Для проведения флуориметрического анализа используют приборы двух типов: фильтрационный флуориметр и спектрофлуориметр.

Фильтрационный флуориметр состоит из источника излучения, первичного фильтра длин волн, камеры для образца, вторичного фильтра длин волн и системы детектирования флуоресценции. Как правило, детектор помещен под углом 90^о к возбуждающему световому потоку. Геометрия прямого угла предусматривает детектирование только произведенного флуоресцентного сигнала. Однако детектор все-таки получает часть возбуждающего излучения в результате рассеивающих свойств самого раствора, а также из-за присутствия в растворе твердых частиц. Для устранения этого остаточного рассеяния используются спектральные фильтры. Первичный фильтр отбирает коротковолновое излучение, способное к возбуждению испытуемых образцов, вторичный фильтр пропускает флуоресценцию в длинноволновой области, но блокирует рассеянное возбуждение.

Детекторы флуориметров преобразуют оптический сигнал в электрический с помощью фотоумножителей разных типов. Каждый тип детектора имеет специальные характеристики: спектральная область максимальной чувствительности, степень усиления, соотношение сигнал/шум.

Спектрофлуориметры отличаются от фильтрационных флуориметров тем, что вместо спектральных фильтров в них используются монохроматоры типа призмы или решетки. Эти приборы более предпочтительны для аналитических целей. В спектрофлуориметрах монохроматоры снабжены щелями. Чем уже щель, тем выше разрешение и спектральная чистота, но меньше чувствительность. Выбор размера щели определяется разделением между длинами волн возбуждающего и испускаемого излучения и необходимым уровнем чувствительности.

принципиальная схема которых приведена на рисунке.

Излучение от источника (1) проходит через отверстие в диафрагме (2), первичный светофильтр (3), кварцевую линзу (4) и попадает в анализируемый раствор в пробирке (5). Флуоресцентное излучение раствора собирается 274 кварцевыми линзами (6), проходит через вторичные светофильтры (7) и попадает на фотоэлементы (8). Фотоэлемент преобразует световую энергию в электрический ток, который усиливается и регистрируется микроамперметром. Показания микроамперметра прямо пропорциональны интенсивности флуоресцентного излучения и концентрации флуоресцирующего вещества в растворе.

 

 

16. Интенсивность излучения анализируемого раствора рибофлавина равна 43. Рассчитайте концентрацию этого раствора (в мкг/100 мл) и массу рибофлавина в 25 мл, если интенсивность излучения стандартного раствора рибофлавина, имеющего концентрацию 0,050 мкг/мл, равна 50.

На чем основан количественный анализ в методе флуориметрии? Какие методы применяют для расчета концентрации веществ?

В основе качественного люминесцентного метода анализа лежит з ависимость характера свечения от природы люминесцирующего вещества.

В основе количественного люминесцентного метода анализа лежит зависимость интенсивности люминесценции (свечения, вторичной эмиссии) от концентрации анализируемого вещества в растворе.

В определенном интервале концентраций флуоресцирующего вещества и при постоянных условиях эксперимента интенсивность люминесценции линейно зависит от концентрации этого вещества в растворе:

Ilm(Х) = к × с(Х)

где Ilm(Х) – интенсивность люминесценции раствора анализируемого вещества Х;

к – коэффициент пропорциональности, который при проведении эксперимента на данном приборе и неизменных условиях является величиной постоянной;

c(Х) – концентрация вещества в анализируемом растворе; измеряется обычно в мкг/мл.