Количество эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов в крови у взрослых здоровых животных

Животные

Эритроциты, млн мкл или  л

Лейкоциты, тыс мкл, или

Тромбоциты ТЫС МКЛ, ИЛИ  л

Крупный рогатый скот Овцы

Козы Лошади Свиньи Собаки Куры

при недостатке белков, железа, витамина      инфекционных болезнях (инфекционная анемия лошадей и                                             интоксикациях (вследствие длительных    и  септических  процес- сов), отравлениях гемолитическими ядами, инвазионных болез- нях, пироплазмидозах, лейкозах, злокачественных новообразо- ваниях, обильных кровопотерях.

Повышение числа лейкоцитов в крови (лейкоцитоз) может быть:  при беременности (незадолго до ро- дов и сразу после них), у новорожденных (в первые дни после рождения), после приема корма (пищеварительный лейкоцитоз выявляют у животных с однокамерным желудком, а у животных с многокамерным желудком, где процесс пищеварения носит непрерывный характер, его практически нет),                  после тяжелой физической нагрузки         лейкоцитоз);                 медикаментоз- после  парентерального  введения  животным белковых препаратов, вакцин, сывороток, алкалоидов, жаропонижающих, адреналина, эфирных масел;          при лихорадоч-

но-воспалительных процессах, инфекциях, лейкозах.

Снижение числа лейкоцитов (лейкопению) наблюдают при некоторых вирусных болезнях                                       (чума свиней, инфекционный энцефаломиелит лошадей, повальное воспаление легких), саль- телят, стахиботриотоксикозе, истощении защитных

сил организма, лучевой болезни.

Увеличение количества кровяных пластинок в крови (тром-   встречается при мыте, воспалении легких, плеврите, саркоме, миоглобинурии.

Уменьшение количества тромбоцитов в крови   пения,   происходит при большинстве остро проте- кающих инфекционных болезней,   геморрагических диатезах (кровопятнистая болезнь,  стахиботриотоксикозе,  лейкозах (в клиническую  стадию  болез- ни), лучевой       болезни, воспалении            пироплазмозе и т. д.

194

Заняти е 32  ФИКСАЦИЯ И ОКРАСКА

МАЗКОВ КРОВИ

Цель занятия. Овладеть                            предметных стекол; при- навыки по приготовлению, фиксации и окраске мазков крови.

Материальное обеспечение. Предметные стекла, шлифованные предмет- стекла, приборы для массовой  окраски    выпарительные чашки, стеклянные рамки, глазные  пипетки;                                  смесь этанола с  этило-

вым эфиром, гематоксилин,   раствор гидрокарбоната натрия; раствор уксусной кислоты, фабричный   краски дистиллированная

Приготовление мазков. Мазки лучше готовить  из  свежей,   крови. Из цитратной и оксалатной крови мазки можно приготовить спустя 6 ч после взятия ее, а из

24 ч. Мазки крови готовят на предметных стеклах.

п р е д м е т н  ы х                 еще  не бывшие в употреблении, промывают в водопроводной, затем в дистиллированной воде, высушивают и закладывают в банку с притертой крышкой в смесь равных количеств этилового эфи- ра и этилового спирта (смесь Никифорова). Перед работой стекла извлекают пинцетом,   При необходимости под- готовленные таким образом стекла складывают в пакеты, заво- рачивают в бумагу и закладывают на хранение в полиэтилено- вые мешочки, которые хорошо завязывают.

Бывшие в употреблении предметные стекла (с мазками  кро- ви)  для удаления кедрового  масла  протирают                                                   или керосином и моют щеткой в теплой мыльной воде.  Затем  стек- ла выдерживают 24 ч в хромовой (к 5 л  серной кислоты добавляют при помешивании 500 г бихромата калия, растертого до состояния мелкого порошка) или 12 ч в   растворе натрия (едкой щелочи или стирального по- рошка) с последующим кипячением в том же растворе  в тече- ние   мин. После этого стекла промывают 12 раз водопро- водной водой и 4 раза дистиллированной  водой,  просушивают и закладывают в смесь равных количеств спирта и  эфира. Через 24 ч стекла протирают полотенцем и хранят в полиэтиленовом

