B. Оценка активного иммунитета

 

1. Защита от клинической формы болезни

 

При оценке уровня активного иммунитета, вырабатываемого вакцинированными свиньями, можно учитывать несколько критериев. Как правило, свиней вакцинируют в начале периода доращивания, т.е. когда они находятся в возрасте между 9 и 12 неделями. В лаборатории опыты проводят посредством контрольного заражения свиней в конце заключительной стадии откорма, когда они весят от 80 до 90 кг.

 

Обычно для определения степени защиты свиней от развития клинической формы болезни после вакцинации и контрольного заражения используют, как минимум, три критерия, такие как ректальная температура, потеря веса и клинические признаки вместе с уровнем смертности (De Leeuw & Van Oirschot, 1985). Значимость титра антител в плане прогнозирования степени эффективности вакцин мала. Когда условия контрольного заражения хорошо стандартизированы, наиболее воспроизводимым и достоверным параметром является потеря веса при сравнении показателей вакцинированной и контрольной групп. Количественно определенная разница в приросте массы тела или в потере массы между двумя группами поросят в определенный интервал времени после контрольного заражения (день 0 и день 7) имеет очень хорошую значимость в плане прогнозирования степени эффективности вакцины (Stellmann et al., 1989). Значимые результаты можно получить при сравнении показателей продуктивности по массе одной группы, включающей не менее восьми вакцинированных свиней, с показателями продуктивности по массе другой группы из восьми невакцинированных контрольных свиней.

 

Для контрольного заражения обычно предпочтительнее использовать высокий титр вирулентного штамма, поскольку при этом возможно сделать более выраженной разницу между вакцинированными и контрольными свиньями. Исходя из предыдущей работы для контрольного заражения достаточной может быть доза, равная, как минимум, 106 ТЦД50/мл вирулентного штамма, подвергнутого не более чем трем пассажам на первичных клетках, но рекомендуется использовать более высокий титр (107,5 ТЦД50/мл), Для контрольного заражения свиней следует использовать орально-назальный путь, вводя вирулентный штамм в соответствующем большом объеме (≥ 4 мл).

 

В настоящее время данный метод оценки эффективности вакцин против SHV-1 хорошо исследован и дает возможность установить объективный индекс для

определения степени эффективности вакцины. Данный индекс, который сравнивает относительные потери массы у вакцинированных и контрольных свиней, можно также использовать для исследования иммуногенности партий перед выпуском в реализацию и для тестирования эффективности партии. Однако величина индекса точки разделения (cut-off index) будет различной, поскольку условия проведения анализа не будут идентичными. Необходимо провести надлежащую оценку влияния пассивно приобретенных материнских антител на эффективность вакцины.

 

2. Экскреция вирулентного вируса

 

К тому же, желательно, чтобы вакцины предотвращали или хотя бы ограничивали экскрецию вируса у инфицированных свиней (Vannier et al., 1991). Когда в основе программы контроля болезни Ауески лежит широкомасштабная вакцинация, главное – выбрать такие вакцины и схемы вакцинации, которые лучше всего ограничивают репликацию вирулентного вируса у инфицированных свиней. Для сравнения вакцин на этой основе было проведено несколько анализов.

 

В целом, свиней вакцинируют и контрольно заражают в разные периоды. Лучше, но для этого требуется больше времени, инфицировать свиней на последней стадии откорма. Для определения уровня экскреции вируса ежедневно у каждой свиньи, начиная за день до контрольного заражения и, как минимум, до дня 12 после контрольного заражения, берут мазки из носа (из ноздрей на глубине 10 см). Для определения точного веса собранной слизи тампоны для взятия мазков можно взвесить до проведения процедуры отбора образцов и сразу же после нее. Затем в каждую пробирку с материалом мазка добавляют среду. Вирус титруют из замороженной и оттаянной среды.

 

Для выражения количества вирулентного вируса, выделяемого свиньями, могут быть использованы различные индексы, с учетом продолжительности и уровня экскреции вируса и количества свиней, выделяющих вирулентный вирус.

 

3. Продолжительность иммунитета

 

Рекомендуется, чтобы любые заявления относительно начала и продолжительности иммунитета были подтверждены данными, полученными в ходе испытаний. Оценка продолжительности иммунитета может основываться на опытах с использованием контрольного заражения или, насколько это возможно, на результатах иммунологических и серологических тестов.

 

Ii) Полевые испытания

 

В целом, оценить эффективность вакцины в популяциях животных крайне трудно. Для того чтобы сделать это, необходимо вакцинировать животных в отсутствие патогена, от которого защищает вакцина, затем ожидать момента заражения и сравнивать воздействие инфекции на вакцинированных животных (или потомство вакцинированных животных) с воздействием на невакцинированных животных такого же возраста, из такого же здания и той же партии, что и вакцинированные животные (или животные с пассивной защитой). Поскольку в полевых условиях трудно соблюсти все эти условия, полевые испытания, несомненно, больше подходят для тестирования на безопасность, чем для тестирования на эффективность, за исключением разработки маркерных вакцин, которые предлагают возможность оценить эффективность вакцин в полевых условиях (Bouma, 2005).

 

Стабильность

 

Следует проводить тестирование для подтверждения срока хранения, заявленного производителем. Данные тесты должны всегда представлять собой исследования в реальном времени; они должны проводиться на достаточном количестве партий (как минимум три), произведенных в соответствии с описанным процессом производства, и на продуктах, хранящихся в конечном контейнере, и обычно включают тесты на биологическую и физико-химическую стабильность. Производитель должен предоставить результаты анализов, которые подтверждают предлагаемый срок годности во всех предлагаемых условиях хранения. Обычно предлагаемая продолжительность срока годности соответствует периоду, в течение которого продукт считается стабильным минус три месяца.