Определение резервной щелочности и каротина в сыворотке крови

Цель занятия. Овладеть методиками определения резервной щелочности и каротина в         или сыворотке крови и научиться давать диагностическую   результатам анализов.

Материальное обеспечение.    бюретки (на 5 и 10 мл), градуированные пипетки (на 0,2, 1; 2; 5 и 10 мл), глазные пипетки, стеклянные палочки, сдвоенные колбы с общим объемам около 80   и от- верстиями диаметром 116, 18 или 20 мм по величине резиновых пробок №  16,

18 или 20 (новые пробки перед употреблением  кипятят  в           растворе гидроокиси калия, прополаскивают  несколько  раз                                                                                                                           а  затем дистиллированной         крови.

Реактивы для определения резервной щелочности: 0,1 н. раствор гидрооки- си натрия, 0,01 н.  раствор гидроокиси                     н. раствор серной кислоты, 0,01 н. раствор серной кислоты,      раствор серной кислоты,  спиртовойрастворфенолфталеина.

Реактивы для определения каротина:   этиловый спирт, петролей- эфир или бензин марки Б-70, основной стандартный раствор  калия (360 мг                                           калия,  дистиллированной до 500 мл), рабочий раствор         калия (5 мл основного раствора калия бихромата и 5  мл

дистиллированной

Определение резервной щелочности крови. Для определения показателей, характеризующих кислотно-щелочное равновесие, применяют метод Аструпа модифицированный  — Андерсеном (1963)  и                             определить рН, парциальное давление двуокиси углерода                             щелочной резерв  (способ- ность связывать       истинный бикарбонат, стандартный бикар- бонат, буферные основания и общее содержание двуокиси угле- рода плазмы. Состояние кислотно-щелочного равновесия оцени- вают по результатам определения щелочного резерва плазмы крови по Ван-Слайку или сыворотки (плазмы) по И. П. Кондра- хину. Сыворотку |(плазму) хранят под вазелиновым  маслом.

У здоровых животных щелочной резерв плазмы крови при установлении его по Ван-Слайку находится                                          в пределах

У крупного рогатого                                                         —

 

у кур —

Для определения резервной щелочности сыворотки крови по в одну  половину колбы    вносят 0,5 мл  сыворотки

(или плазмы) крови, причем выдувание остатков жидкости из пипетки не допускается; плотно закрывают пробкой. Во вторую половину колбы берут 2 мл 0,01 н. раствора гидроокиси натрия и закрывают пробкой. Затем открывают первую половину колбы и к находящейся там сыворотке крови добавляют 1 мл  раствора серной кислоты и быстро закрывают пробкой. Враща- тельными движениями тщательно смешивают сыворотку с кисло- той. За время прохождения реакции смешивание повторяют

4 раза.

В контрольную колбу вносят 2 мл 0,01 н. раствора гидроокиси натрия и плотно закрывают пробкой. Во вторую половину спа- ренной колбы берут 1 мл 5%-ного раствора серной кислоты и также закрывают пробкой. Перед закрытием отверстий колбы пробки увлажняют дистиллированной водой.

Для большой точности каждый образец сыворотки исследуют в двух спаренных колбах. Контрольный опыт ставят в трех сдво- енных  колбах.

Через   ч (допустимо до 12 ч) открывают колбы, в кото- рых находится раствор гидроокиси натрия, вносят одну каплю

1   раствора фенолфталеина, смешивают (появ- ляется красная окраска). Затем жидкость в колбе титруют 0,01 н. раствором серной кислоты до полного обесцвечивания, что происходит при рН 8. Титрование следует проводить осторожно и с одинаковой быстротой во всех пробах и контроле.

Расчет резервной щелочности   (X,                     проводят  по формуле    где      количество

0,01 н. раствора серной кислоты, израсходованное на титрование опытной пробы, мл; количество 0,01 н. раствора серной кис- лоты, израсходованное на титрование контрольной пробы, мл;        фактор пересчета 0,01 н. раствора серной кислоты на  при данной реакции;        коэффициент для перечисления взя- того для анализа количества сыворотки (плазмы) крови (0,5 мл) на 100 мл.

