Биотехнология производства грибных энтомопатогенных препаратов.

Энтомопатогенные препараты на основе грибов способны поражать большое кол-во вредных насекомых, вызывая у них – микоз. Грибы обладают рядом особенностей:

а) поражение происходит ч/з кутикулу, а не ч/з пищ-й тракт;

б) насекомые поражаются в фазе развития куколки и иманго,

в) у грибов большая скорость роста и огромная репродуктивная способность, длительное время могут находиться в виде спор,

г) высокая специфичность в поражении отдельных видов насекомых.

Воздействие грибного препарата начинается с проникновения споры в полость тела насекомого, затем спора прорастает в гифу, а затем в мицелий, от него отчленяются конидии, составляющие инфекционную единицу энтомопатагенных грибов. При благоприятных условиях конидии образуются на поверхности кутикулы. Конидии своими апрессориями прикреп-я к кутикуле и пускают мицелл-е отростки в тело. Оказавшись в теле конидии циркулируют по гемолимфе и начинают развитие гриба. Некоторые грибы выделяют много токсинов. Летальный исход наблюдается из-за наруш-й циркуляции гемолимфы и от выделения грибом токс-х в-в.

Период прорастания конидий и до гибели насекомого от 2 до 8 сут.

Производство препаратов основывается на следующих родах: Beauweria, Metarrhizium и Enthomophthora. Хорошо освоено получение препарата на основе боверина. Готовый препарат выпускается в виде порошка белого или кремового цвета. Препарат безвреден для теплокровных животных и чаще не выз-ет ожогов у растений. Боверин получают с помощью глубинного или поверхностного культивирования. Глубинное культ-е более экон. При глуб-м культивировании гриб размножается вегетативно, образуя гифальные тельца - гонидии.

 

30. Из всех энтомопатогенных препаратов вирусные обладают наибольшей специфичностью по отношению к насекомому-хозяину. Они поражают не более одного вида. Их ярко выраженная специфичность обуславливает практическую безвредность вирусных препаратов для человека, флоры и фауны.

Вирусы отличает высокая устойчивость к неблагоприятным факторам окружающей среды, они способны сохранять активность в течение 10-15 лет, находясь вне насекомого. Заражение вирусом происходит при питании вредителя. Попавшие в кишечник тельца-включения при щелочных значениях рН разрушаются. Освобожденные вирионы проникают через стенку кишечника в клетки, где в ядрах происходит репликация вирусов. Высвободившиеся вирусы заражают другие клетки, что в итоге приводит к гибели насекомого. Отличительной особенностью вирусов является то, что они могут размножаться только в живой ткани. Это создает определенные трудности в организации промышленного производства, так как технология размножения вирусов должна быть связана с использованием живых насекомых-хозяев.

В нашей стране осуществляется выпуск трех вирусных энтомопатогенных препаратов: вирин-ЭКС (против капустной совки), ЭНШ (против непарного шелкопряда) и АББ (против американской белой бабочки).

Производство любого из вирусных препаратов начинают с разведения насекомого-хозяина на искусственных питательных средах, обеспечивающих их физиологически здоровое состояние. На определенной стадии развития (обычно на стадии гусеницы) насекомых заражают, добавляя вирусную суспензию к корму. При этом инокулят предварительно получают от нескольких больных личинок. После заражения насекомых выдерживают в строго определенных условиях, обеспечивающих максимальное накопление вируса в тканях. Через 7-9 суток собирают мертвые и отмирающие личинки, подсушивают при температуре 33-35оС, измельчают механическим способом для вывода телец-включений из тканей. К полученной массе добавляют физиологический раствор или дистиллированную воду из расчета 1 мл на гусеницу, взвесь полученных тканей фильтруют.

При производстве вирин-ЭКС полиэдры осаждают из фильтрата центрифугированием. Осадок суспендируют в минимальном количестве дистиллированной воды и добавляют простерилизованный глицерин до титра 1 млрд. полиэдров в 1 мл. Готовый препарат разливают во флаконы. При производстве вирин-ЭНШ в фильтрат добавляют лактозу, а после перемешивания ацетон в соотношении 4:1 к объему суспензии. После отстаивания надосадочную жидкость сливают, осадок подсушивают до полного удаления ацетона. Если препарат планируется выпускать в виде порошка, то сухой осадок смешивают с мелкодисперсным наполнителем (каолином, например) до получения титра полиэдров 1 млрд. полиэдров в 1 грамме.

Масляную форму препарата получают путем диспергирования осадка в стерильном 50% растворе глицерина до титра 2 млрд. полиэдров в 1 мл, а затем добавляют равный объем солярового масла, перемешивают и разливают по флаконам. Вирусные энтомопатогенные препараты применяют путем внесения полиэдров в плотные популяции насекомых-вредителей с целью возникновения в них эпизоотий. Данный способ обработки предполагает внесение небольших количеств препарата. В другом случае опрыскивание или опыление производят на зараженных участках в период рождения личинок или на ранних стадиях их развития.