Техник а приготовлени я                       Предметное стекло помещают   между большим     и         указательным   паль- цами левой руки. Отступя на 1 см от края  стекла,  лежащего к указательному пальцу, наносят небольшую (диаметром

мм) каплю крови. Поверхностью предметного стекла каса- ются капли крови на месте ее появления после прокола кожи. При изготовлении мазков из   взятой в пробирки, каплю ее наносят с помощью глазной или пастеровской пипетки или    пробки. Затем правой рукой устанавливают вблизи  от

195

Рис 66 Приготовление мазка крови

 

капли крови шлифованное стекло под углом   и осторож- но продвигают его до соприкосновения края стекла с каплей крови (рис 66) После этого, плавно и не очень быстро, продви- гая справа налево шлифованное стекло по предметному, делают мазок

Мазок должен начинаться на   см от края предметного стекла и заканчиваться в см от другого его края, состав- ляя примерно   длины  стекла Мазок должен  быть  уже предметного стекла, с боков на стекле должны оставаться сво- бодные поля шириной около 1 см Мазок не должен иметь пере- рывов, пустот, на всем протяжении должен быть одинаковым толщине (рис

Хорошие мазки получаются при подогревании предметных стекол на резиновой грелке с теплой водой   на элек- трообогревательном столике  к микроскопу, на стерилизаторе с горячей водой, закрытом крышкой, на этих же приспособле- ниях можно высушить изготовленные мазки

В холодное время необходимо предупреждать

паров воды на мазках крови, что может вызвать ее гемолиз На высушенном мазке в начальной его части простым ка-

рандашом или иглой от шприца пишут номер животного  порядковый номер записи исследуемых    и дату взя- тия крови

Приготовить мазки можно  обычными писчими

 С. Кондратьев). Для этого на предметном стекле  пером»

 

 

Рис 67 Мазки крови

1 — приготовленный  на  плохо        обезжиренном     стекле   2 — короткий           неравномерный                                    толстый                                 правильно

 

196

которое предварительно погружают в пробирку с кровью, без нажима проводят поперечные или продольные мазки-штрихи Фиксация мазков. Мазки крови в течение  2 дн после изго-

товления необходимо зафиксировать или окрасить Нефиксиро ванные мазки через месяц теряют способность правильно окра- шиваться

Для фиксации мазки погружают в метиловый слирт

этиловый спирт (30   этиловый спирт и этиловый эфир по ровну (30 мин) или денатурированный спирт (30 мин). Мазки помещают в кюветы с фиксатором и закрывают крышкой Они не должны соприкасаться друг с другом После фиксации мазки высушивают на воздухе

Окраска мазков. Качество окраски мазков зависит от мно- гих факторов, в том числе и от рН воды, применяемой для раз- ведения красок

Дистиллированная вода для разведения красок и промыва- ния мазков должна иметь нейтральную реакцию Для определе ния реакции воды с помощью гематоксилина в два химических стаканчика берут по 100 мл дистиллированной воды В один из них прибавляют несколько крупинок гематоксилина, а другой остается в  качестве контроля Появление слабой розово-фиоле- товой окраски в течение   мин указывает на нейтральную реакцию воды Если окрашивание произошло раньше 1 мин, то она  щелочная,                  а  если  позже              5         кислая.   Определение реакции воды с           рН метра проводят по тем же прави- лам, что и жидкостей организма (желудочного сока, мочи и др  )

Для нейтрализации воды с кислой реакцией по каплям до-

 

 

Рис 68 Ванна для окраски мазка крови на предметном стекле

 

 

197

бавляют 1    раствор гидрокарбоната натрия, пока розо- во-фиолетовая окраска не  начнет появляться  в течение 1 —

5 мин. Для нейтрализации щелочной воды добавляют 1 %-ный раствор уксусной кислоты.

По методу   фиксированные препараты кладут мазком вниз на стеклянный мостик в кювете и наливают под них рабочий раствор краски (к 1 мл дистиллированной воды добавляют две капли фабричного раствора краски Рома-

  Окрашивание продолжается   мин, что зависит от окружающей температуры (чем холоднее, тем про- должительнее  окраска) и качества красителя. В  заключение мазки промывают дистиллированной водой и сушат на воздухе. Для окраски мазков можно пользоваться специальным при-

бором (рис. 68).

