Микробиологическая диагностика.

Бактериологический: материалом для исследования - испражнения. Для посева отбираются гнойно-кровяные образования из кала, которые при диагностике заболевания высеваются на лактозосодержащие дифференциальные питательные плотные среды. В случае выявления бактерионосителей посев испражнений проводится в селенитовый бульон с выделением возбудителя на плотных лактозосодержащих дифференциальных питательных средах. Среди выросших на этих средах отбирают лактозонегативные колонии, которые идентифицируют до вида и серовара, а выделенные культуры S. flexneri — до подсероваров, S. sonnei — до хемоваров. В качестве вспомогательного используют серологический метод с постановкой РНГА.

Лечение и профилактика: Для лечения - бактериофаг орального применения, антибиотики после определения антибиотикограммы; в случае возникновения дисбактериоза — препараты пробиотиков для коррекции микрофлоры. Не специфическая профилактика.

Возбудитель сальмонелеза.

Сальмонеллы

Таксономия

Отдел	Gracilicutes
Семейство	Enterobacteriaceae
Род	Salmonella
Вид	S. enterica
Подвид	Enterica

 

В составе данного рода выделяют более 2000 сероваров.

В составе подвида Enterica выделяют более 100 сероваров сальмонелл, которые вызывают салмонеллез.

Основными являются:

1. S. enteritidis
2. S. typhimurium
3. S. dublin
4. S. choleraesuis
5. S. derbi
6. S. virhov

Сальмонеллез – острая кишечная инфекция, преимущественно зоонозная. Но есть исключение, человек иногда тоже является источником инфекции. Может протекать в локализованной форме в виде гастроэнтерита, реже, где-то в 5-10 % случаев – генерализовано, по типу септикопиемии.

 

Морфология

Подвижные грамотрицательные палочки. Имеют перитрихиально расположенные жгутики. Спор не образуют. Могут образовывать капсулу или микрокапсулу.

 

Культуральные свойства

По типу дыхания – факультативные анаэробы. Мезофилы. Не прихотливы к питательным средам. Могут расти на следующих средах:

✔ Мясопептонный агар

✔ Мясопептонный бульон

✔ Дифференциально-диагностические среды Эндо, Левина

✔ Селенитовый бульон

✔ Среды с содержанием желчи – элективные среды

✔ Среды с сердечно-мозговой вытяжкой и т.д.

 

Биохимические свойства

Обладают выраженной биохимической активностью. Основные биохимические свойства, необходимые для идентификации:

1. Продуцируют кислоту и газ при ферментации глюкозы
2. Не ферментируют лактозу
3. Продуцируют сероводород
4. Не образуют индол
5. Декарбоксилируют лизин
6. Не расщепляют мочевину
7. Отрицательный тест Фогеса-Проскауэра

 

Антигенная структура

1.Соматический О-антиген

2.Жгутиковый Н-антиген

3.Капсульный К-антиген

 

Факторы патогенности

1.ворсинки IV типа – обеспечивают адгезию

2.эффекторные белки – разрушают клетки, в частности, макрофаги

3.эндотоксин, иногда у некоторых сероваров сальмонелл встречается еще и экзотоксин

Эндотоксин – липополисахарид клеточной стенки, который высвобождается после гибели сальмонелл.

Экзотоксин – имеет белковую природу, синтезируется и секретируется микробной клеткой в процессе жизнедеятельности.

4.ферменты: гиалуронидаза, нейраминидаза.

 

Патогенез

Источник инфекции – больные животные и птицы.

Человек заражается алиментарным путем, т.е. при употреблении инфицированной пищи животного происхождения (мясо, молоко, яйца).

Возбудитель попадает через рот в ЖКТ. Достигает тонкого кишечника, колонизирует и проникает в подслизистый слой. Здесь он захватывается макрофагами. Эффекторные белки разрушают эти макрофаги. Макрофаги погибли, и из них выделились провоспалительные цитокины, в частности, интерлейкин-8 (хемокин), интерлейкин-1В и др. Провоспалительные цитокины привлекают в очаг инфекции другие клетки, в частности, нейтрофилы. Нейтрофилы синтезируют и секретируют простагландины. Простагландины увеличивают уровень цАМФ. цАМФ приводит к гиперсекреции клетками тонкого кишечника ионов натрия и хлора. Эти ионы тянут за собой воду из клеток.