У крупного рогатого скота резервная щелочность сыворотки крови по  методике                составляет   а плазмы               %

При нарушениях кислотно-щелочного равновесия может раз- виться ацидоз (избыток кислот или недостаток оснований) или (избыток щелочных веществ). Если ацидоз или алкалоз

175

протекают без сдвигов рН, то их называют  со сдвигом        некомпенсированными Ацидоз и алкалоз могут быть газовыми (дыхательными)  и негазовыми (метаболически-

Газовый ацидоз возникает вследствие задержки в  угольной кислоты как результат гиповентиляции легких (брон- хиальная астма,    Газовый алкалоз наблюдают при выраженной гипервентиляции легких (перегревание организ- ма,

Метаболический алкалоз устанавливают при избыточном скоплении в организме оснований при рвоте (потеря соляной кис- лоты), фибринозной пневмонии, селикозе, перекорме сахарной свеклой, пироплазмозе и др Метаболический ацидоз развивается при скармливании животным кислых или закисших кормов, обильном кормлении концентратами, скудном кормлении, плохой вентиляции помещений, недостатке инсоляции и моциона, рахите и остеодистрофии, атониях преджелудков, бронхопневмониях, ли- хорадочно-воспалительных процессах, кетозах, послеродовом па- резе, диспепсиях, сердечно-сосудистой и дыхательной недостаточ- ности, лучевой болезни, нефритах, сахарном диабете, эклампсии и   т.  д.

Определение содержания каротина в сыворотке крови (по В. Ф.    и Л. А. Кудрявцевой). В пробирку  вносят

1 мл сыворотки крови и 3 мл   этилового спирта, тща- тельно смешивают стеклянной палочкой. Добавляют 6 мл петро- лейного эфира  (или бензина), энергично встряхивают не менее 2 мин и осторожно приливают по стенке пробирки 0,5 мл дистил- лированной воды, оставляют стоять до четкого разделения нической и водяной фаз. После этого осторожно  сливают

5 мл                    каротина и переносят в кювету.

в кюветах 1 см при синем  против петролейного эфира (бензина) Одновременно колоримет- рируют рабочий стандартный раствор бихромата  калия.

Содержание каротина   (X,    мл) находят по  формуле

 

Х =

Б

где   А —                  плотность пробы;   Б —                                     стаадартного раствора;                          для     каротина в         на 100  мл.

Определение каротина (X, мг/л) проводят также по формуле

 

Х =

Б

где А и Б — то же, что и в предыдущей формуле;  — коэффициент

 в иг   1  л.

176

Содержание каротина в сыворотке крови здоровых животных составляет мл): у крупного  рогатого

со-

у                                Количество  каротина  находит- ся в пределах        у  крупного рогатого —

 

у кур

Уменьшение содержания каротина в крови называют

  Недостаток каротина и витамина А служит одной из причин снижения    организма, развития у молод- няка диспепсии, бронхопневмонии, кератоконъюнктивита, отста- вания в  росте;  у снижения продуктивности, аборта,  за-

держания последа, субинволюции матки, нарушения половых циклов; у быков-производителей — изменения       у        возникновения уродств у поросят.

 

Заняти е 28 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО

   ФОСФОРА И МАГНИЯ

В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

Цель занятия. Научиться определять в                  крови количество обще- го кальция, неорганического фосфора и магния и давать клиническую оценку результатам исследования

Материальное обеспечение.                                               микробю-

ретка (на 2 мл),  центрифужные  пробирки,                               бутылки, градуи- рованные микропипетки и пипетки (на 0,1; 1,5 и 10 мл);  сыворотка

Реактивы для определения кальция (готовят на

и хранят в                          бутылках) 0,1 н  раствор                   калия, инди- каторная смесь  (1 г                                                      и 100 г нитрата калия), 0,1           раствор три- лона Ь (37,21  г   Б и воды до 1  л); М раствор                                                         Б  (1  мл 0,1 М раствора трилона Б и воды до 100  мл),                   стандартный раствор кальция (высушенный при                            в течение 24 ч  химически чистый бонат кальция 2,497 г      8 мл     соляной                                               и воды до

1 л), рабочий стандартный раствор кальция (1 мл основного раствора каль- ция и 9 мл воды, в 1  мл раствора        мг кальция)

