Цветового показателя и среднего содержания

ГЕМОГЛОБИНА В ОДНОМ ЭРИТРОЦИТЕ

Цель занятия. Овладеть методикой    количества

в крови, научиться вычислять цветовой показатель; приобрести навыки диаг- ностической оценки данных анализов.

Материальное  обеспечение.        мерные

на 1 л, градуированные пипетки на 5 мл, капиллярные  пипетки  на (0,02   пробирки;    (с     0,1 н. раствор соля- кислоты, трансформирующий раствор (0,5 мл                                                        200 мг

         1  г гидрокарбоната                 до 1  л  дистиллиро- ванной  воды,  стандартный гемиглобинцианида венгерской  фирмы

  (концентрация  59,75            мл, что соответствует 15  г  гемоглобина на 100 мл крови, или 150  г/л).

Определение содержания гемоглобина в крови. Применяют и    методы.

мето д                 В  градуиро-

ванную пробирку гемометра       (рис.  60) вносят  глазной

186

Рис. 60 Схема гемометра ГС-3:

— корпус стойка; 2 — крышка; 3 — два винта;

4 — две запаянные пробирки со стандартной жидко- стью- 5 — градуированная пробирка, 6 — матовое

и

'                        стекло

 

пипеткой до метки «2» 0,1 н. раствор                 соляной кислоты. Капиллярной пипет-

кой набирают 20 мкл (0,02 мл) кро- ви, кончик пипетки вытирают ватой и кровь осторожно выдувают на дно пробирки в раствор кислоты, промы- вая им   раза пипетку для удале- ния остатков крови. Перемешивают и оставляют стоять на 5 мин (при ис- следовании крови   на  15 мин). Вследствие образования солянокис- лого гематина (хлоргемина) раствор в пробирке приобретает коричневую

окраску. Добавляют по       дис-

тиллированную воду, помешивая стек-                                '  ' лянной   палочкой до тех пор,           пока

окраска жидкости в пробирке не сравняется с цветом стандарт- ных пробирок. Количество гемоглобина в граммах на 100 мл крови устанавливают по делению шкалы, которое совпадает с уровнем жидкости в пробирке. Если найденное по шкале гемометра количество гемоглобина умножить на коэффи- циент 10, то можно определить концентрацию гемоглобина

мето д (мето д М. Л. Пи-

м е н о в о й и  Г. В.                  Для исследования используют опытную, холостую и стандартную пробы.

  пробу ставят следующим образом. К 5 мл транс- формирующего раствора добавляют 20 мкл (0,02 мл) крови (разведение в 251 раз), тщательно размешивают, оставляют на

10 мин и затем колориметрируют при зеленом светофильтре (длина волны   нм) в кювете с толщиной                                             слоя 10 мм против холостой пробы. В качестве последней берут трансфор- мирующий раствор. Стандартная       это стандартный рас- твор гемиглобинцианида, который исследуют  без  разведения трансформирующим раствором так же, как и опытную пробу. Содержание гемоглобина   г/100 мл)                 по фор-

муле

F                           '

где    — оптическая плотность  опытной пробы;        — оптическая  плотность пробы;              в стандартном  рас-

187

 (59,75           мл); К — коэффициент                 крови (251); 0,001 — коэффициент для                 (для    в         полученное по формуле количество гемоглобина умножают на

У здоровых животных содержание гемоглобина крови со- ставляет        (г/100      у крупного рогатого скота —

овец —                                                лошадей —           свиней — собак—     у  кур

Содержание гемоглобина находится  в пределах  у  круп- ного рогатого скота —            овец —                                                                                                       коз —

лошадей —  свиней —                  собак —                  у кур —

Увеличение количества гемоглобина в  крови   наблюдают при поносах, рвоте, потливости, образовании экссудатов и транссудатов, миоглобинурии, эмфиземе легких. Уменьшение содержания гемоглобина в крови  встречают при анемиях различной этиологии.

Определение цветового показателя. При заболеваниях может изменяться насыщенность эритроцитов гемоглобином, что учи- тывают определением цветового показателя   который вы- числяют по формуле

 

где  — среднее количество гемоглобина в норме (г/100 мл, или г/л); количество гемоглобина у исследуемого животного (г/100 мл, или г/л);   количество    в норме  (млн/мкл,  или            EZ — ство эритроцитов у     животного   или

Цветовой показатель крови у здоровых животн у крупного рогатого   овец —

лошадей                        свиней

1,2; у

Отклонение цветового показателя на  % и более от нормы свидетельствует о    состава крови, что учитывают при дифференциальной диагностике  анемий.

