Выделение чистых культур м/организмов. Количественный учет м/организмов.

Чистой культурой м/организмов называют культуру одного вида, выращенного как потомство одной клетки. Методы выделения чистых культур м/организмов основаны на изоляции одной микробной клетки от массы м/организмов и последующем выращивании потомства этой клетки на питательных средах изолированно от других видов.

Наиболее распространенным способом выделения чистых культур является посев смеси микробов на плотные питательные смеси с целью получения отдельных колоний культур, которые считают результатом развития одной клетки. Для посева чаще используют агаризованные Среды в чашках Петри. Основной задачей метода является разведении концентрации м/организмов в исследуемом материале с таким расчетом, чтобы при посеве его на питательную среду выросли изолированные колонии. Существуют два основных метода разведения исследуемого материала: 1) на поверхности плотной питательной Среды; 2) предварительное разведение материала в физиологическом растворе.

Метод на поверхности плотной Среды используется для выделения чистых культур аэробныхи факультативно анаэробных м/организмов. С этой целью для посева берут ряд чашек Петри с плотной средой. В первую чашку наносят мсследуемый материал и распределяют его по поверности шпателем. Затем производят посев последовательно на поверхность Среды в остальных чашках. Количество материала,внесенного в среду, при этом последовательно убывает. Метод предварительного разведения используется для выделения чистых культур м/организмов как аэробных, так и анаэробных. Готовят разведение материалав 10-100 раз и более и производят посев разведений, пользуясь поверхностным или глубинным методом.

Выделение чистых культур строгих анаэробов требует условий выращивания без доступа кислорода.

1. Морфологические свойства – форма клеток, размеры, подвижность, способность к образованию спор, возраст культуры и др.

2. Культурные свойства м/организмов устанавливают по особенностям роста на питательных средах. на жидкихпитательных средах отмечают: характер распределения культуры в жидкости (равномерное, придонное или поверхностное), мутность сред, вид плеки, осадка. На плотных питательных средах исследуют характер колоний. Различают поверхностные и глубинные колонии. Отмечают форму, профиль, блеск и цвет.

3. Физиологические свойства м/организмов обусловлены ферментативной активностью: отношение к кислороду (тип дыхания), тип роста (рост у дна пробирки, рост шляпкой вверх, рост равномерный по всей длине укола).

4. Протеалитические свойства (способность расщеплять белковые вещества) определяют по выделению из питательной Среды газо-продуктов расщепления белка.

Чтобы определить общее количество м/организмов в различных субстратах, выявить и учесть численность представителей отдельных групп и видов м/организмов применяют методы:

1) прямой подсчет клеток под микроскопом (в счетных камерах, на фиксированных окрашенных мазках)

2) выделение и учет высевом на плотные среды

3) выделение и учет высевом на жидкие Среды (метод пред-ых разведений)

Методы прямого подсчета клеток под микроскопом дают возможность учесть численность м/организмов в субстрате полностью. Но при этом определяются всеживые и мертвые клетки. И подсчет может быть не точным. Этот метод не дает представления какие процессы происходят в субстрате. Методами высева на плотные и жидкие Среды учитываются только жизнеспособные клетки м/организмов.

 

Вопросы для самопроверки

1. Какие способы питания живых существ Вы знаете?

2. Что такое «внеклеточное пищеварение»?

3. Какие существуют механизмы поступления питательных веществ в клетку?

4. Каков механизм поступления в клетку воды, газов?

5. Каким путем попадают в клетку простые сахара и аминокислоты?

6. Как прокариоты и эукариоты различаются по механизмам транспорта веществ?

7. Что такое макроэлементы?

8. Каковы потребности микроорганизмов в питательных веществах?

9. Как классифицируют микроорганизмы зависимости от источника углерода и энергии?

10. Какие типы питания Вы знаете?

11. Что такое «культивирование»?

12. Какие способы культивирования микроорганизмов Вы знаете?

13. Чем поверхностное культивирование отличается от глубинного?

14. Что такое «чистая культура» микроорганизма?

15. Как получают и хранят чистые культуры?

16. Дать определение «накопительной культуре» микроорганизма.

17. Каким образом можно получить накопительную культуру?

18. Чем отличается периодическое культивирование от непрерывного?

 

Литература

1.Гусев М.В., Минаева Л.А. Микробиология — М.: Издательский центр «Академия», 2010.

2.Емцев В.Т. Микробиология. Москва, Изд. «Дрофа», 2007.

3.Мармузова Л.В. Основы микробиологии, санитарии и гигиены в пищевой промышленности. – М.: ПрофОбрИздат, 2007.