После гибели сальмонеллы выделяется эндотоксин, который активирует арахидоновую кислоту в стенках клеток кишечника. Это приводит опять же к росту простагландинов, а это приводит к увеличению цАМФ. Т.е. у человека усугубляется понос.

Экзотоксин непосредственно активирует фермент – аденилатциклазу, что опять же приводит к росту цАМФ и состояние больного еще в большей степени ухудшается.

При нарушении сопротивляемости организма человека страдает барьерная функция лимфатической системы кишечника и сальмонеллы свободно проходят через стенку кишечника и попадают в кровь.

 

Клиническая картина

Инкубационный период – от 12 до 72 часов.

Салмонеллез – пищевая токсикоинфекция.

Заболевание начинается остро. У больного повышается температура до 38-39. Появляется понос, рвота, интоксикация, боли в животе, обезвоживание, нарушается водно-солевой баланс.

Заболевание может протекать в легкой, средней, тяжелой форме.

Методы диагностики

           Бактериологический метод:

           1.Материал для исследования:

           •при жизни – кал, сыворотка крови;

           •посмертно – трупы мелких животных и птиц, паренхиматозные органы, мезентеральные лимфатические узлы, абортированный плод.

           2.Микроскопия:

           a)методы окраски: 
простой метод, по Граму;

           b)микрокартина: 
палочки с закругленными концами до 4 мкм, располагаются одиночно или попарно;грамотрицательные;спор и капсулу не образуют;подвижны (за исключением S.pullorum).

           3.Культивирование:

           •посев на питательные среды: 
МПА, МПБ, дифференциально-диагностические – Эндо, Левина и др, накопительные;

           Кровь засевают в желчный бульон или среду Рапопорт в соотношении 1:10 (чтобы уменьшить бактерицидные свойства белков крови). На 2-й день проводят пересев на среду Эндо или Левина, или висмут-сульфит агар.
Все сальмонеллы имеют сходные культуральные признаки

           •на МПБ – интенсивное помутнение, образование легко разбивающегося осадка,

           •на МПА – круглые с ровными краями серо-белого цвета колонии,

           •на среде Эндо – бесцветные или розоватые колонии, на среде Левина – светло-фиолетовые колонии.
После выделения чистой культуры лактозоотрицательных бактерий устанавливают их родовую принадлежность, затем дифференцируют до вида и серовара. С этой целью изучают их биохимические свойства и антигенное строение путем постановки пластинчатой реакции агглютинации (серологическая дифференциация).

           Биохимические свойства:

           •обладают высокой сахаролитической активностью; для установления родовой принадлежности проводят посевы на короткий «цветной ряд» (среды Гисса) при этом сальмонеллы ферментируют глюкозу и маннит с образованием кислоты и газа, не расщепляют лактозу и сахарозу;

           •дальнейшее изучение для установления видовой принадлежности проводят путем посевов на длинный «цветной ряд», в состав которого входят углеводы, и другие тесты;

           •сальмонеллы не разжижают желатин, образуют сероводород, не образуют индол;

           4.Биопроба:

в необходимых случаях заражают подкожно белых мышей.

           Серологический метод:

           ◦используют РА с сывороткой крови (кровью)

           ◦используют РА для дифференциации выделенной культуры сальмонелл с целью определения их вида и серовара;

           -РИФ.,также ПЦР и т.д.

Постинфекционный иммунитет

Нестойкий, непродолжительный. Возможно повторное заболевание. Иммунитет не вырабатывается.

 

Лечение

Этиотропное – антибиотики

Симптоматическое – борьба с обезвоживанием, лечение дисбактериоза.

 

Профилактика

Специфическая профилактика среди людей не вырабатывается. Животным и птицам проводят вакцинацию.

Неспецифическая профилактика заключается в соблюдении санитарно-гигиенических правил, мытье рук, выявлении больных, носителей и их лечении, изоляции.

 

!!! Сальмонеллез еще рассматривается как внутрибольничная инфекция. В данном случае источником инфекции является больной человек или носитель.