Хорошо окрашенные мазки розово-фиолетового цвета, недо-  розовато-красноватого, а        тем- но-фиолетового.

 

Заняти е 33   ОКРАШЕННЫХ МАЗКОВ,

ВЫВЕДЕНИЕ

ФОРМУЛЫ)

Цель занятия. Научиться                                   клетки крови по окрашенным мазкам; овладеть техникой  выведения

Материальное обеспечение. Микроскопы,                                                                      счетчики, стеклянные палочки, иммерсионное масло, бензин,  вата.

Окрашенные мазки крови исследуют под микроскопом с им- мерсией, для чего используют объектив    и иммерсионное масло, которое после исследования удаляют с препарата бензи- ном, керосином, бензолом или хлороформом.

В окрашенных мазках крови определяют величину, форму, характер окраски и структуру ядра, цитоплазмы и включений в нее, а также соотношение между различными формами от- дельных видов клеток  крови.

Эритроциты. У млекопитающих эритроциты в мазках крови круглой формы, не содержат ядер (лишь у верблюдов и лам они овальной    у птиц эритроциты овальной формы и с ядрами. Они окрашиваются кислыми красками  в розовый цвет, причем в центральной части более бледно. Диа- метр эритроцитов составляет (мкм): у крупного рогатого

 

свиней             собак            у Изменение величины эритроцитов

зуется тем, что в мазках наряду с клетками нормальных разме-

198

ров, которые принято называть               встречаются дру- по размеру эритроциты:

или очень  крупные                 Это  со-

стояние наблюдают при анемиях и функциональной недостаточ- ности костного мозга.

Изменение формы эритроцитов   обнаружи-

при многих патологических процессах и характеризуется тем, что некоторые из этих клеток имеют иную форму, и соот- ветственно их называют: овальные

или неопределенной

Пойкилоцитоз регистрируют при анемиях тяжелых сеп- тических заболеваниях, сопровождающихся дегенерацией эри- троцитов. Пойкилоцитоз встречается и у здоровых животных, например у молодняка коз, морских свинок. Изменение формы эритроцитов может быть также вследствие неправильного изго- товления мазков.

Изменение окраски эритроцитов   может быть обусловлено многими причинами. В норме эритроциты в мазке розового цвета, в центре  менее интенсивно окрашены (орто-    Если в  эритроците  содержится     меньше обычного гемоглобина, то он  окрашивается  бледнее                  (олигохромия   или  Указанное изменение эритроцитов происходит при анемиях. В тех случаях, когда в эритроците много гемоглобина, он окрашивается интенсивнее обычного и не имеет просветле- ния в центре или что наблюдают при гемолитической анемии. Иногда эритроциты окрашиваются кислыми и  основными красками                                          или что  свидетельствует  о                       эритроцитов. В случае полихромазии эритроциты синевато-розового, светло- синего, темно-синего, сероватого или слабо-фиолетового цвета. Полихромазию отмечают в норме у мелких животных и при усиленной регенерации крови. При специальной окраске (супра- витальная окраска крови бриллиантовым    синим) в молодых, недозревших   обнаруживают зернисто- нитчатую субстанцию; такие клетки обозначают как   или                       В норме ретикулоцитов немного (десятые доли процента при подсчете на 1000 нормальных эри- троцитов), их число увеличивается при гемолитических ане- миях, острых кровопотерях и т. д.

Кроме описанных изменений, иногда в эритроцитах обнару- живают различные включения, характеристика которых приво- дится ниже.

Круглые или овальные образования ярко-красного цвета, представляющие собой остатки ядер (тельца   могут быть при анемиях.

Красные с фиолетовым оттенком образования в виде овала,

восьмерки, кольца, двойной или тройной петли, которые также представляют собой остатки оболочки ядра (кольца  встречают главным образом в    эритроци- тах при тяжело протекающих анемиях.

Зернышки темно-синего цвета                                     на- ходят при интоксикациях, вторичных анемиях, сепсисе. Для вы- явления базофильной пунктации фиксированные в метиловом спирте мазки крови окрашивают    раствором  метиле- нового синего.