Повышение цветового показателя   регистри- руют при гемолитических анемиях. Понижение цветового пока- зателя   отмечают при    ане- миях.

 

Заняти е 31

ПОДСЧЕТ    КЛЕТОК КРОВИ

Цель занятия. Овладеть методикой подсчета количества эритроцитов, лей- коцитов и тромбоцитов.

Материальное обеспечение.                        счетные камеры Горяева, шлифо- ванные покровные стекла,  для                     и

188

торные  пробирки  с                 пипетки, градуированные на 1 и 5 мл;

Сали;                                                        натрия, жидкость Тюрка,

раствор трилона Б  (50  г                   50  мл                       раствора  формаль- дегида,  450  мл                              раствор              (90  г  хлорида натрия, химически 5 г трилона Б, 15 мл                раствора  ного формальдегида, 10 л дистиллированной воды);                                 раствор сапонина.

 

Подсчет количества эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов. Для подсчета количества указанных клеток крови используют счетные камеры и электронно-счетные приборы. Число эритро- цитов можно определить также с помощью   и фотоэлектроколориметров.

Подсче т                              л е й к о ц и т о в  и  цито в в  счетно й               При подсчете  числа  клеток крови применяют различные счетные камеры (Горяева, Пред- теченского,    Бюркера,  бауера, Тюрка и др.). Наибольшее распространение получила счетная камера Горяева.

Счетная         это толстое предметное стекло с четырьмя поперечными              между которыми образуются  три по- перечные полосы. Средняя полоса на 0,1 мм тоньше боковых и разделена продольным желобком на две равные половины, на каждой из которых выгравирована сетка Горяева (рис. 61). Если на боковые полоски наложить и притереть шлифованное покровное стекло   появления радужных   то над сред- ней  полоской  образуется пространство

той 1/10 мм.

Сетка Горяева

9      (3X3  мм),

имеет площадь на ней  нанесены

225 больших квадратов

25 из которых разделены

(15X15),

на 16 ма-

леньких квадратиков    Пло- щадь маленького квадратика состав- ляет 1/400                            мм),  а

объем камеры над                                       (1/400   мм).

При               эритроцитов кровь

разводят                    разбавите-

лем — или в меланжере, или смесителе (рис. 62) для эритроцитов; чаще прак- тикуется пробирочный метод  по Н.    Николаеву (1954). Если кровь

 

Рис 61 Счетная камера Горяева

1 —   сверху, 2 — вид сбоку, 3 — сетка  Горяева,

— малый и 5 — большой квадраты

 

189»

разводят в меланжере,  то в капилляр его набирают кровь метки «0,5», кончик капилляра протирают ваткой и затем в смеситель до                    метки          «101» разбавляющую жид- кость   или                                 раствор         хлористого  натрия;

5           раствор  цитрата натрия; раствор  йода: йод  кри- 0,3  г, калия      0,4  г, натрия      цит-

 2  г,  дистиллированная             мл).  Смеситель с обоих концов закрывают большим и средним пальцами руки и встряхивают                            мин. В данном случае получается разведение крови                   Из меланжера вначале удаляют на ватку первые три капли разведенной крови, а последующую каплю наносят на среднюю полоску счетной камеры вблизи от края притертого покровного стекла. Капля разведенной крови попадает под стек- ло в          пространство и заполняет камеру.

Если кровь разводят в пробирке, то в пробирку Флоринского берут 4 мл   или   раствора хлористого нат- рия, вносят 0,02 мл крови пипеткой от гемометра Сали (разве- дение крови 1   и смешивают. Пастеровской пипеткой наби- рают разбавленную кровь и заряжают счетную камеру. Выждав   мин, подсчитывают эритроциты под микроскопом при объекте   и окуляре   в левом верхнем большом квадрате (разделенном на 16 маленьких   а затем еще в че- тырех больших  квадратах по диагонали сетки (всего в  пяти

квадратах).

Подсчет клеток в большом квадрате начинают с левого верх-

него маленького квадратика, а да- лее переходят во второй, третий и четвертый квадратики (рис. 63). После верхнего ряда считают эрит- роциты в нижерасположенном  ряду,

Рис. 62 Смесители              Рис. 63. Подсчет эритроцитов в боль- J - для эритроцитов; 2 -   для лейкоцитов  шом квадрате счетной камеры Горяе-

ва

начиная с первого правого квадратика, и т. д. Эритроциты внут- ри маленьких квадратиков, а также на верхней и левой сторонах большого квадрата считают, а эритроциты на нижней и правой сторонах не учитывают.

