Опыт 1. Определение концентрации пировиноградной кислоты (ПВК) в моче или сыворотке крови.

 

1. В две пробирки внесите реактивы согласно следующей таблице:

Раствор	Опытная проба, мл	Контрольная проба, мл
Исследуемый образец		-
Дистиллированная вода	-
2,4-динитрофенилгидразин	0,8	0,8

 

2. Содержимое пробирок на 15 мин поместите в темное место при комнатной температуре.

3. В каждую пробирку внесите по 1 мл 10%-го раствора NаOH и через пять минут измерьте оптическую плотность при длине волны 620 нм опытной пробы против контрольной (О) и калибровочной пробы против контрольной (К).

4. Расчет проведите по готовому калибровочному графику.

Расчетсодержания ПВК в суточной моче (на диурез 1500 мл):

Для пересчета содержания ПВК (в мг) в единицы количества вещества (мкмоль) надо умножить соответствующие величины на 11,4 (коэффициент пересчета).

Норма для человека: 10-25 мг/сутки или 114-284 мкмоль/сутки пировиноградной кислоты.

 

Калибровочный график зависимости величины оптической плотности раствора (D) от концентрации ПВК в пробе.

 

Сравните полученные значения с нормальными величинами. Каковы причины повышенного содержания пировиноградной кислоты в сыворотке крови и моче?

 

Опыт 2. Определение активности сукцинатдегидрогеназы мышц.

1. Взвесьте 1 г мышечной ткани.

2. Поместите ткань в ступку, тщательно разотрите со стеклянным песком, постепенно добавляя 3-4 мл раствора 5%-ной янтарной кислоты.

3. Полученный гомогенат перенесите поровну в 2 пробирки.

4. Содержимое одной пробирки кипятите в водяной бане в течение 3-5 минут.

5. Затем в обе пробирки добавьте раствор метиленовой сини до голубого окрашивания, перемешайте и залейте поверхность жидкости 0,5 мл растительного масла для изоляции от кислорода воздуха. Обе пробирки инкубируйте в водяной бане (40^оС) в течение 10 минут.

 

Дайте объяснение наблюдаемым явлениям. Какова функция метиленовой сини в данном эксперименте? На какое соединение эта функция возлагается в живой клетке?

 

 

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

 

Занятие № 10. «Обмен углеводов (часть 1)»

 

Цель занятия: рассмотреть факторы, влияющие на переваривание углеводов; освоить метод количественного определения глюкозы в крови.

 

ВОПРОСЫ К КОНТРОЛЬНОЙ РАБОТЕ:

1. Углеводы: строение и классификация.

2. Углеводы: биологическая роль и функции углеводов в организме.

3. Переваривание угле­водов в желудочно-кишечном тракте у моногастричных животных. Ферменты, участвующие в переваривании углеводов. Нарушения переваривания углеводов.

4. Особенности переваривания углеводов у жвачных животных. Пути включения летучих жирных кислот (ЛЖК) в метаболизм.

5. Метаболизм глюкозо-6-фосфата. Регуляция содержания глюкозы в крови. Биологическая значимость данного явления.

6. Синтез гликогена: последовательность стадий и биологическое значение процесса.

 

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

 

Экспериментальная работа.