Ядерные эритроциты  и

  в норме регистрируют в крови у мел- ких животных (кроликов, кошек,    морских свинок,        собак); у других видов животных их присутствие указывает на  усиле- ние омоложения крови  вследствие  сильного распада эритро-

Тромбоциты. В мазках крови   или  кровяные пла- стинки, овальной, круглой или угловатой формы. Перифериче- ская                       их      окрашивается в голубой

цвет, а центральная                          состоит из зернышек,  в фиолетовый или красно-фиолетовый цвет.  Обыч- но тромбоциты в мазках лежат группами, образуя агрегаты из пластинок и более, что указывает на хорошую их агглюти-

Диаметр тромбоцитов составляет   мкм. У птиц тромбоциты веретенообразной формы и содержат овальные ядра.

К наиболее частым изменениям кровяных пластинок, выяв- в окрашенных мазках, относят наличие тромбоцитов,  лежащих не кучками, как обычно, а отдельно, что указывает на плохую их агглютинационную способность; появление больших, гигантских       кровяных    пластинок; вакуолизацию            гиаломера,

уменьшение или отсутствие грануломера и др.

Лейкоциты. В зависимости от свойств цитоплазмы и харак- тера зернистости лейкоциты подразделяют  на

(зернистые) —    и                  и  аграну- (незернистые) — лимфоциты и моноциты.

 Круглой или овальной формы, величиной мкм. У зрелых форм ядро полиморфное, плохо заметное,

с неясными очертаниями, слабо-фиолетовое с бордовым оттен- ком или фиолетовое. Цитоплазма слабо окрашена в розовый или бледно-фиолетовый цвет  вследствие вещества  гра- нул, которые разрушаются при окраске мазка. Гранулы круг- лой или расплывчатой формы, темно-фиолетового, темно-синего или черного цвета, разрушаются обычно с образованием вакуолей.

Эозинофил ы (Э). Круглой формы, величиной  мкм. Цитоплазма слабо-голубая, содержит розово-красную или  ярко-

200

красную зернистость круглой или слегка овальной формы. Характер ядра зависит  от  степени                                                                          клетки:  у  зрелых форм оно  сегментированное,  у          округлое;  фиолето- вого цвета. У лошадей, крупного рогатого скота и свиней ядро чаще состоит из двух сегментов,  а у коз и  из трех. Наиболее крупные гранулы у лошадей и собак. При растворе-  нии гранул на их месте образуются вакуоли; в раздавленных клетках гранулы лежат свободно,  «рассыпавшись».

 (Н). Круглой  формы,  размером  14,5 мкм. По степени  зрелости  различают                                                                         юные

 и сегментоядерные нейтро-

 

имеют неравномерно окрашенное круглое или овальное ядро, фиолетовое, расположенное часто эксцент- рически. Цитоплазма миелоцитов бледно-синеватого или розо- вого цвета, в ней содержится мелкая розовая зернистость. В крови здоровых животных миелоциты не встречаются.

Юные   имеют бобовидное или колбасовид- ное неравномерно окрашенное фиолетовое ядро (светлые участ- ки перемежаются с темными). Цитоплазма юных нейтрофилов розовая, иногда плохо прокрашена, содержит мелкую, нежную розовую зернистость. У взрослых здоровых животных юных нейтрофилов в периферической крови, как правило, не обна- руживают.

Палочкоядерные (П) нейтрофилы относят  к зрелым фор- мам, у здоровых животных они постоянно присутствуют в кро- ви. Ядро вытянуто наподобие палочки, которая может быть изо- гнута в виде подковы, дужки, латинской буквы   на концах   вздуто. В отдельных местах на ядре находятся не- большие перехваты; оно неравномерно окрашено в темно-фио- летовый цвет. Цитоплазма   нейтрофилов розо- вая с мелкой розоватой зернистостью (часто плохо

Сегментоядерные (С) нейтрофилы отличают от палочкоядер- ных лишь характером ядра, которое состоит из   сегментов, между которыми имеются тонкие перемычки. Ядро темно-фио- летового цвета. Это зрелые элементы  крови.