Путь передачи: воздушно-капельный, контактно-бытовой, алиментарный.

Инкубационный период – от 8 суток до 43 дней.

Сальмонеллы, циркулируя в медицинских учреждениях, приобретают антибиотикорезистентность.

Может протекать в бессимптомной, легкой, локальной, системной форме. Иногда заканчивается летальным исходом.

Иммунитет

Нестойкий. Не вырабатывается.

Лечение

Этиотропное – антибиотики

Симптоматическое – борьба с обезвоживанием, лечение дисбактериоза.

 

Профилактика

Для экстренной профилактики можно назначить поливалентные бактериофаги.

 

Холера

Отдел ​ Gracilicutes

Семейство ​ Vibrionaceae

Род ​ Vibrio

Вид ​ Vibrio cholerae 

Внутри вида ​ Vibrio cholerae различают 2 основных биовара:

1)Vibrio cholerae classic (открыл Кох)

2)Vibrio cholerae El-Tor 

И серовар Vibrio cholerae Bengal (O139)

 

Холера ​ -антропонозная острая инфекционная болезнь,характеризующаяся поражением тонкой кишки,нарушением водно-солевого баланса и интоксикацией.

 

Морфология

 

Холерный вибрион-грамотрицательные мелкие изогнутые палочки,в форме запятой.Не образуют спор и капсулы,монотрих,чрезвычайно подвижен.

 

Культуральные свойства

Является факультативным анаэробом,но больше предпочитает аэробные условия роста,поэтому на поверхности жидкой питательной среды образует пленку.Мезофилы

(37С) рН 8,5-9,0

Для оптимального роста требует присутствие в среде 0,5 NaCl.

Не требовательны к питательным средам,могут расти на простых питательных средах.

Средой накопления является 1% щелочная пептонная вода.

Элективной средой является тиосульфат-цитратный агар,на котором образует колонии желтого цвета.

 

Биохимические свойства

Биохимически активен 

•Оксидазоположителен 

•Обладает протеолетическими и сахоролитическими свойствами:

1)продуцирует индол 

2)разжижает желатин 

3)не продуцирует сероводород 

•Расщепляет углеводы:глюкозу,сахарозу,лактозу,маннозу,крахмал •Не расщепляет некоторые углеводы:рамнозу,инсулин и арабинозу т.д. Триада Хейберга ​:сахароза(+)

                            манноза (+)                             арабиноза (-)

 

 

Антигенная структур ​а

 

В составе клеточной стенки выделяют следующие антигены:

1)соматический О-антиген 

2)жгутиковый Н-антиген 

В зависимости от строения О-антигена различают более 200 серогрупп 

О1 и О139-истинные холерные вибрионы 

Внутри серогруппы О1 в зависимости от сочетания А,В и С субъединиц происходит подразделение на серовары:

1)Огава (АВ)

2)Инаба (АС)

3)Гикошима (АВС)

 

Факторы патогенности

1)ворсинки IV типа или токсин-коррегулируемые пили 

 

Они обеспечивают 

1)колонизацию микроворсинок тонкой кишки 

2) учавствуют в образовании биоплёнки на поверхности панциря гидробионтов 

3)являются рецепторами для конвертирующего бактериофага СТХ

4)эндотоксин и экзотоксин 

Экзотоксин ещё называют холерогеном.Он состоит из 2-х субъединиц -А и В.

Субъединица А обеспечивает активацию фермента-аденилатциклазу. Субъединица В обеспечивает взаимодействие экзотоксина с клетками тонкого кишечника.

 

3)фермент -нейроминидаза 

4)эндотоксин активирует арахидоновую кислоту -секреция простагландинов 

 

Патогенез ​.

Заражение происходит перорально. Большинство вибрионов гибнет в кислой среде желудка. Однако при снижении желудочной секреции вибрионы проходят через желудок, попадают в тонкую кишку, где прикрепляются к энтероцитам, размножаются и поражают их ферментные системы без развития воспалительного процесса. Ведущую роль в патогенезе играет холероген, который нарушает водно-солевой обмен, приводит к резкому обезвоживанию организма и ацидозу.