Количество эритроцитов (X, в 1 мл крови) определяют по

формуле

ВГ                                      80

где А — число эритроцитов, подсчитанное в пяти больших квадратах (напри- мер,      Б —  разведения  крови  (200);                         маленьких квадратиков в пяти  больших квадратах             Г — счетной каме- ры маленьким квадратиком  (3/4000

Число эритроцитов в  1  л крови вычисляют по формуле

При подсчете лейкоцитов в меланжер для лейкоцитов наса- сывают кровь до метки «0,5», а затем до метки «11» набирают жидкость Тюрка (3   раствор уксусной  мл,

1  %-ный  раствор генциана фиолетового или метиленового сине- 1 мл). Встряхивают     2 мин. Уксусная кислота разрушает эритроциты, а генциан  фиолетовый  (или синий) окрашивает лейкоциты. Получают разведение крови 1                                                          Пер- вые три капли выпускают на ватку (или фильтровальную бу-

  а следующей каплей заполняют счетную камеру.

Для разведения крови в пробирке берут 0,4 мл жидкости Тюрка и 0,02 мл крови пипеткой от гемометра Сали (разведение крови  1      Пастеровской берут смесь и заряжают счетную камеру. Через   мин после оседания лейкоцитов на дно камеры начинают подсчет клеток, который проводят под микроскопом при объективе Х8 и окуляре   в 100 больших квадратах, не имеющих дополнительных линий и расположен- ных по сетке Горяева группами по четыре  квадрата.

Количество лейкоцитов (X, в 1 мкл крови) определяют по формуле

 

ВГ                           1600           2

где Л — число  лейкоцитов,                       в 100 больших квадратах  (например,     Б — степень разведения крови (20); В — количество маленьких квадра- тиков в 100 больших квадратах      Г — объем счетной камеры    маленьким квадратикам (1/4000  мкл).

Для              числа лейкоцитов в 1 л крови используют формулу

Для  подсчета тромбоцитов (по Хауке)  в шприц емкостью

1 мл берут 0,5 мл 1   раствора трилона Б и 0,5 мл веноз- ной крови, смешивают (разведение    и сразу переносят в силиконированную  пробирку, которую закрывают  пробкой.

-Кровь в пробирке до  подсчета  может                                  несколько часов.

Перед подсчетом кровь в пробирке смешивают, набирают в меланжер для лейкоцитов до метки «1», а затем до метки «11» насасывают 1    раствор оксалата аммония (разведение крови    Смешивают и меланжер оставляют на 20 мин (идет гемолиз   Меланжер встряхивают   мин, выпускают на ватку три капли  смеси, а следующей заряж.ают счетную камеру, которую ставят на 10 мин во влажную камеру (чашка Петри с влажной ваткой) для оседания тромбоцитов «а дно камеры. Тромбоциты подсчитывают в пяти больших квадра- тах, разделенных на 16 маленьких квадратиков, при объективе Х40, окуляре Х7 и синем светофильтре.

Число тромбоцитов (X, в 1 мкл крови) считают по формуле

ВГ                                  80

А —                 тромбоцитов,                          в  пяти больших  квадратах (крови             В —                       малень-

ких                     в пяти больших квадратах камеры над маленьким квадратиком (1/4000 мкл).

счетной

Число тромбоцитов в 1 л крови определяют по  формуле

Подсче т  эритроцито в       и лейкоцито в      с мощь ю                      счетчико в

В нашей стране используют приборы:  шведской  фирмы   типа       модели 101, 202, 302,  401;

французской фирмы                      Франсе С. А.» типа модели и         немецкий ЦГ2; венгерской  фирмы

типа                      отечественного производства типа а также                 ЦМК-2

(рис. 64,

Изменения количества клеток крови. Число эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов в крови у разных видов животных приведено в таблице 6.

Повышенное  содержание эритроцитов

 встречается сравнительно редко, что свя- зано с потерей организмом воды при обильном потении, поно- сах, образовании транссудатов и экссудатов  плевриты, перитониты, водянка грудной и брюшной полостей),     кишечника (механические       а также хронической альвеолярной эмфиземе  легких, при декомпенса- ции  сердца.

Уменьшенное содержание эритроцитов в крови

 регистрируют при анемиях, обусловлен- ных недостаточным или неполноценным кормлением (особенно

Рис. 64. Схема устройства кондуктометрического датчика:

— пробирка; 2 — микроотверстие; 3 — стакан с пробой; 4 — источник

5  и    электроды;     управляющий кран; 8 —

ник  разрежения;  9   расширение для ртути; 10, 11, 12 — контакты; 13 —

ный сосуд

 

Рис. 65. Кондуктометрический счетчик частиц «Целлоскоп> (модель 302)

 Заказ №  1227