По величине их разделяют на малые средние мкм) и большие  мкм). Они

имеют круглое темно-фиолетовое ядро. Цитоплазма лимфоци- тов слабо-голубого цвета, вокруг ядра есть зона просветления (перинуклеарная зона); у малых лимфоцитов она может быть незначительна   иногда в  цито-

плазме  содержатся                        зерна  ярко-красного  цвета. здоровых животных в периферической крови преобладают ма- лые лимфоциты, а средние и большие     составляют  не  более    в отдельных случаях они  могут                                   даже отсутствовать.

Моноцит ы (М). Самые крупные клетки  крови   мкм) округлой или нередко неправильной фор- мы. Ядро  моноцитов  разнообразной     в виде

бабочки, трилистника,  бобовидное  с                                но  мо-

жет быть сильнолопастным и                                      оно  не- равномерно окрашивается в слабо-фиолетовый цвет с фиолетовыми  пятнами             Цитоплазма  моноцитов серо-дымчатая,  серо-синеватая, голубовато-серая                         со  светлым,   оттенком, вблизи от ядра находится мелкая пыле- видная зернистость.

Клетки,  редко встречающиеся в периферической крови. В периферической крови присутствуют различные клетки, кото- рые чаще появляются при патологических  состояниях.

    Это клетки, имеющие два ядра и находящиеся на некотором расстоянии или касаю- щиеся друг друга. В норме они встречаются редко, при лимфо- лейкозе число их возрастает.

Ридеровски е    л и м ф о ц и т о в к л е т к и    Лимфоциты с рассеченным на одном или двух краях ядром. Клетки Ридера иногда обнаруживают у здоровых живот- ных, число этих клеток увеличивается при лимфолейкозе.

 с м и т о з о м           Лимфоциты, ядро ко- торых состоит из отдельных глыбок или радиально располо- женных палочек, окрашенных в темно-фиолетовый цвет. Такие лимфоциты иногда выявляют при лимфолейкозе.

 Неправильной формы образования красно-фиолетового цвета, которые являются остат- ками разрушенных лейкоцитов. Часто их встречают при лимфо- лейкозе.

Плазматические клетки, клетки раздраже- ния, клетки     различной величины клетки неправильной или овальной  формы.  Цитоплазма нередко  содер- жит вакуоли, зернистость отсутствует, имеется перинуклеарная зона. Ядро округлое или овальное, лежит эксцентрично, фиоле- тово-красного цвета; хроматин расположен как спицы в колесе или в виде множества пятнышек. В  норме                   в  крови присутствуют редко, они появляются при некоторых инфекцион- ных болезнях, сепсисе, циррозе печени, фибринозной пневмонии и т. д.

Малые лимфоцит- ретикулярные    это небольшие клетки, похожие на малые и средние лимфоциты. Ядро округлое или овальное, иног- да в нем видны синие ядрышки. Цитоплазма расположена во- круг ядра в виде узкого ободка, биполярно вытянута или от- ростчатая, голубого или синего цвета. Находят эти клетки при

лейкозах. 202

  клетки эритробластиче- ского  ряда.  круглые клетки размером   мкм с крупным, круглым или овальным ядром темного красно-фио- летового цвета и резко базофильной (синей) цитоплазмой. В ядре содержится несколько ядрышек синего цвета, нити бази- хроматина расположены равномерно, образуя  сетку.

  Клетки величиной  мкм, округлые или овальные. Базихроматин ядра состоит из более грубых ни- тей, чем у эритробластов, видны большие участки оксихрома- тина.  В  ядре нет. Цитоплазма синего  цвета.

Клетки размером  16 мкм, круглые или овальные. Ядро компактное с грубыми    хроматина, которые в некоторых клетках  располо- жены радиально, ядрышки отсутствуют; иногда могут быть зуб- чатые или звездчатые края ядра (фигуры   Цитоплазма базофильная

 Имеют ядро с лучеобразным расположением хроматина (колесовидная струк- тура).  Цитоплазма серо-голубая или светло-серая.

    Клетки  размером

12 мкм, содержат резко компактное ядро (вследствие пикноза   цитоплазма бледно-розовая

Эритробласты и разновидности нормоцитов как ядерные фор- мы эритроцитарного ростка в норме находятся только в кост- ном а в периферической крови появляются при патоло- гических состояниях.

