозначения по тексту.

 

 

№4. Дробление яйцеклетки аскариды (Рис. 10).

Железный гематоксилин.

В поперечно разрезанной матке видны яйцеклетки, в большей части которых произошло оплодотворение. В перивителлиновом пространстве можно увидеть остатки одного или двух редукционных телец. Не все зиготы находятся на одинаковых стадиях развития: среди них встречаются одноклеточные с двумя пронуклеусами, а также с одним ядром, в котором видно веретено деления. Имеются зиготы, состоящие из 2-х, 4-х и более бластомеров, на разных стадиях митоза. Дробление у аскариды протекает по типу полного, равномерного и радиального. Если в зиготе видно нечетное количество бластомеров (3, 5 или больше), значит некоторые из них не попали в срез.

Зарисовать при большом увеличении несколько зародышей: с одним ядром и веретеном деления зиготы и ряд других, состоящих из нескольких бластомеров. Обозначить: 1 – метафаза; 2 – анафаза; 3 – бластомеры; 4 – редукционное тельце; 5 – перивителлиновое пространство.

 
 


Рис. 10. Дробление яйцеклетки лошадиной аскариды.

Обозначения по тексту.

Занятие 4

Дробление. Гаструляция.

Дробление

После объединения обоих пронуклеусов начинаются многократные митотические деления зиготы, в результате которых зародыш становится многоклеточным. Этот процесс называется дроблением, завершается образованием бластулы. Клетки дробящейся зиготы называются бластомерами, а разделяющие их плоскости – бороздами дробления. По направлению расположения различают борозды: меридиональные, экваториальные, тангенциальные. Тип дробления определяется количеством и расположением желтка в яйцеклетке. Тип бластулы зависит от способа их образования, т.е. типа дробления. Дробления еще различают по типу расположения бластомеров: радиальный, спиральный, билатеральный, анархический.

 

Гаструляция

Процесс расчленения зародыша на зародышевые листки называется гаструляцией, а сам зародыш – гаструлой. Способ гаструляции связан со строением бластулы. Способы гаструляции у зародышей с голобластическим типом дробления: иммиграция (вселение – униполярная, биполярная, мультиполярная), деляминация (расслоение – первичная, вторичная), инвагинация (впячивание), эпиболия (обрастание). Следует отметить, что еще недифференцированный клеточный материал будущих основных зачатков зародыша можно выделить на ранних стадиях развития. Такие участки зиготы или бластулы, служащие материалом, из которого позднее развиваются определенные зачатки органов и тканей называются презумптивнымиучастками или презумптивным материалом.

 

Основные типы дробления и бластул

Морула

Равномерное

Целобластула

Полное

(голобластическое) Амфибластула

Неравномерное

Дробление Стерробластула

Дискоидальное Дискобластула

Неполное

(меробластическое) Поверхностное Перибластула

 

Эмбриональное развитие морского ежа

Яйца морского ежа относятся к изолецитальному типу и содержат мало желтка. Дробление полное, равномерное до стадии 16 бластомеров. Первое деление яйца проходит в меридиональном направлении и приводит к образованию двух одинаковых бластомеров; после второго меридионального деления образуется четырехклеточный зародыш. Третье деление яйца проходит в экваториальной плоскости, поэтому на стадии 8 бластомеров клетки располагаются в виде двух квартетов – анимального и вегетативного, причем анимальные клетки лежат под вегетативными. При четвертом делении анимальные бластомеры делятся равномерно в меридиональном направлении, а вегетативные – неравномерно в широтном направлении. На стадии 16 бластомеров различается венчик из 8 анимальных бластомеров среднего размера (мезомеров), под ними 4 субэкваториальных макромера, а на вегетативном полюсе – 4 микромера. В результате дробления образуется целобластула, в которой слой одинаковых по размеру округлых бластомеров, образующих бластодерму, окружает обширный бластоцель. Различаются анимальный и вегетативный полюса, бластомеры принимают характер высоких цилиндрических клеток, на наружной поверхности которых формируются реснички. Бластула освобождается от оболочки оплодотворения и становится свободноплавающей личинкой. Вегетативная стенка поздней бластулы немного уплощена и утолщена.

Гаструляция начинается с иммиграции в бластоцель на вегетативном полюсе бластулы клеток первичной мезенхимы. Затем здесь же часть стенки зародыша впячивается в бластоцель, и постепенно формируется узкий цилиндрический первичный кишечник – архентерон (гастроцель), который открывается во внешнюю среду бластопором. Таким образом в процессе гаструляции сочетаются элементы иммиграции и инвагинации. В конце гаструляции из дна архентерона в бластоцель выселяются клетки вторичной мезенхимы. Одновременно с гаструляцией клетки первичной мезенхимы формируют элементы личиночного скелета – трехлучевые известковые спикулы.

Препараты

№1. Яйцо морского ежа. Дробление яйца морского ежа (Рис. 11).

Гематоксилин.

Найти зародыш на стадии яйца и двух бластомеров и рассмотреть его под малым увеличением. Обозначить: 1 – яйцо; 2 – бластомеры.

 

 

Рис. 11. Яйцо морского ежа и его дробление. Обозначения по тексту.

 

№2. Дробление яйца морского ежа 4 бластомера (См. рис. 11).

Гематоксилин.

Найти зародыш на стадии четырех бластомеров, обратить внимание на их равную величину. Рассмотреть препарат под малым увеличением и обозначить бластомеры.

 

№3. Бластула морского ежа (Рис. 12).

Гематоксилин.

Препарат представляет собой срез поздней бластулы морского ежа. Стенка бластулы – бластодерма образована одним слоем клеток, окружающих бластоцель. Анимальные полюс образует крышу бластулы, вегетативный полюс – дно. Между крышей и дном располагается краевая зона. На вегетативном полюсе в бластоцель начинается иммиграция клеток первичной мезенхимы. Зарисовать под малым увеличением и обозначить: 1 – бластодерму; 2 – бластоцель; 3 – анимальный полюс (крышу); 4 – вегетативный полюс (дно); 5 – первичную мезенхиму.

       
   
 


Рис. 12. Бластула морского ежа. Обозначения по тексту.

 

№4. Гаструла морского ежа (Рис. 13).

Гематоксилин.

Препарат представляет собой срез гаструлы морского ежа. Наблюдается иммиграция клеток первичной мезенхимы в бластоцель на вегетативном полюсе и образование скелетных игл. Здесь же происходит инвагинация стенки зародыша в бластоцель и формирование архентерона и бластопора. Из дна архентерона в бластоцель мигрируют клетки вторичной мезенхимы. На препарате видно, что бластоцель не только сохраняется, но бывает значительно обширнее гастроцеля. Определяется эктодерма и энтодерма. Зарисовать и обозначить: 1 – клетки первичной мезенхимы; 2 – архентерон; 3 – бластопор; 4 – клетки вторичной мезенхимы; 5 – скелетные иглы.

 

 

 

Рис. 13. Гаструла морского ежа. Обозначения по тексту.

Занятие 5

Нейруляция. Эмбриональное развитие амфибий.

Нейруляция







Последнее изменение этой страницы: 2016-06-22; Нарушение авторского права страницы

infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 3.226.243.130 (0.032 с.)