Для приготовления эталонных растворов используется система поэтапного (двойного, тройного) разведения.

Сравнение результатов испытания в анализируемом веществе и эталоне проводится либо:

• нефелометрически (сравнивается степень мутности), либо
• колориметрически (сравнивается степень окраски).

Для достижения максимальной точности при работе с эталоном необходимо знать общие правила, порядок выполнения которых описывается в ГФ ХI вып.1 статья «Испытания на чистоту и допустимые пределы примесей», (ГФ ХII вып.1):

1. вода и реактивы должны быть свободны от ионов, на которые проводится реакция
2. пробирки для анализа должны быть бесцветны и одинакового диаметра, чтобы столб жидкости был одинаковым в обеих пробирках.
3. навески для приготовления эталонных растворов отвешивают с точностью до 0,001 из соответствуюших ФС исходных веществ (чаще ОФС) и на веска должна быть не менее 0,05г.
4. Готовят растворы А (исходные) более высокой концентрации (для длительного хранения) и затем из них разбавлением растворы Б (первое разведение) и В (второе разведение). Эталоны Б и В готовят непосредственно перед применением – это рабочие растворы. Концентрации открываемых ионов в эталонах достаточно малы, поэтому сначала в большинстве случаев готовят раствор А, т.к. навеска для приготовления этого раствора такова, что ее можно взвесить с необходимой точностью и этот раствор хранится продолжительное время.
5. реактивы к растворам (исследуемому и эталонному) добавляют одновременно и в одинаковых количествах.
6. проведение наблюдения результатов: степень мутности (нефелометрически) проводят в проходящем свете на темном фоне; окраску (колорометрически) – при дневном отраженном свете на белом фоне
7. безэталонный способ определения примесей используется для тех, которые «не должны быть» обнаружены в препарате по частной ФС.

Методика: к 10 мл исследуемого раствора лекарственного вещества прибавляют все реактивы, кроме основного, открывающего данную примесь. Затем раствор разливают на 2 пробирки, в одну прибавляют реактив и сравнивают растворы в обеих пробирках. Если различия между пробирками нет, то говорят, что примесь отсутствует в пределах чувствительности данной реакции. Чувствительность реакции должна быть ниже предела обнаружения примеси.

Очень важно знать оптимальные условия проведения реакций (рН среды и т.д.), так как соблюдение их значительно повышает все вышеперечисленные требования.

Вещество, из которого изготавливается эталонный раствор, называется исходным веществом. При выборе исходного вещества учитывается возможность точного дозирования (отвешивания) и устойчивости при хранении. В некоторых случаях исходное вещество одно, а при растворении получают другое.

Основной реактив – тот, с помощью которого непосредственно определяется примесь. Для увеличения чувствительности используют определенную среду. При этом, чаще всего, эффекты в эталонном растворе и исследуемом образце будут несколько отличаться и могут отличаться от эффекта той же реакции при определении подлинности препаратов содержащих тот же ион.

Реакция обнаружения примеси хлорид-ионов

Исходное вещество – натрия хлорид; основной реактив – раствор нитрата серебра; среда – разведенная азотная кислота. При этом в эталоне наблюдают хорошо заметную муть, а в исследуемом растворе в зависимости от концентрации – белый творожистый осадок, белую муть или опалесценцию, которые не исчезают от добавления азотной кислоты и легко исчезают от добавления раствора аммиака.

Реакция обнаружения примеси сульфат-ионов

Исходное вещество – сульфат калия; основной реактив – раствор хлорида бария; среда – разведенная хлороводородная кислота. В эталоне наблюдают заметную муть, в исследуемом растворе – белый осадок или муть, не исчезающий при добавлении соляной кислоты.