Состав пит . среды. Основу пит . ср. составляют источники С, мин. эл, и ростовыйфакторы.

Источники С- простые и сложные в-ва(белки, пептиды, целлюлоза; метан, метанол, угольная к-та)

Мин. эл. -макро- и микроэлементы (N, P, K, Ca, S, Mg, Fe, B, Zn, Cu, Co, Mn, J, Mo).Ростовые фак-ры- Витамины, ам.к-ты, гормоны (ауксины, цитокинины) гиберелины. Кроме этогочасто используют ростовые добавки-картофельный сок, экстракт кукурузы, проростков ячменя, кокосовое молоко.

На средах без гормонов растут “привыкшие” и опухолевые ткани.
Для получения стеблевого морфогенеза снижают содержание ауксинов.
Из ауксинов чаще всего применяют 2,4-дихлорфеноксиуксусную кислоту (2,4-Д) - 0.1-10 мг/л, нафтилуксусную кислоту (НУК) - 0.1-2 мг/л, ИУК - 1-30 мг/л.
Для индукции каллусогенеза используют более высокие концентрации ауксинов, в дальнейшем ткань может расти при более низком содержании ауксинов.

В качестве цитокининов используют кинетин, 6-бензиламинопурин (БАП), зеатин (0.001-10 мг/л); из них кинетин наименее активен. В состав некоторых сред входит аденин. Иногда используют гибберелловую кислоту (ГК). В качестве ростактиваторов применяют также кокосовое молоко, дрожжевой экстракт, гидролизат казеина и др.

Все компоненты пит.сред подбираются по индивидуальным особенностям. Транспорт в-в осуществляется насосами или транспортерами, сыпучие компоненты – вакуумными насосами. Часть компонентов(соли) предварительно растворяют.

Состав питательных сред для культивирования биотехнологических объектов зависит от типа их питания:

-среда без глюкозы - для хлореллы, цианобактерий;

- среда без витаминов и гормонов - для грибов (фузариума, ботритиса) и для ряски (Lemna);

- среда с азотом, сахарами, витаминами и гормонами - для культивирования клеток и тканей высших растений.

Разработано много питательных сред, но большинство из них представляют модификации основных: Мурасиге-Скуга (МС), Уайта, Шенка-Хильдебрандта, Гамборга (В5), Линсмайера-Скуга, Хеллера, Чапека и др.

Важным принципом приготовления пит.среды является соблюдение асептики (поддержание опред.значения ph,т.к.это препятствует развитию посторонниз микро орг-мов). Используют разные способы стерелизации(стерелизуют входящий и выходящий воздух и сами ферм-ты). Воздух и газы стерелизуют с помощью сист-мы мембр.фильтров.

Пит.среды м.б. простерелизованы различными методами:

Термический-самый распространенный(недостаток – требует много времени и потеря пит в-в среды, т.к. большинство углеводов термически не стабильны.)

Радиационный-оч.эффективный, не теряются пит св-ва, но весьма дорогостоящий.

Химический- использование хим.препоратов. требование к ним- их полное разложение после воздействия,т.к. еготудно вывесты послеизбиореактора.

Метод фильтрации- может использоваться для жидкихсред, основан на использовании полупроницаемых мембран(пропускают жидкую среду, и концентрируют на своей пов-ти микро орг-мы)

35 СПОСОБЫ СТЕРИЛИЗАЦИИ В БИОТЕХНОЛОГИИ. Стерилизация растительных эксплантатов.

Объяснение. Все работы с культурой клеток и тканей in vitro проводят в стерильных (асептических) условиях в стерильном боксе или ламинар-боксе, стерильными инструментами, в стерильной посуде, на стерильных питательных средах. В случае нарушения стерильности на средах хорошо развиваются микроорганизмы (грибы, бактерии), нарушающие состав среды и подавляющие рост растительных эксплантов.Чаще всего для стерилизации помещений используют ультрафиолетовое облучение в течение 0,5–2 часов. Посуду, халаты, вату, бумагу, дистиллированную воду, питательные среды стерилизуют в автоклавах под давлением пара,. Металлические инструменты автоклавировать нельзя, так как под действием пара образуется ржавчина. Поэтому их стерилизуют сухим жаром в термостатах с температурой 170–250оС в течении 1–2 часов.

СПОСОБЫ СТЕРИЛИЗАЦИИ РАСТИТЕЛЬНЫХ ЭКСПЛАНТОВ
Растительные объекты перед стерилизацией тщательно отмывают проточной водой, иногда с моющими средствами, очищают от излишних тканей. С корнеплодов и корней снимают кожуру, с побегов – кору, с почек – кроющие чешуи.Растительные экспланты стерилизуют растворами веществ, содержащими активный хлор,перекисью водорода, спиртом, нитратом серебра.Этиловый спирт часто применяют для предварительной стерилизации, протирая им поверхность материала или погружая материал на несколько секунд в абсолютный спирт. Иногда такой стерилизации достаточно, ее используют при работе с плодами, семенами, побегами, завязями.

Гипохлорит кальция (хлорная известь) используется для обработки почек, завязей, цветков, семян, Гипохлорит натрия используется для обработки любых эксплантов. Это вещество является клеточным ядом, поэтому время стерилизации и концентрацию подбирают экспериментально. Сулема – токсичное вещество. Для стерилизации зародышей используют 0,1 % раствор Антибиотики применяют для стерилизации растительного материала, инфицированного бактериями. Наиболее часто применяют стрептомицин и тетрамицин, ампициллин, левомицитин, каномицин и другие.