Реактивы для                       фосфора                 раствор реактив на фосфор, который готовят смешиванием 500  мл

раствора ванадата аммония (1,17 г ванадата аммония растворяют в 250 мл горячей дистиллированной воды, добавляют 14 мл                                                     соляной кислоты, охлаждают до         и доводят       водой до объема 500 мл), 1000  мл   н                                                      соляной кислоты (205,7 мл

ной соляной              доводят дистиллированной водой до объема 1  л)  и 1000 мл раствора молибдата аммония (35,3 г молибдата аммония растворяют в              л горячей дистиллированной   охлаждают до ком- натной температуры и                                          дистиллированной водой до  объема 1   ре- актив   в темном прохладном месте не менее 3                                 основной стан- дартный раствор фосфора  (4,394  г          до постоянной  мас-

сы в эксикаторе над серной                 и                               воды до   л; добав- ляют 5 мл    хранят в холодильнике до 1 года; в 1  мл

12 Заказ №  1227                                                                                                        177

1   фосфора); рабочий                                                         (5 мл ос- стандартного раствора фосфора и воды до 100 мл;

в 1 мл раствора содержится 0,05 мг

для  определения  магния:                    раствор поливинилового                       раствор титанового                                                                                                   раствор  титанового

желтого  (1  мл                 раствора титанового желтого и

воды до  50 мл);                 раствор гидроокиси натрия; основной стандартный раствор  (8,458 г              и дистиллированной воды до 1  л); рабо- чий стандартный раствор магния (1 мл основного раствора магния и дистилли- рованной воды до 200 мл; в 1  мл раствора                          мг магния).

Определение содержания общего кальция в сыворотке крови (по Вичеву и   В пробирку берут 1 мл 0,1 н. раство- ра гидроокиси калия и несколько крупинок индикаторной появляется бледно-розовая окраска. Если возникает зеленова- тая флуоресценция (вследствие присутствия в  растворе следов   то титруют 0,001 М раствором трилона Б до появления бледно-розовой окраски. При добавлении 0,1 мл рабочего стан- дартного раствора кальция появляется зеленоватая флуоресцен- ция. Титруют 0,001 М раствором трилона Б                                    до бледно-розовой окраски. В пробирку вносят ОД мл испытуемой сыворотки кро- ви. После появления флуоресценции титруют 0,001 М раствором трилона Б до ее  исчезновения.

Содержание кальция в сыворотке (X,   мл) находят по формуле

• А

        Б

где                           0,001 М раствора трилона Б,    на вание сыворотки, мл; Б — количество 0,001 М раствора трилона Б, израсходо- ванное на                 рабочего стандартного раствора кальция, мл; 0,01 личествокальция,                                                       в0,1мл  стандартного

мг;                              сыворотки,  взятое для                  исследования,     мл; 100 — коэффициент  для перечисления количества кальция на 100 мл.

Содержание кальция (X, ммоль/л) определяют также по  муле

А

Л                                         • •

Б

где А   и            же, что и в предыдущей формуле;  40,08 — относительная моле-   масса кальция; 1000 — коэффициент для пересчета.

У взрослых здоровых животных количество общего кальция в сыворотке находится  в следующих  пределах  (мг/100  у крупного рогатого                       овец —  коз —

у

Для пересчета количества общего кальция в единицы СИ концентрацию вещества в мг/100 мл умножают на ко- 0,25.

В норме количество общего кальция в сыворотке крови со- ставляет (ммоль/л): у крупного рогатого

коз                      лошадей                  сви- собак у кур

Уменьшение количества общего кальция в сыворотке    наблюдают при голодании, рахите, остеодистро- фии, уремии, хронических заболеваниях послеродовом па- резе, бронхопневмонии, экссудативном плеврите, анемии, лейко- зах, диабете, остро протекающих болезнях, хроническом сепсисе, тетании,  гипопаратиреозе, остром панкреатите, контагиозной плевропневмонии и др.

Увеличение общего кальция   может быть алиментарного происхождения, при остеодистрофии, деформи- рующем артрите, остеомах, гиперпаратиреозе, сердечной недо- статочности, перитоните, гангрене, желтухе и т.  д.