 

Клиника ​:

Заболевание развивается стадийно(3 стадии,и с каждой происходит нарастание тяжести заболевания)

Инкубационный период от нескольких часов до 5 суток. Заболевание начинается остро, часто внезапно, повышение температуры,появляется рвота,понос,боли в животе,тенезмы,стул имеет вид рисового отвара.

 

Иммунитет ​:непрочный,непродолжительный Профилактика ​:

Специфическая:убитая холерная вакцина и комплексный препарат,состоящий из холерогена-анатоксина 

Неспецифическая:проведение карантинных мероприятий,санитарно/гигиеническая правила.

 

Лечение

1)антибиотики

2)симптоматическое

 

Стафилококки.

Таксономия

Отдел ​ Firmicutes

Семейство ​ Micrococcaceae

Род ​ Staphylococcus 

Вид ​ S.aureus 

    S.epidermidis

    S.saprophyticus 

    S.intermidius 

    S.haemolyticus 

 

Стафилококки-грамположительные кокки,которым в чистой культуре свойственно скопление в виде гроздьев винограда (характерно деление в разных плоскостях).Неподвижны,спор не образуют,могут образовывать микрокапсулу.

 

Культуральные свойства:

Стафилококки растут на простых питательных средах(МПА,МПБ)однако являются галофильными:хорошо размножаются при высоких концентрациях NaCl(10-15%),что используется при изготовлении элективной среды-желточно-солевого агара.Стафилококки чувствительны к анилиновым красителям.

 

Биохимические свойства

1)стафилококки продуцируют ​ каталазу ​,которая обеспечивает защиту от губительного действия производных кислорода.

2)синтезирует каротиноидные пигменты(определяют золотистый,белый и другие цвета),которые также защищают от оксидантов.

3)множественная устойчивость к антибиотикам:в-лактамам,эритромицину,тетрациклину и т.д.(синтез в-лактамаз)

 

Антигены

1)соматический О-антиген

2)капсульный К-антиген

 

Антигенными свойствами обладают структуры клеточной стенки:тейхоевые кислоты,пептидогликан и белок А. Капсульный антиген находится в микрокапсуле.

 

Факторы патогенности ​:

1)адгезины (прикрепление к различным веществам и клеткам организма)

2)тейхоевые кислоты ответственны за адгезию к эпителиальным клеткам.Из

S.epidermides выделен специфический полисахарид,обеспечивающий прикрепление стафилококка к протезам,ортопедическим стержням и другим трансплантатам.

3)микрокапсула подавляет фагоцитоз и способствует адгезии.

4)белок А-связывает Fc-фрагменты антител,блокируя их опсоническую активность.

5)медиаторы межмикробного взаимодействия

(бактериоцины,бактериолизины,феромоны -сигнальные белковые молекулы,регулирующие плотность популяции)

 

Обладает

•Антилизоцимной активностью 

•Антиинтерфероновая активность 

•Антикомплементарная активность 

•Антиоактоферриновая активность 

•Антигемоглобиновая активность 

 

Экзотоксины ​:

•Гемолизины альфа,Бетта,гамма и сигма(знакомо написать)-образуют каналы в ЦПМ форменных элементов,нарушая осмотическое давление и приводя к лизису.

•Энтеротоксин (A-F)вызывают пищевую интоксикацию.

•Экзотоксин,вызывающий синдром токсического шока.

•Эксфолиативный токсин -разрушает межклеточные контакты в эпидермисе и образование изъязвляющихся пузырей -синдром «ошпаренной кожи»

 

Ферменты патогенности:

Экзоферменты защиты и агрессии:

1)плазмокоагулаза 

2)катализа

3)гиалуронидаза 

4)ДНКаза 

5)мурамидаза 

6)нейроминадаза 

7)уреаза,которой обладает S.saprophyticus 

 

Патогенез

Стафилококки поражают любые органы и системы организма,вызывают сепсис,септикопиемию,токсинемию.

 

Лабораторная диагностика

 

Материал -мокрота,кровь,моча,рвотные массы, гнойное отделяемое.

1)Основным методом является ​ бактериологический  

 

При постановке бактериологического метода основное внимание уделяется патогенности стафилококков