Основные характеристики светового микроскопа

 

 

 

Принцип иммерсионного метода микроскопии

 

Особенности фазово-контрастной микроскопии

 

Особенности темнопольной микроскопии

 

Особенности люминесцентной микроскопии

 

Основные характеристики электронного микроскопа

 

Подпись преподавателя _________________________________________________________

Теоретическая справка

К работе № 2

Типы микроскопов и принципы микроскопии; правила работы с микроскопом при использовании иммерсионной системы

Микроскопический метод исследования - это изучение под микроскопом окрашенных препаратов из исследуемого материала:

 

предметный столик

тубус с револьвером для объективов

тубусодержатель

основание

штатив

окуляр

Винты для регулирования предметного столика

Конденсор и светофильтры

макровинт

Настройка света

Вкл\выкл

микровинт

Световой микроскоп состоит из:

Механической части Механическая часть обеспечивает крепление и движение. Она включает штатив, состоящий из основания и тубусодержателя; тубус с револьвером для объективов; предметный столик для препарата, а  также приспособления для крепления конденсора и светофильтров. В штатив встроены механизмы грубого (макровинт) и тонкого (микровинт) перемещения тубусодержателя и пред- метного столика.

Оптической части Оптическая часть представлена объективами, окулярами, конденсором и осветительной системой. Осветительный аппарат находится под предметным столиком: осветительная лампа, диафрагма (регулирует объем светового пучка), конденсор (в фокусе конденсора собираются параллельные лучи света). Объективное увеличение: - объективы «сухие» малого и большого увеличения (8х и 40х), - объективы иммерсионные (90х и 100х). Окулярное увеличение: - окуляры 7х, 10х, 15х.

  

Общее увеличение микроскопа равно произведению увеличения объектива на увеличение окуляра.

Разрешающая способность микроскопа определяется размером наименьшего объекта, который можно увидеть в данный микроскоп. Для световых микроскопов разрешающая способность – 0,2 мкм, для электронного - в 2000 раз выше.

 

Системы микроскопии

сухая                                                                           иммерсионная

-между объектом и объективом                        - между объектом и объективом-

находится воздух;                                              жидкость (масло, вода);

- используется для изучения крупных             - используется для изучения

биологических объектов (ботанических,        микроорганизмов;

 гистологических);

- максимальное увеличение объектива ´40    - увеличение объектива ´90;

 

Преимущества иммерсионной системы. Масляная системаза счет выравнивания показателей преломления света повышает уровень полезного увеличения микроскопа.

Фазово-контрастное устройство может быть установлено на любом микроскопе. Это система диафрагм, которая используется для превращения невосприимчивых человеческим глазом фазовых колебаний светового луча в амплитудные. Благодаря специ­альному приспособлению в объективе (фазовая пластинка) и в конденсоре (кольцевая диафрагма) эти объекты выглядят более темными (позитивный фазовый контраст) или более светлыми (негативный фазовый контраст) по сравнению с окружающей средой.

 Темнопольная микроскопия. В основе лежит принцип рассеивания света мельчайшими взвешеннымичастицами в темном поле при боковом освещении (эффект Тиндаля). При темнопольной микроскопии в объектив попадают только лучи, рассеянные объектом, и не попадают прямые лучи от осветителя. Поэтому наблюдаемые микроорга­низмы кажутся ярко светящимися на темном фоне.

Темнопольную микроскопию применяют для прижизненного изучения лептоспир, спиро­хет, а также микроорганизмов слишком мелких, чтобы их можно было различить при обычном светлопольном освещении. Для темнопольной микроскопии используют обыч­ные объективы и специальные темнопольные конденсоры.

 Люминесцентная микроскопия. В основе лежит способность веществ и биологических объектов светиться при воздействии на них ультрафиолетовых лучей. Применяют специальные люминесцентные микроскопы или приспособления к обыч­ным микроскопам. Так как большинство микроорганизмов не обладает собственной люминесценцией, то их предварительно окрашивают (флюорохромируют) сильно разве­денными растворами специальных красителей (флюорохромы), которые связываются с определенными структурами клетки.

Люминесцентную микроскопию применяют также для выявления антигенов и антител. С этой целью используют метод иммунофлюоресценции (люминесцентно-серологический метод). Этот метод позволяет выявить в препарате микробы, содержащие определенные антигены. Для их обнаружения необходимо иметь антисыворотки, содержащие антитела к этим антигенам (к антисывороткам химическим путем присоединены молекулы флюоро-хромов - люминесцирующие сыворотки). На фиксированный препарат во влажной камере наносят люминесцирующую сыворотку, инкубируют, промывают раствором хлорида натрия, высушивают и рассматривают в люминесцентном микроскопе. Если в препарате есть микробы, содержащие антиген, антитела к которому были в люминесцирующей сыворотке, они ярко светятся. Остальные микробы не люминесцируют.

Электронная микроскопия. Изображение в электронном микроскопе образуется не с помощью световых лучей и стеклянных линз, а с помощью потока электронов, который фокусируется электрическим или магнитным полем. Разрешающая способность примерно в 2000 раз больше, чем светового (0,2 нм), и с его помощью можно увидеть даже крупные молеку­лы. Применение электронного микроскопа значительно расширило знания о вирусах, фагах и других микроорганизмах.

К работе № 3