Определение содержания неорганического фосфора в сыво- ротке крови  (по В.      и Л. А. Кудрявцевой). В центрифужную пробирку вносят 2,5 мл  во- ды, 0,5 мл сыворотки крови, 2 мл                     раствора трихлорук- сусной кислоты, хорошо перемешивают и центрифугируют 10 мин яри    В другую пробирку наливают 2,5 мл  прозрачного центрифугата, 2,5 мл реактива на фосфор и через 20 мин коло- риметрируют с синим светофильтром против  воды в 10 мм кюветах.

Одновременно таким же образом ставят реакцию с рабочим стандартным раствором фосфора, но вместо сыворотки наливают 0,5 мл стандартного раствора.

Содержание неорганического фосфора в  сыворотке (X,

  мл)

где А —                 плотность пробы с   сыворотки     Б — оптическая плотность пробы с рабочим стандартным раствором фосфора                  количество                            взятое для  колориметрического  ис- следования,  мл;                                 коэффициент  для  пересчета                               фосфора  на

100 мл сыворотки;                количество фосфора во взятом для анализа объ- еме рабочего стандартного раствора

В сыворотке крови взрослых животных содержание неорга- нического фосфора следующее (мг/100 мл): у крупного рогатого скота —            овец          лошадей  5,5;           собак у

Для пересчета количества неорганического фосфора в едини- цы СИ (ммоль/л) концентрацию фосфора (мг/100 мл) нужно ум- ножить на коэффициент 0,323.

Содержание неорганического фосфора в сыворотке крови у здоровых  животных составляет у крупного  рогатого

скота                                                      коз                    лоша-

у кур—

 

Уменьшение содержания неорганического фосфора в сыворот- ке бывает при рахите, остеодистрофии,  гипер-

неполноценном кормлении

Увеличение содержания неорганического фосфора в сыворот- ке   наблюдают при заживлении переломов костей, болезнях почек, гипопаратиреозе, желтой атрофии пече- ни, лейкозах

Определение содержания магния в сыворотке крови (по Спе- ру). Для анализа берут три пробирки В первую пробирку (про- ба) вносят 2,8 мл дистиллированной  воды,       0,2  мл сыворотки, 0,5 мл  0,1% ного                    раствора поливинилового спирта и 1  мл ного раствора титанового желтого Во вторую пробирку

берут 2 мл воды, 1 мл рабочего стандартного раство- ра магния, 0,5 мл   раствора поливинилового спирта  и

1 мл 0,01% ного раствора титанового желтого В третью и чет- вертую пробирки (контроль) вливают по 3 мл воды, 0,5 мл   раствора поливинилового спирта и 1 мл  раствора титанового  желтого

Во все четыре пробирки добавляют по 1 мл 7,5% ного раство- ра гидроокиси натрия После прибавления растворов их смеши- вают, выжидают 5 мин и колориметрируют при зеленом свето- фильтре (540 нм) в 10 мм кюветах против контроля

Содержание магния в сыворотке крови (X,   мл) опре- деляют по формуле

 0,2        ' ' '

где          оптическая плотность пробы,       оптическая  плотность  стандар- та,                     количество магния, взятое для анализа в               коли- чество сыворотки, взятое для анализа, мл, 100  — коэффициент                    на 100 мл

Содержание магния в сыворотке крови   ммоль/л) находят также по формуле

х=-

 

0,2 24,312

  1,028

где   0,005  и   же, что и в предыдущей формуле,

фициент для перечисления   (на 1 ч),  относительная  молекулярная масса магния

Содержание магния в сыворотке здоровых животных нахо- дится в следующих пределах (мг/100 мл)  у крупного рогатого

овец

собак —        у кур —

Для пересчета количества магния в единицы СИ (ммоль/л)

180

его содержание    мл) умножают на 0,411 Содержание магния в сыворотке составляет (ммоль/л) у крупного рогатого скота         овец                           лошадей                            сви-

собак                               кур

Увеличение количества магния в сыворотке крови

 может быть при острой и хронической почечной недоста- точности,   болезнях печени и др

Уменьшение содержания магния в сыворотке крови

 наблюдают при пастбищной тетании у                    поно- белково минеральном голодании, циррозе печени и т  д