Иммунодиагностические реакции

Иммунологический феномен взаимодействия АТ с АГ благодаря высокой чувствительности нашел широкое применение в диагностической практике как иммунодиагностические реакции. С помощью этих реакций можно обнаружить искомые АТ и АГ и определить их количество.

Реакции «антиген-антитело» состоят из двух фаз: специфической, при которой происходит связывание АГ с АТ, и неспецифической, проявляющейся видимым результатом. По способу регистрации реакции «АГ-АТ» подразделяют на реакции, связанные с образованием макромолекулярного иммунного комплекса (агглютинации, преципитации), реакции лизиса - с участием комплемента и реакции с использованием меченых реагентов: реакцию иммунофлюоресценции, иммуноферментный анализ, радиоиммунный анализ, иммуноблоттинг.

РЕАКЦИИ, СВЯЗАННЫЕ С ОБРАЗОВАНИЕМ МАКРОМОЛЕКУЛЯРНОГО ИММУННОГО КОМПЛЕКСА

Реакции агглютинации

Реакция агглютинации (РА) - иммунная реакция взаимодействия суспензии АГ (эритроцитов, бактерий) с АТ в физиологическом растворе. При агглютинации происходит склеивание частиц АТ с образованием хлопьевидного осадка.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) является разновидностью реакции агглютинации, в которой используют антительный или антигенный эритроцитарный диагностикум (эритроциты с адсорбированными на их поверхности АТ или АГ). Эритроциты в этой реакции выполняют роль пассивных носителей.

Оценка результатов РПГА проводится следующим образом:

— при положительной реакции пассивно склеенные эритроциты покрывают дно U- или V-образной лунки ровным слоем с фестончатыми краями («зонтик»);

— при отрицательной реакции (отсутствии агглютинации) эритроциты скапливаются в центральном углублении лунки, образуя компактную «пуговку» с резко очерченными краями.

Реакцию торможения гемагглютинации (РТГА) используют при диагностике вирусных инфекций. Некоторые вирусы содержат на своей поверхности белок гемагглютинин, склеивающий эритроциты. Добавление специфических противовирусных АТ блокирует вирусный гемагглютинин - гемагглютинация отсутствует.

Реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА), или реакцию Кумбса, применяют для определения неполных АТ. Добавление антиглобулиновой сыворотки (АТ против Ig человека) усиливает результаты реакции. РНГА применяют при определении резус-фактора.

Реакции преципитации

Реакция преципитации - иммунная реакция взаимодействия АГ в растворимом состоянии с АТ в физиологическом растворе. При преципитации происходит образование макромолекулярного иммунного комплекса, что проявляется переходом прозрачного коллоидного раствора в непрозрачную суспензию, или преципитат. Количество обоих реагентов должно быть в строго определенных соотношениях, так как избыток одного из них снижает результат. Существуют различные способы постановки реакции преципитации.

Реакцию кольцепреципитации ставят в преципитационных пробирках с малым диаметром. В пробирку вносят иммунную сыворотку и осторожно наслаивают растворимый АГ. АГ и АТ смешиваются за счет теплового движения молекул, и они взаимодействуют. При положительном результате на границе двух растворов образуется кольцо непрозрачного преципитата.

Реакцию двойной иммунодиффузии по Оухтерлони проводят в агаровом геле, в лунки которого вносят по схеме либо раствор АГ, либо раствор АТ. АГ и АТ диффундируют в гель навстречу друг другу и при положительном результате реакции образуют иммунные комплексы, видимые как линии преципитации.

Реакция радиальной иммунодиффузии по Манчини отличается от варианта реакции по Оухтерлони тем, что АТ добавляют в агаровый гель, а в лунки - раствор АГ. Последний диффундирует в агаровый гель, и при положительном результате образуется иммунный комплекс в виде кольца преципитации вокруг лунки. Диаметр кольца соответствует определенной концентрации искомого вещества. Этот метод используют, например, для определения концентрации разных классов Ig в сыворотке крови.

Принцип метода иммуноэлектрофореза заключается в предварительном разделения смеси АГ в электрофорезе, которые потом проявляются в реакции преципитации известными иммунными сыворотками.

Реакция флокуляции по Рамону - разновидность реакции преципитации, которую используют для определения количества анатоксина. Расчет ведется в единицах начальной флокуляции по максимальной концентрации исследуемого вещества, дающей положительный результат (помутнение).

РЕАКЦИИ ЛИЗИСА

Реакции лизиса основаны на способности комплемента вызывать цитолиз по классическому пути. Пример -реакция связывания комплемента (РСК). Реакцию проводят в два этапа. На первом этапе АТ взаимодействуют с АГ и комплементом, на втором этапе добавляют индикатор - гемолитическую систему (смесь эритроцитов и антиэритроцитарной сыворотки). При положительном результате на первом этапе АТ образуют с АГ иммунный комплекс, связывающий комплемент реакционной смеси. В этом случае эритроциты гемолитической системы, добавленные на втором этапе, не разрушаются. В противном случае несвязанный комплемент вызывает лизис индикаторных эритроцитов.

Реакция биологической нейтрализации основана на способности АТ блокировать повреждающее действие микроорганизмов или токсинов. Если АТ связываются с микроорганизмом или токсином и нейтрализуют его действие, живые тест-объекты (животные, эмбрионы птиц, культуры клеток) не погибают.