 Родоначальные клетки мегакарио- цитарного  ростка,  крупные   мкм), круглые.  Ядро  круг- лое, грубопетлистое, содержит                   Цитоплазма  базофиль- ная (голубая или без зернистости.

Более крупные клетки, чем мега- мкм). Ядро многолопастное, сегментиро-

ванное.  Цитоплазма базофильная    зернистости не  содержит.

Очень большого размера клетки (до мкм)  с многолопастным, сегментированным ядром. Цито-

плазма светло-голубая с многочисленной мелкой зернистостью красноватого, светло-фиолетового или фиолетового цвета. По периферии цитоплазмы зернистость расположена в виде кучек с   и отделением небольших групп тромбоци- тов. Мегакариоциты в периферической крови встречают при не- которых болезнях.

Родоначальные клетки лимфоцитов. Они круглые, крупные мкм). Цитоплазма серо-голубая или синяя с выраженной перинуклеарной зоной. Ядро круглое или овальное, фиолетового цвета, занимает большую часть  клетки,

203

структура хроматина мелкосетчатая, содержит ядрышки. Лим- иногда обнаруживают при лимфолейкозе.

Промежуточная стадия между лимфо- бластами и зрелыми лимфоцитами. По величине мало  отлича- ются от   Ядро округлое, фиолетового цвета, имеет рыхлую хроматиновую структуру, однако встречаются и плот- ные   иногда присутствуют остатки ядрышек. Цитоплаз- ма бледно-голубая (при широком пояске ее) или синеватая (при узком пояске) с   иногда содержит азуро-   зерна. Пролимфоциты выявляют при  лимфаденозе. М и е л о б л а с т                                                      клетки гранулоцитов. Это большие  клетки                     у которых цитоплазма окружает ядро  нешироким  пояском,                  иногда с  небольшими  выступами. Она синеватого  или  бледно-голубого                   без  зернистости. Ядро округлое, крупное, занимает большую часть клетки, имеет нежно-сетчатую  структуру хроматина и  содержит  несколько ядрышек светло-синего или светло-фиолетового цвета.  Миело-

обнаруживают при миелолейкозе.

Более зрелые клетки, чем

они круглой или овальной формы, размером          мкм. Имеют широкий поясок базофильной цитоплазмы с различными оттен- ками, в которой видна немногочисленная зернистость типа азу- рофильной; у                                          и                   промиелоцитов она неконтрастная,  а  у        отчетливая.  Ядро  распо- ложено эксцентрично, округлое, овальное или бобовидное, более сеточка базихроматина плохо заметна или не вид-

на, ядрышки мельче и менее отчетливы, чем у миелобластов. Промиелоциты бывают при миелозе.

 Родоначальные клетки моноцитарного ря- да. Размер их 20 мкм и более. Ядро большое,  круглое,  фиоле- товое, рыхлое, имеет волокнистую структуру, содержит  нук-

Цитоплазма широким ободком окружает ядро, окрашена в сине-голубой или голубой цвет, зернистости нет. Монобласты могут встречаться при распаде злокачественных новообразова- ний,  тяжело  протекающих                                               инфекционных  болезнях.

 Ядро округлое или бобовидное, более грубой структуры, чем у монобластов, не содержит нуклеол (могут быть их остатки). Цитоплазма серо-голубая, иногда имеет мелкую азурофильную зернистость.

                     Это клетки   костного мозга и других кроветворных органов. Клетки крупные (диа- метр   мкм), круглые, овальные или полигональные. Ядро круглое или неправильной формы, включает  ядрышка голу- бого цвета, хроматин нежно-петлистого, нежно-губчатого строе- ния. Широкая цитоплазма имеет неправильные контуры, окра- шена в нежно-голубой цвет    иногда  содер-

204

мелкую азурофильную зернистость. Ретикулярные клетки при ретикулезах.

Атипичны е                  Опухолевые,  

— чаще всего             неопределенной,  нередко  причуд- ливой формы, с                сильно изрезанным ядром. Встречают их при ретикулезах.