Механизм разделения веществ в ТСХ:. Для разделения смесей веществ в тонком слое сорбента применяют адсорбционную

Для разделения смесей веществ в тонком слое сорбента применяют адсорбционную, распределительную и ионообменную хроматографию, отличающиеся, прежде всего характером взаимодействий между растворенными веществами и твердой или жидкой фазами, с которыми они соприкасаются. На практике эти взаимодействия почти никогда не протекают изолированно, и разделение веществ обусловлено несколькими взаимодействиями. При выборе подходящего варианта хроматографии в первую очередь следует обратить внимание на строение разделяемых веществ. При помощи адсорбционной и распределительной хроматографии разделяются вещества, строение которых различается природой, числом и характером полярных и неполярных заместителей. При хроматографировании в тонком слое сорбента чаще всего применяют адсорбционную хроматографию, которая проще по выполнению, более эффективна, а результаты анализа более воспроизводимы.

3.Перечислите основные этапы работы при осуществлении методик ТСХ.

1) Нанесение пробы. Анализируемую жидкую пробу наносят на линию старта (на расстоянии 2–3 см от нижнего края пластинки) с помощью капилляра, микрошприца, микропипетки, осторожно касаясь слоя сорбента (диаметр пятна на линии старта – обычно от одного до нескольких мм).

2) Развитие хроматограммы (хроматографирование). Процесс проводят в закрытых хроматографических камерах, насыщенных парами растворителя, используемого в качестве ПФ, например, в стеклянном сосуде, покрытом сверху крышкой.

3) Расшифровка хроматограмм. Если пятна на хроматограмме окрашены, то после высушивания пластинок определяют расстояние от линии старта до центра каждого пятна и вычисляют коэффициенты подвижности.

Если же в состав анализируемой пробы входят бесцветные вещества, дающие неокрашенные, т.е. визуально не идентифицируемые пятна на хроматограмме, то необходимо провести детектирование этих пятен, для чего хроматограммы проявляют.

Детекторами могут быть УФ-свет, нагревание, химическая обработка (H2SO4 конц, реактив Драгендорфа и тд.)

После детектирования пятен на хроматограмме проводят их идентификацию, т.е. определяют, какому соединению соответствует то или иное пятно. Для этого чаще всего используют эталонные пятна «свидетелей». Иногда пятна идентифицируют по величине коэффициентов подвижности Rf, сравнивая их с известными для данных условий величинами Rf. Однако такая идентификация по величине Rf часто носит предварительный характер. Окраска флуоресцирующих пятен также используется в целях идентификации, поскольку различные соединения флуоресцируют излучением различной длины волны (разного цвета). При химическом детектировании пятен селективные реагенты даютокрашенные пятна с соединениями определённой природы, что также используется в целях идентификации. Коэффициент подвижности Rf зависит от целого ряда факторов: природы и качества растворителя, его чистоты; природы и качества сорбента (тонкого слоя), равномерности его зернения, толщины слоя; активности сорбента (содержания в нём влаги); техники эксперимента (массы образца, длины L пробега растворителя); навыка экспериментатора.

 

28. После хроматографирования на бумаге анализируемого раствора, содержащего смесь двух аминокислот Х– и Y–, и в качестве свидетелей – растворов, содержащих аланин и фенилаланин, получены следующие данные: l(аланина) = 30 мм, l(фенилаланина) = 45 мм, l(X–) = 29 мм, l(Y–) =47 мм. Расстояние от линии старта до линии фронта растворителя 100 мм.

1. Рассчитайте относительные коэффициенты подвижности аниона Х– и Y–,приняв в качестве стандарта аланин, идентифицируйте компоненты анализируемой смеси.

Сравнивая рассчитанные коэффициенты подвижности, можно заключить, что Rf (Х-) ≈ Rf (аланина), Rf (Y-) ≈ Rf (фенилаланина). Следовательно, компонент Х – это аланин, а компонент Y – это фенилаланин.

2. Расскажите, как проводится качественный анализ смесей веществ методом ТСХ. Каков механизм разделения веществ в ТСХ?

Качественный анализ ТСХ:

7) Идентификация веществ по характерной окраске. Невидимые хроматограммы проявляют соответствующими реагентами. Как правило, групповыми. При обработке пластинки, например, парами йода четко проявляются непредельные соединения, при опрыскивании пластинки тиоцианатом кобальта амины образуют голубые пятна на розово-белом фоне. Некоторые вещества флуоресцируют под действием УФ-света.

8) Сравнение величины Rf с табличными данными (если они получены в тех же условиях опыта). Более надежно использовать значения Rf,отн.

9) Метод свидетелей (стандартных веществ) – самый надежный способ. Стандартное вещество в том же растворителе наносят на пластинку с анализируемой пробой и хроматографируют в тех же условиях.