Определение активности испытуемого образца расчетным путем.

Кривая, отражающая зависимость между активностью антибиотика и размером зоны угнетения роста тест–микроба, после перехода к координатам «логарифм концентрации (lg C) — диаметр зоны (D)» преобразуется в прямую, уравнение которой:

D = а + b ∙ lg C,

где  а — свободный член; b — угловой коэффициент.

По исправленным значениям величин диаметров зон d 1; d 2; d 4; d 5 для растворов стандартного образца с концентрациями С 1; C 2; С 4; C 5 и общей средней величине диаметра зоны d 3, соответствующей контрольной С 3, рассчитывают величины а и b с применением метода наименьших квадратов. Так как концентрации С 1; C 2; С 3; С 4; C 5 составляют геометрическую прогрессию, формулы для вычисления коэффициентов а и b могут быть записаны в виде:

 

18. Биологические испытания. Область применения, виды тестов. (+гистамин -микобактерии)

-стерильность

Испытание на стерильность проводят двумя методами: методом прямого посева или методом мембранной фильтрации*.(ЛС, не обладающих антимикробным действием или антимикробное действие которых можно устранить разведением или инактивированием, а также для препаратов, испытание которых невозможно выполнить методом мембранной фильтрации.)

*Фильтрация содержимого всех емкостей через мембранные фильтры, отмывка мембранных фильтров соответствующим стерильным раствором, добавление питательной среды и инкубирование посевов

-пирогены

Вкалывают лс кроликам и проводят измерение температуры (через 30’)

-аномальная токсичность

На белых мышах 5 шт
1 смерть ещё один этап 5 шт
токсично если смертей больше 1

-депрессорные вещества (понижают АД) СО-гистамин

Испытания проводят на кошках. Если в течение 60 сек после введения раствора ИО в исследуемой тест-дозе снижение артериального давления не превышает реакцию на введение СО в разведении 1, вещество прошло испытание

Отдельно на гистамин

содержания гистамина in vitro в лекарственных средствах для парентерального применения.

СО гистамина дигидрохлорид в 3 разведениях

Для регистрации сокращений изолированного отрезка подвздошной кишки морской свинки в изотонических условиях в ответ на введение СО и ИО используют регистрирующую систему, состоящую из термостатируемой ванночки с гипокальциевым раствором Тироде при температуре 35 ºС, а также электронного датчика с самописцем или механического рычага с кимографом.

ИО считают прошедшим испытание, если найденное содержание гистамина не превышает максимально допустимое, указанное в нормативной документации

-Микробиологическая чистота

НЛС ((НЕСТЕРИЛЬНЫЕ ЛС) субстанции, различные формы препаратов – таблетки, капсулы, гранулы, растворы, суспензии, сиропы, мази, суппозитории и др., а также вспомогательные вещества) могут быть контаминированы микроорганизмами. В НЛС допускается лимитированное количество микроорганизмов при отсутствии определенных видов, представляющих опасность для здоровья человека.

Испытание лекарственных средств на микробиологическую чистоту проводят в асептических условиях.

После окончания времени инкубации просматривают посевы и отмечают появление типичного роста тест-микроорганизмов в контрольных чашках и пробирках (без препарата) и испытуемых (с различными разведениями препарата). В случаях, затрудняющих учет результатов (помутнение или изменение окраски жидкой среды в результате взаимодействия ЛС с питательной средой), делают пересевы на агаризованные среды.

-Бактериальные эндотоксины

Проводят с помощью реактива, представляющего собой лизат клеток крови (амебоцитов) мечехвоста Limulus polyphemus (ЛАЛ-реактив) или Tachypleus tridentatus (ТАЛ-реактив).

ЛАЛ-реактив специфически реагирует с бактериальными эндотоксинами. В результате ферментативной реакции происходит изменение реакционной смеси, пропорциональное концентрации эндотоксина.

Существуют три основных методологических подхода для проведения данного испытания:

- гель-тромб метод, основанный на образовании геля;

- турбидиметрический метод, основан на измерении степени мутности реакционной смеси в конце инкубационного периода (фотометрическое определение мутности)

- хромогенный метод, основан на измерении интенсивности окраски реакционной смеси, зависящей от количества хромофора, высвободившегося в конце инкубационного периода.

Механизм образования тромба. В ЛАЛ реактиве присутствуют профермент и коагулянт. В присутствии эндотоксина активируется фермент и коагулянт превращается в белок, образующий гель.

19. Количественное определение биологической активности. Область применения, виды тестов. https://pharmacopoeia.ru/ofs-1-2-4-0009-15-biologicheskie-metody-otsenki-aktivnosti-lekarstvennogo-rastitelnogo-syrya-i-lekarstvennyh-preparatov/

К лекарственному растительному сырью и лекарственным растительным препаратам, для которых проводится биологическая оценка активности сердечных гликозидов, относятся:

1. Листья наперстянки пурпуровой, крупноцветковой и их лекарственные препараты.

2. Лекарственные препараты наперстянки шерстистой.

3. Трава, лекарственные препараты горицвета.

4. Трава, листья, цветки ландыша, лекарственные препараты ландыша, сложные лекарственные формы, содержащие настойку ландыша.

5. Семена и лекарственные препараты строфанта.

6. Трава и семя желтушника раскидистого (серого), сложные лекарственные формы, содержащие желтушник серый и др.